氣相色譜法同時測定蒼芩鼻炎合劑中桉油精和薄荷腦含量

鄺明，何家，張謹賢

（四川省瀘州市食品藥品檢驗所，四川瀘州 646000）

氣相色譜法同時測定蒼芩鼻炎合劑中桉油精和薄荷腦含量

鄺明，何家，張謹賢

（四川省瀘州市食品藥品檢驗所，四川瀘州 646000）

目的建立同時測定蒼芩鼻炎合劑中桉油精及薄荷腦含量的氣相色譜法。方法按揮發油測定法提取桉油精、薄荷腦。采用安捷倫DB－WAX毛細管柱（30 m×0.320 mm，0.25 m）分離，氮氣為載氣，FID檢測器，柱溫為程序升溫，初始溫度為75℃，保持8 min，以4℃／min的速率升至150℃，再以20℃／min速率升至200℃，保持5 min，流速為1.5 mL／min，進樣口溫度為200℃，分流比為20∶1，檢測器溫度為250℃。結果桉油精、薄荷腦質量濃度分別在5.364～536.4 g／mL(r＝0.999 9，n＝6)和5.102～510.2 g／mL（r＝0.999 9，n＝6）范圍內與峰面積線性關系良好；桉油精平均回收率為94.75%，RSD為1.80%（n＝6），薄荷腦平均回收率為95.29%，RSD為1.01%（n＝6）。結論該方法準確度高，重復性好，滿足同時測定桉油精、薄荷腦含量的要求。

蒼芩鼻炎合劑；桉油精；薄荷腦；氣相色譜法

蒼芩鼻炎合劑由蒼耳子、辛夷、川芎、麻黃、黃芩、白芷、梔子、黃芪、防風、甘草、薄荷油等11味中藥組方，具有清肺利濕、通竅止痛的功效，臨床主要用于急慢性鼻炎、鼻竇炎、過敏性鼻炎、鼻源性頭痛。方中辛夷與薄荷油所含的揮發油成分桉油精及薄荷腦均有抗菌抗炎作用[1－4]。原質量標準中僅有對黃芩及梔子的鑒別檢查，而未收載其他有效成分的含量測定方法。文獻[5－16]中采用氣相色譜法測定揮發油成分桉油精、薄荷腦含量，但尚無文獻報道同時測定桉油精、薄荷腦成分含量的方法。本研究中對已有揮發油提取法進行選擇，同時進一步優化色譜條件，使其滿足能同時測定桉油精、薄荷腦的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1.2 試藥

桉油精對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110788－201506）；薄荷腦對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110728－200506）；蒼芩鼻炎合劑（瀘州醫學院附屬中醫醫院自制，批號為20110617，20110711，20110822）；正己烷為分析純（西隴化工股份有限公司，批號為130105）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：AgilentDB－WAX毛細管柱（30m×0.320mm，0.25 μm）；載氣：氮氣；流速：1.5 mL／min；柱溫：程序升溫，初始溫度75℃，保持8 min，以4℃／min的速率升至150℃，再以20℃／min的速率升至200℃，保持5 min；進樣口溫度：200℃；分流比：20∶1；檢測器溫度：250℃；進樣量：1 μL。理論板數按桉油精素計算應不低于40 000。色譜圖見圖1，結果陰性對照品溶液在桉油精素峰相應位置無干擾。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

稱取桉油精對照品53.64 mg、薄荷腦對照品51.02 mg，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加入正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取10 mL對照品貯備液，置20 mL容量瓶中，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液[2]

從公式(4)可以看出，玻璃片質量差越大、被測組分含量越高，校正前后的誤差越大。所以對高含量組分的校正有顯著的效果。事實上，對于玻璃片質量差較小，或含量較低的組分也應該進行玻璃片質量校正，因為對于具體的樣品與校準曲線玻璃片的質量差導致的被測組分測量結果的誤差是一個系統誤差。

精密量取供試品250 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加玻璃珠數粒，照揮發油測定法試驗，加正己烷3 mL，加熱至沸騰并保持微沸5 h，放冷，分取正己烷液，測定器用正己烷洗滌3次，每次5 mL，合并正己烷液，通過鋪有無水硫酸鈉的漏斗，轉移至20 mL容量瓶中，用正己烷洗滌漏斗，洗液并入同一容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液

按照處方制成蒼芩鼻炎合劑方中缺辛夷、薄荷油的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取桉油精對照品貯備液(1 072.8 μg／mL)、薄荷腦對照品貯備液（1 020.4 μg／mL）0.1，1，2，3，5，10 mL，置20 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，得系列質量濃度溶液。精密吸取1 μL上述各質量濃度溶液，按擬訂色譜條件測定，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X）為橫坐標進行線性回歸，結果見表1。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣6次，測定，記錄峰面積。結果桉油精、薄荷腦峰面積的RSD分別為1.10%和0.68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，置室溫下，分別于0，2，4，8，12，24 h時按擬訂色譜條件測定，記錄峰面積。結果桉油精、薄荷腦峰面積的RSD分別為1.30%和0.74%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定。

