TRAP1在食管癌中的表達及對預后的影響

李 純，劉 靜，關正元，馮倩倩

TRAP1在食管癌中的表達及對預后的影響

李 純1，劉 靜2，關正元1，馮倩倩1

目的 探討TRAP1表達與食管癌臨床病理特征及預后的關系。方法 采用免疫組化法檢測TRAP1在60例食管癌組織及對應癌旁組織中的表達，并分析其表達水平與臨床病理特征的關系，用Kaplan-Meier和Cox回歸對食管癌患者進行生存分析。結果 TRAP1在食管癌組織中的陽性率為55.0%，蛋白相對表達量為2.7±1.1；癌旁組織中的陽性率為11.7%，蛋白相對表達量為0.5±0.4，TRAP1在食管癌組織中的表達顯著高于癌旁組織(P<0.05)。TRAP1表達與患者性別、年齡、發病部位、分化程度、病理類型無明顯相關性(P>0.05)，與復發轉移及TNM分期相關(P<0.05)。TRAP1陰性患者的平均生存時間為69.0個月(95%CI：60.2～77.9)，TRAP1陽性患者的平均生存時間為34.2個月(95%CI：24.4～44.1)，TRAP1高表達與食管癌術后生存期短相關(P<0.05)。結論 TRAP1在食管癌組織中過表達且與食管癌的進展及預后相關。

食管腫瘤；TRAP1；預后；免疫組織化學

食管癌是一種常見的惡性腫瘤，我國是全球食管癌的高發地區，2012年食管癌的新發和死亡病例高達22.3萬例和19.7萬例，約占全球發病和死亡人數的一半，食管癌嚴重威脅我國人群的健康。由于食管癌早期無明顯臨床癥狀，患者就診時往往已是中晚期，故預后較差，我國食管癌的5年生存率約20%[1]。因此深入了解和探討食管癌發生、發展的影響因素，尋找食管癌的防治靶點具有重要意義。腫瘤壞死因子受體相關蛋白1(tumor necrosis factor receptor associated protein 1, TRAP1)是熱休克蛋白90(HSP90)家族的重要成員，有研究表明，TRAP1在腫瘤細胞內調控能量代謝發揮重要作用，干擾TRAP1可導致腫瘤細胞凋亡，而對正常的細胞卻無影響，因此TRAP1作為治療腫瘤的靶點，備受人們關注。研究證明，TRAP1表達異常與腎癌[2]、食管癌[3]、前列腺癌[4]、結腸癌[5]、卵巢癌[6]等多種腫瘤相關。本文旨在探討TRAP1在食管癌中的表達及與患者預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集中日友好醫院和武警總醫院2011年1月～2013年12月存檔的60例食管癌標本，所有病例均經患者同意，在不影響病理檢測的前提下，從手術切除部分分別取下約1 g的食管癌組織和癌旁組織，癌組織經病理切片確定其病理類型，癌旁組織是取自于同一患者手術切除部分的距離癌組織大于5 cm的組織，經病理切片證實無癌變。根據《美國腫瘤聯合委員會癌癥分期手冊(第7版)》相關組織學分型和臨床病理分期標準進行嚴格的病理診斷并判斷腫瘤轉移。所有患者術前均未行放、化療。其中男性45例，女性15例；年齡45～71歲，中位年齡為56歲；TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期15例，Ⅲ期38例；病理類型：鱗癌52例，非鱗癌8例；病理組織分級：高+中分化15例，低分化45例；發病部位：食管上段3例，食管中段17例，食管下段39例；術后復發轉移5例，無復發轉移55例。

1.2 免疫組化 60例標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片、脫蠟等。免疫組化染色采用SP法，具體操作按試劑盒說明書進行。所有抗體均購自北京中杉金橋公司。所有切片的觀察均由兩名病理科醫師獨立完成，選擇具有代表性的高倍視野(400×)，計數視野內陽性細胞占所有腫瘤細胞的百分比，其標準：陽性細胞數<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；染色強度則依據染色的深度為標準：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分(圖1)。將兩項得分結果相乘：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～6分為中等陽性()，6分以上為強陽性()，以≥2分為陽性，<2分為陰性。

