高效液相色譜法測定左旋四氫巴馬汀自微乳中左旋四氫巴馬汀含量

梁淑貞，丁少波，鐘李青，何瑞榮

（廣東省東莞市人民醫院藥學部，廣東東莞 523000）

高效液相色譜法測定左旋四氫巴馬汀自微乳中左旋四氫巴馬汀含量

梁淑貞，丁少波，鐘李青，何瑞榮

（廣東省東莞市人民醫院藥學部，廣東東莞 523000）

目的建立測定左旋四氫巴馬汀自微乳含量的高效液相色譜法。方法色譜柱采用Phenomenex Desc Gemini－NX 5 C18柱(250 mm×4.6 mm，5 m，110?)，流動相為0.1%磷酸溶液（三乙胺調pH至6.32）－甲醇（35∶65），檢測波長為280 nm，進樣量為10 L，流速為1.0 mL／min，柱溫為30℃。結果左旋四氫巴馬汀質量濃度在0.1～1.0 g／L范圍內與峰面積線性關系良好（r＝0.999 9)；精密度試驗RSD為0.38%；穩定性試驗RSD為0.96%；重復性試驗左旋四氫巴馬汀的含量為91.81%，RSD為0.58%；回收試驗平均回收率為99.97%，RSD為0.60%（n＝9)。結論該方法簡便、靈敏、重復性好，結果準確、可靠，可作為左旋四氫巴馬汀自微乳的質量控制方法。

高效液相色譜法；左旋四氫巴馬汀自微乳；含量測定

左旋四氫巴馬汀是常用的鎮靜、止痛藥，其還對心肌損傷、腦損傷有保護作用，具有抗心律失常的功效。也有研究表明，左旋四氫巴馬汀能提高海洛因成癮者的戒毒率[1－2]。但由于其水溶性極差，口服生物利用度極低，故其口服制劑應用受到限制[3]。自微乳化藥物傳遞系統(self－emulsifying drug delivery system，SEDDS)是一種新型藥物傳遞系統，藥物溶解于載體中，口服給藥后在胃腸道的蠕動下自發形成O／W型微劑，粒徑10～100 nm。SEDDS能提高難溶性藥物的溶解度，增加細胞膜的流動性，促進藥物淋巴吸收，從而提高藥物的生物利用度[4]。為了控制左旋四氫巴馬汀自微乳的質量，本研究中建立了左旋四氫巴馬汀自微乳的含量測定方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)； SHB－Ⅲ型循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司）；SHA－CA型數顯水浴恒溫振蕩器（金壇市易辰儀器制造有限公司）；FA2004型電子分析天平；TDL－5A型高速離心機（上海菲恰爾分析儀器有限公司）；KQ－500DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

左旋四氫巴馬汀對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100452－200301）；左旋四氫巴馬汀原料藥（西安開來生物工程有限公司，純度≥98%，批號為K120105，K120106）；聚乙二醇400(PEG400，西隴化工股份有限公司，批號為130115）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 自微乳制備

稱取左旋四氫巴馬汀原料藥200 mg(主藥)，乙酸異丙酯10 g(輔料)，OP乳化劑10 g(輔料)，PEG400 1 g (輔料)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，于（37±0.5）℃恒溫水浴振蕩至原料藥完全溶解，制成自微乳，稱重。平行制備3批左旋四氫巴馬汀自微乳。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[5－16]

色譜柱：Phenomenex Desc Gemini－NX 5 μ C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，100?)；流動相：0.1%磷酸溶液（三乙胺調pH至6.32）－甲醇（35∶65）；檢測波長：280 nm；進樣量：10 μL；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃。

2.2.2 溶液制備

對照品溶液：取左旋四氫巴馬汀對照品50 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為1 g／L的對照品貯備液。

供試品溶液：取2.1項下左旋四氫巴馬汀自微乳2 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

空白自微乳溶液：取2.1項下左旋四氫巴馬汀自微乳處方量輔料，置具塞錐形瓶，于37℃恒溫水浴振蕩2 h，取2 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取2.2.2項下3種溶液，按擬訂色譜條件分別進樣測定，色譜圖見圖1。結果表明，左旋四氫巴馬汀自微乳對照品溶液與供試品溶液的保留時間一致，空白自微乳溶液在相應位置無干擾峰出現，同時主峰與其他組分分離完全，拖尾因子在0.95～1.05，分離度大于1.5，理論板數計算不低于3 000。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 g／L的系列對照品溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，以進樣質量濃度（X，g／L)為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝436.58X＋0.947 2，r＝0.999 9(n＝6)。結果表明，左旋四氫巴馬汀質量濃度在0.1～1.0 g／L范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取線性關系考察項下質量濃度為0.4 g／L的對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果峰面積分別為176.7，177.0，176.5，176.1，176.9，178.1，平均176.9，RSD為0.38%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復性試驗：取同一批（批號為160404）左旋四氫巴馬汀自微乳，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件連續進樣測定。結果左旋四氫巴馬汀的含量分別為90.97%，91.92%，92.56%，92.11%，91.64%，91.74%，平均91.81%，RSD為0.58%（n＝6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液于室溫放置，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時按擬訂色譜條件進樣測定。結果左旋四氫巴馬汀峰面積分別為164.8，166.9，165.9，167.2，168.8，168.9，平均167.1，RSD為0.96%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下12 h內穩定。