重復性試驗：精密量取同一批樣品，依法制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件測定。結果桉油精平均含量為0.891 μg／mL，RSD為1.30%（n＝6），薄荷腦平均含量為38.6 μg／mL，RSD為0.57%（n＝6），表明方法重復性好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的樣品（批號為20110711）6份，分別精密加入桉油精、薄荷腦不同質量濃度混合溶液，按擬訂色譜條件測定，計算回收率。結果見表2。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按擬訂色譜條件，測定含量。結果批號為20110617，20110711，20110822的3批樣品中桉油精含量分別為0.891，0.902，0.914 μg／mL，薄荷腦含量分別為38.6，39.2，40.1 μg／mL。

3 討論

3.1 提取方法選擇

蒼芩鼻炎合劑采用11味中藥材浸泡煎煮，同時收集揮發油，煎液濃縮濾過后，濾液加入上述揮發油及薄荷腦的工藝，制劑中揮發油的成分經過提取后已較單一。根據現有揮發油的提取方法[17]，選用蒸餾法提取蒼芩鼻炎合劑中揮發油成分，能有效提取目標物，可去除大部分雜質干擾。通過試驗表明，提取時間與提取物濃度成線性關系。提取1，2，3 h的含量均有升高趨勢，提取5 h后揮發油成分含量結果穩定。故本方法確定提取時間為5 h。

表1 線性關系考察結果(n＝6)

表2 加樣回收試驗結果（n＝6）

3.2 色譜條件優化

據資料顯示，桉油精（1，3，3－三甲基－2－氧雜雙環[2.2.2]辛烷）為單萜類化合物，其沸點為176～178℃，與薄荷腦（L－1－甲基－4－異丙基環己醇－3）沸點216℃都具有極性基團。如進樣口溫度過低，樣品會氣化不充分，測定結果RSD偏高，而進樣口溫度過高，樣品會分解。本次試驗進樣口選用200℃氣化溫度，襯管帶有脫活玻璃棉起到增加樣品表面積、加速樣品氣化的同時過濾不揮發物質的作用。根據此次試驗樣品的質量濃度與柱容量綜合考慮，過高分流比會使峰響應值降低，而過低分流比使分流氣路的比例閥無法精確控制，會影響分析的精度，色譜柱也有超載可能，最終分流比設定為20∶1。試驗中還分別選擇高、中、低3種不同極性色譜柱DB－WAX，DB－1701，HP－1對樣品進行分離，結果后二者對目標物保留效果不明顯，峰形與分離度與使用極性柱DB－WAX比較有較大差距。而使用DB－WAX毛細管柱對目標物分離，桉油精與薄荷腦理論板數分別達到46 000與490 000，分離度為100，同時與未知成分分離完全，能滿足試驗的需要。柱溫起始溫度低于沸點溫度，使目標成分富集于色譜柱頭，桉油精與薄荷腦沸點相差明顯，選擇程序升溫，提高了不同沸點樣品的分離度，減少樣品分析時間。桉油精與薄荷腦含有較多的低氧化碳數目，選擇FID檢測器目標分析物也會響應充分。為減少對檢測器的污染，溫度應高于進樣口溫度，此次試驗采用FID檢測器，溫度設置為250℃。

本試驗中建立了氣相色譜同時測定蒼芩鼻炎合劑中桉油精、薄荷腦含量的方法，并對方法進行了驗證，結果操作簡便、準確，提高了分析效率，為該制劑的質量控制研究提供了參考資料。

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Simultaneous Content Determination of Eucalyptol and M enthol in Cangqin Biyan M ixture by GC

Kuang Ming,He Qijia,Zhang Jinxian
(Luzhou Institute for Drug and Food Contorl,Luzhou,Sichuan,China646000)

Objective Toestablish a method forsimultaneous determination of eucalyptol and menthol inCangqinBiyanMixture.M ethodsEucalyptol and menthol was extracted by steam distillation.The capillary column was Agilent Db－Wax(30 m×0.320 mm, 0.25 μm).The carrier gas was nitrogen and FID as detector.The initial column temperature was kept at 75℃for 8 min with an increase of 4℃／min to 150℃,then 20℃／min to 200℃(sustained for 5 min).The flow rate was 1.5 mL／min,the injector temperature was 200℃,20∶1 of split ratio and the detector temperature was 250℃.ResultsThe mass concentration of eucalyptol and menthol were linear in the range of 5.364－536.4 μg／mL(r＝0.999 9,n＝6)and 5.102－510.2 μg／mL(r＝0.999 9,n＝6).The average recovery rate of eucalyptol was 94.75%,RSD was 1.80%(n＝6).The average recovery rate of menthol was 95.29%,RSD was 1.01%(n＝6).ConclusionThe method is simple,accurate and well reproducible,which is suitable for the simultaneous content determination of eucalyptol and menthol.

Cangqin Biyan Mixture;eucalyptol;menthol;GC

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)01－0025－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.008

2016－09－23；

2016－10－07)

鄺明（1982－），大學本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0830－2599102（電子信箱）18126018＠qq.com。