圖1 染色強度評分標準：A.無陽性染色為0分；B.淡黃色為1分；C.棕黃色為2分；D.棕褐色為3分，SP法

1.3 統計學分析 應用SPSS 21.0軟件進行統計學分析。計量資料服從正態分布時采用均數和標準差描述，差異的比較采用配對樣本t檢驗，不符合正態分布時采用中位數和四分位數間距進行描述，差異的比較采用秩和檢驗，計數資料的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，分析TRAP1與臨床病理特征的關系二元Logistic，生存分析用Kaplan-Meier，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 TRAP1在食管癌及癌旁組織中的表達 60例食管癌組織中33例TRAP1蛋白陽性，陽性率為55.0%；60例食管癌旁組織中7例TRAP1蛋白陽性，陽性率為11.7%，TRAP1在食管癌組織和癌旁組織中陽性率差異有統計學意義(P<0.05，表1)。根據免疫組化計分結果，在60例食管癌組織中，TRAP1蛋白的相對表達量為2.7±1.1；在60例癌旁組織中，TRAP1蛋白的相對表達量為0.5±0.4，TRAP1在食管癌組織和癌旁組織中的相對表達量差異有統計學意義(P<0.001)。上述結果提示TRAP1蛋白在食管癌組織中的表達顯著高于癌旁組織(圖2)。

表1 TRAP1蛋白在食管癌和癌旁組織中的表達

圖2 TRAP1基因在食管癌和癌旁組織中的表達：A.癌旁組織；B.食管癌組織，SP法

2.2 TRAP1表達與食管癌臨床病理特征的關系 TRAP1表達與患者性別、年齡、發病部位、分化程度、病理類型無明顯相關性(P>0.05)，與復發轉移及TNM分期顯著相關(P<0.05，表2)，提示TNM分期高的食管癌組織中TRAP1表達水平高于分期低者，發生復發轉移患者的TRAP1表達水平顯著高于未發生復發轉移者。

表2 TRAP1表達與食管癌臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 TRAP1表達與食管癌患者預后的關系 統計分析結果顯示，患者性別、年齡、病理類型、復發轉移與食管癌患者術后生存期無關(P>0.05)，發病部位、TNM分期、TRAP1表達與食管癌患者術后生存期相關(P<0.05，表3)。其中TRAP1陰性者的平均生存時間為69.0個月(95%CI：60.2～77.9)，TRAP1陽性者的平均生存時間為34.2個月(95%CI：24.4～44.1)(表3，圖3)，TRAP1陽性者的術后生存時間顯著低于TRAP1陰性者(P<0.05)。

表3 食管癌各臨床病理特征與生存率的關系

圖3 食管癌患者術后生存時間與TRAP1基因表達的關系

3 討論

TRAP1也稱HSP75，是HSP90家族的重要成員之一。TRAP1蛋白是由645個氨基酸構成，包含ATP結合區域，ATP在此結合區域與γ-磷酸基團結合，進而發揮其作用[7]。有研究證明，TRAP1蛋白在心臟、腎臟、肝臟、胃腸道、骨骼肌等組織中廣泛表達，其主要表達于線粒體內膜上[8-10]。TRAP1的主要功能包括：(1)阻止受損蛋白解折疊，促進變性蛋白重折疊，抑制活性氧族ROS(reactive oxygen species)功能，進而維持線粒體的完整和功能；(2)調控線粒體凋亡通路，包括對開放線粒體轉換孔的客戶蛋白(client proteins)及親環素D(cyclophillin D)的折疊以及對其穩定性的調控[11-12]和對內質網上特定客戶蛋白的質量控制，大部分客戶蛋白均是調控線粒體凋亡的重要因子[13-14]；(3)調控線粒體呼吸作用與有氧糖酵解之間的代謝轉化。

TRAP1在腫瘤細胞中過表達能夠影響腫瘤的進展，包括抑制細胞凋亡、促進細胞產生耐藥性、維持營養剝奪狀態下的腫瘤能量產生等。其作用機制主要有以下幾方面：(1)TRAP1能夠通過抑制AMPK的活化，從而克服代謝應激和促進腫瘤細胞的轉移[15]；BRAF包含了TRAP1依賴性抑制線粒體凋亡的通路，BRAF信號的激活會導致TRAP1絲氨酸磷酸化的增強，從而發揮拮抗腫瘤細胞凋亡的作用[16]；(2)TRAP1表達下調能夠增加ROS的產生，而ROS表達水平的升高，能夠導致線粒體功能性損傷，進而導致腫瘤細胞的凋亡[17]。

