固相萃取—液相色譜法測定食用植物油中苯并（α）芘含量

續(xù)穎++劉雪瑩++伍鎣++麥亨++黃秋娜++何聰容

摘 要：該研究建立了使用固相萃取（SPE）小柱替代人工填充中性氧化鋁玻璃層析柱、并通過對洗脫溶劑的優(yōu)化進(jìn)行預(yù)處理，采用高效液相色譜法檢測食用植物油中苯并（α）芘的含量。目標(biāo)物經(jīng)過洗脫后，用液相色譜進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在1～20μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 95；檢出限為0.15μg/kg，回收率達(dá)到93%～100%，該方法準(zhǔn)確、靈敏，適用于各類植物油的苯并芘含量分析。

關(guān)鍵詞：食用植物油苯并（α）芘（Bap）；固相萃取；高效液相色譜法

中圖分類號(hào) TS227 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2017）06-0163-02

1 引言

食用植物油是人們?nèi)粘Ｉ畋匦枋称分唬秤糜椭斜讲ⅲé粒┸湃舫鱿蘖繕?biāo)準(zhǔn)，會(huì)造成對人們的身體健康造成不可逆轉(zhuǎn)的傷害，被認(rèn)為是高活性致癌劑，過量食入后將對人體造成嚴(yán)重的影響，因此各國對食用油中苯并（α）芘都有嚴(yán)格的使用限量規(guī)定。食用植物油苯并（α）芘以往采用人工填充中性氧化鋁玻璃層析柱，樣品前處理繁瑣、時(shí)間長、消耗的試劑多，操作損失高，準(zhǔn)確性和回收率均不理想。本文使用SPE小柱替代人工填充中性氧化鋁玻璃層析柱、并通過對洗脫溶劑的優(yōu)化進(jìn)行預(yù)處理，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)樣進(jìn)行檢測，以期建立簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑 Agilent 1260液相色譜儀（配熒光檢測器），Sartorius BSA124S電子天平，Anpel DC-24氮吹儀，Vortex XH-B漩渦混勻器，昆山市超聲儀器 KQ-300TDV超聲波清洗器，Waters 20位固相萃取裝置，Anpelcnw BAP苯并（α）芘SPE小柱。正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙腈（色譜純），實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水。苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)品（1mg/mL），Anpel。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 準(zhǔn)確吸取苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)品0.1mL于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，濃度為10μg/mL。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液1 準(zhǔn)確吸取0.1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，濃度為0.1μg/mL。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液2 將標(biāo)準(zhǔn)工作液1用丙酮稀釋成1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.3 液相色譜參考條件 色譜柱：多環(huán)芳烴分析柱，4.6mm×250mm，粒度5μm；進(jìn)樣量：20μL；流動(dòng)相∶乙腈∶水為9∶1（體積比）；流速：1mL/min；柱溫：30℃；熒光檢測器：發(fā)射波長410nm，激發(fā)波長380nm。

2.4 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取0.5g植物油樣于燒杯中，加入3mL正己烷后充分混勻溶解，待凈化；把SPE小柱裝入固相萃取裝置中，依次用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化小柱；將待凈化液上樣到小柱上，再用2mL正己烷潤洗燒杯，也上樣到柱上；用10mL正己烷分兩次潤洗燒杯并轉(zhuǎn)移到小柱上，淋洗小柱，棄去淋洗液；用5mL二氯甲烷洗脫，并用玻璃離心管收集；在40℃下氮?dú)獯蹈桑埔簶寽?zhǔn)確加入1mL乙腈定容；將定容好的分析液超聲1min，再旋渦混合10s，轉(zhuǎn)移到樣品瓶中，待上機(jī)檢測。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 將濃度為1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)測定，根據(jù)峰的積分面積繪制5點(diǎn)校正曲線。獲得線性回歸方程為

y=31.132 85x+3.345 26，線性范圍為1.0～20μg/L，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 95。

3.2 方法的準(zhǔn)確度與精密度

3.2.1 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 選取市售2款花生油進(jìn)行測定，平行測定6次，測得樣品中苯并（α）芘的重復(fù)性及RSD見表1，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性。

3.2.2 精密度試驗(yàn) 取市售陰性樣品，分別進(jìn)行3個(gè)濃度的加標(biāo)試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)濃度樣品平行測定6次，測得回收率見表2，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度。

3.3 方法的檢出限及定量限 取陰性樣品作為加標(biāo)試樣，加標(biāo)量為1μg/kg。對該加標(biāo)水平進(jìn)行10次平行測定，數(shù)據(jù)見表3。由表3可知，方法檢出限為0.15μg/kg，方法定量限為0.50μg/kg。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為1.0～20μg/kg，濃度為1.0μg/kg的樣品10次平行平均值為0.94μg/kg，回收率為94%，故設(shè)定本檢測中心的報(bào)告限為1.0μg/kg，即可滿足檢測中心各類樣品限值要求。

4 結(jié)論

本研究通過對食用油脂苯并（α）芘含量檢測方法進(jìn)行優(yōu)化，選用了固相萃取法作為測定植物油中苯并（α）芘的前處理方法，實(shí)驗(yàn)步驟簡單，試劑消耗量少，檢測時(shí)間大大縮短，檢測成本低，并且方法重現(xiàn)性良好、加標(biāo)回收率較高，具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，從而為食用植物油的安全性檢測提供了技術(shù)保障。

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