加樣回收試驗：取同一批（批號為160404）左旋四氫巴馬汀自微乳1 g，共9份，精密稱定，置50 mL容量瓶中，并分別精密加入左旋四氫巴馬汀對照品6，8，10 mg，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取3批（批號為160404，160405，160406）左旋四氫巴馬汀自微乳，依法制備供試品溶液，進樣測定，計算含量。結果見表2。

3 討論

3.1 流動相選擇

左旋四氫巴馬汀不溶于水，可溶于甲醇，故用含65%甲醇的流動相溶解，流動相中加入三乙胺可改善主峰的拖尾現象。該制劑是O／W型乳劑，在流動相中溶解性能很好，且不影響左旋四氫巴馬汀的含量測定。曾考察甲醇－磷酸鹽溶液、甲醇－水溶液、甲醇－磷酸溶液、乙腈－磷酸溶液，有機相占60%以上，大部分用了三乙胺等掃尾劑。甲醇與水的流動相組合預試驗發現，峰形不佳；甲醇－磷酸鹽流動相系統峰形較好，樣品測定也未見有干擾，但流動相對于樣品的溶解效果不是很好，需要超聲處理；甲醇－磷酸溶液流動相系統未加三乙胺時峰形不好，考慮加入掃尾劑。采用單因素對照試驗優選加入三乙胺的量，最終流動相pH為6.3時，峰形最佳，且流動相對供試品的溶解較好。

表1 左旋四氫巴馬汀加樣回收試驗結果（n＝9）

表2 樣品含量測定結果(n＝3，%)

3.2 處方篩選

通過溶解度試驗篩選油相、乳化劑和助乳化劑，并以乳化時間、色澤和乳化顆粒形態為指標，通過偽三相圖的繪制，篩選最佳處方及配比，制備空白自微乳及左旋四氫巴馬汀自微乳。

3.3 波長選擇

有文獻顯示，通過全波長掃描試驗，結果281 nm波長處有最大吸收峰。故選擇280 nm作為檢測波長，且無干擾峰出現，方法學考察結果較好。

左旋四氫巴馬汀屬生物堿類，難溶于水，口服生物利用度較低，受光熱極易氧化為巴馬汀，故含量測定時對樣品的處理不能采用加熱溶解的方式。高效液相色譜法測定含量快速、準確，樣品的處理經過溶解即可。方法學考察各項指標符合規定，精密度、穩定性、準確度都符合要求，可作為乳劑生產過程的質量控制和檢測方法，也可作為自微乳成品的質量標準。

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Content Determination of L－Tetrahydropalmatine in L－Tetrahydaopalmatine Self－Microemulsion by HPLC

Liang Shuzhen,Ding Shaobo,Zhong Liqing,He Ruirong
(Department of Pharmacy,Dongguan People′s Hospital,Dongguan,Guangdong,China523000)

Objective To establish a content determination method of L－tetrahydropalmatine in L－tetrahydaopalmatine Self－Microemulsion by HPLC.MethodsThe column was Phenomenex Desc Gemini－NX 5 μ C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm,110?);the mobile phase consisted of 0.1%phosphoric acid solution(pH adjusted to 6.32 with triethylamine)and methanol(35∶65);the detection wavelength was set at 280 nm;the injection volume was 10 μL;the flow rate was 1.0 mL／min and the column temperature was 30℃.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.1 to 1.0 g／L(r＝0.999 9);RSD of accuracy was 0.38%,and the RSD of stability was 0.96%.The content of L－tetrahydropalmatine was 91.81%and the RSD was 0.58%in the repeatability test.The recovery rate of L－tetrahydropalmatine was 99.97%and the RSD was 0.60%(n＝9)in the recovery test.ConclusionThe method is simple,sensitive,reproducible,accurate and reliable,which can be used as a quality control method for L－tetrahydropalmatine self－microemulsion.

HPLC;L－tetrahydropalmatine Self－Microemulsion;content determination

R927.2；R971＋.3

A

1006－4931(2017)01－0028－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.009

2016－10－01；

2016－11－21)

梁淑貞，大學本科，主管藥師，主要從事醫院藥學工作，（電子信箱）120714659＠qq.com。