TRAP1已被證明在多種腫瘤中表達異常，如Si等[2]通過檢測TRAP1在腎癌和正常腎組織中的表達情況，比較分析TRAP1的表達與臨床病理特征及與患者預后之間的相關性，發現TRAP1在腎癌組織中過表達，其過表達與淋巴結轉移及臨床分期相關，并且TRAP1低表達患者的平均生存時間(56個月)顯著高于TRAP1高表達患者(47個月)。Maddalena等[4]研究發現，TRAP1在前列腺癌中過表達，在前列腺正常組織和良性增生結節中不表達或微量表達。Chen等[5]研究發現，在結直腸癌組織中TRAP1的表達水平顯著升高，并且發現TRAP1表達水平的升高可通過保護受到氧化損傷的內皮細胞免受凋亡來發揮促癌作用。Tian等[3]研究發現，TRAP1在食管癌組織及多種食管癌細胞系中過表達。

本組實驗結果顯示，TRAP1基因在癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，與Tian等的研究結果一致。研究TRAP1與食管癌臨床病理特征關系時發現，TNM分期高的癌組織中TRAP1的表達水平顯著高于分期低者，這證明了TRAP1的表達水平與食管癌的進展相關，越到晚期TRAP1的表達水平也越高。發生復發轉移的患者其TRAP1的表達水平顯著高于未發生復發轉移者，并且TRAP1陽性患者的術后生存時間顯著低于TRAP1陰性患者，說明了TRAP1表達水平高的患者更容易發生復發轉移，且預后更差，提示TRAP1可能作為食管癌預后的標志物。

隨著科學技術的發展，腫瘤的診療技術也在不斷進步，但作為主要治療手段的放、化療具有明顯的缺點：在殺死腫瘤細胞的同時，對正常細胞也有殺傷作用。TRAP1在多種腫瘤中過表達，干預其功能可導致腫瘤細胞的凋亡，而對正常細胞卻沒有影響。這使得TRAP1作為腫瘤治療的新靶點具有廣闊的應用前景。

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Expression of TRAP1 in esophageal carcinoma and its influence on the prognosis

LI Chun1, LIU Jing2, GUAN Zheng-yuan1, FENG Qian-qian1

(1DepartmentofPathology,China-JapanFriendshipHospital,Beijing100029,China;2DepartmentofPathology,GeneralHospitalofChinesePeople’sArmedPoliceForce,Beijing100039,China)

Purpose To investigate TRAP1 expression in esophageal cancer and its relationship with clinicopathological features and prognosis. Methods Expression levels of TRAP1 in 60 pairs of cancer and adjacent normal tissues were detected by immunohistochemistry, and the relevance between TRAP1 and clinicopathological features was evaluated. Kaplan-Meier and Cox proportional regression analyses were performed to determine the association of TRAP1 expression and survival of the patients. Results The positive expression rate of TRAP1 was 55.0%, and the amount of relative protein transcript level was 2.7±1.1 in the cancer tissue. The positive expression rate of TRAP1 was 11.7%, and the relative expression protein was 0.5±0.4 in the adjacent normal tissue. The expression level of TRAP1 in cancerous tissue was significantly higher than that of tissue adjacent to carcinoma. There was no statistically significant difference between the expression levels of TRAP1 with sex, age, location, and degree of differentiation (P>0.05). There was statistically significant relationship between recurrence, metastasis and TNM stages with the expression of TRAP1 levels (P<0.05). The average survival time of TRAP1-negative patients was 69.0 months (95%CI: 60.2-77.9) while the TRAP1-positive patients was 34.2 months (95%CI: 24.4-44.1). High levels of TRAP1 were correlated with decreased survival of postoperative esophageal cancer patients (P<0.05). Conclusion TRAP1 is overexpressed in esophageal cancer and associated with the progression and prognosis of esophageal cancer.

esophageal neoplasms; TRAP1; prognosis; immunohistochemistry

時間：2017-2-27 10:14

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170227.1014.010.html

1中日友好醫院病理科，北京 1000292武警總醫院病理科，北京 100039

李 純，男，主管技師。E-mail: 864263161@qq.com 劉 靜，女，博士，主治醫師，通訊作者。E-mail: jingjingliuliu@126.com

R 735.1

A

1001-7399(2017)02-0135-05

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.004

接受日期：2016-12-16