澤瀉提取物對油酸誘導建鯉脂肪肝細胞損傷中生化指標及CYP1A蛋白表達的影響

［KH－*D］杜金梁，曹麗萍，賈睿，徐跑，*，殷國俊，*

(1．中國水產科學研究院淡水漁業研究中心農業部淡水漁業和種質資源利用重點實驗室，江蘇無錫214081;2．中國水產科學研究院淡水漁業研究中心農業部魚類免疫藥理學國際聯合實驗室，江蘇無錫214081;3．南京農業大學無錫漁業學院，江蘇無錫214081)

澤瀉提取物對油酸誘導建鯉脂肪肝細胞損傷中生化指標及CYP1A蛋白表達的影響

［KH－*3D］杜金梁1，2，曹麗萍1，2，賈睿3，徐跑1，2，3*，殷國俊1，2，3*

(1．中國水產科學研究院淡水漁業研究中心農業部淡水漁業和種質資源利用重點實驗室，江蘇無錫214081;2．中國水產科學研究院淡水漁業研究中心農業部魚類免疫藥理學國際聯合實驗室，江蘇無錫214081;3．南京農業大學無錫漁業學院，江蘇無錫214081)

為了研究中藥澤瀉提取物對油酸誘導建鯉脂肪肝變性細胞的保護作用，本實驗以0．4 mmol·L－1油酸來構建建鯉原代脂肪肝細胞損傷模型，然后用不同濃度的澤瀉提取物處理肝細胞24和48 h后，分別收集細胞和細胞培養液，然后測定谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、乳酸脫氫酶(LDH)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、堿性磷酸酶(AKP)、膽堿酯酶(CHE)、細胞色素酶P4501A1(CYP1A1)和細胞色素酶P4502E1(CYP2E1)的含量等生化指標以及CYP1A的蛋白表達情況。結果顯示，0．4 mmol· L－1的油酸與原代肝細胞共培養48 h可以顯著提高肝細胞培養上清中GPT、GOT、TG、TC、AKP、CHE、LDH、CYP1A1和CYP2E1的含量(P＜0．01或者P＜0．05)，可以誘導肝細胞中CYP1A的蛋白表達。將不同濃度的澤瀉提取物(0、1、5、10、20、50 μg·mL－1)與脂肪肝細胞共培養24～48 h發現，澤瀉提取物能不同程度抑制油酸誘導的GOT、GPT、TG、TC、LDH、AKP、CHE水平和CYP1A1、CYP2E1含量的升高(P＜0．01或者P＜0．05)，不同程度降低肝細胞中CYP1A蛋白表達，以作用時間48 h效果較好。研究證實了澤瀉提取物對油酸誘導的魚類脂肪肝細胞損傷具有保護作用，而澤瀉提取物作為魚類脂肪肝的防治藥物還需要進一步的在體研究。

建鯉;肝細胞;油酸;澤瀉提取物

隨著養殖規模的不斷擴大，脂肪肝類疾病在魚類養殖中普遍發生，有報道稱此病不僅僅在淡水魚類中發生，也存在于海水養殖魚類中，給養殖戶造成了很大困擾［1］。發生脂肪肝疾病魚類，其肌肉當中脂肪含量也會升高，影響了魚類肉質品質，如果此病發生在夏季，還會造成魚類的死亡，給養殖戶造成不小的經濟損失，影響了水產養殖業的健康發展［2］。國內外關于魚類脂肪肝疾病有了一定數量的研究報道，在治療和預防脂肪肝方面也取得了一定成效［3－5］，但是，到目前為止還沒有發現有效的治療藥物，因此，探尋治療魚類脂肪肝疾病的有效藥物成為研究者面臨的主要挑戰。

由于離體培養的原代肝細胞具有培養條件易控制且可以精確模擬在體肝臟生理活動等特點，被廣泛應用于藥物代謝、脂質代謝、肝癌研究等方面［6－7］。關于原代肝細胞在魚類上面應用［8－9］，還主要是用于藥理學方面，也就是通過用化學藥物建立肝細胞損傷模型來進行后續篩選保肝藥物研究。如曹麗萍等利用四氯化碳構建原代肝細胞損傷來篩選保肝中藥［10］，盧榮華等用脂肪乳劑來構建草魚脂肪肝脂變模型［11］，而關于利用原代培養的魚類肝細胞來構建脂肪肝變性模型，尤其是鯉魚方面還未見相關報道。在本實驗中，選用原代培養的建鯉肝細胞作為實驗材料有助于研究肝細胞內脂質代謝過程及保肝藥物的篩選。

近年來，通過臨床試驗以及藥理學研究，已經篩選了一大批具有保肝作用的中藥［12］，澤瀉提取物就是其中一種。有報道稱澤瀉提取物具有很好的降血脂作用和保護肝臟的功效［13－14］。在哺乳動物中，澤瀉提取物對于化學藥物引起的肝損傷具有一定的治療效果，如朱深銀報道澤瀉提取物對二甘醇致小鼠肝臟損傷具有明顯的保護作用［15］。王振海等報道澤瀉對DL-乙硫氨酸引起的大鼠急性肝損傷也具有明顯的保護作用［16］。但對于澤瀉提取物對水產動物脂肪肝疾病方面的研究還鮮有報道。本實驗利用油酸誘導建鯉原代肝細胞脂肪變性，通過western blotting方法檢測CYP4501A蛋白表達和一些生化指標的變化來探討澤瀉提取物對建鯉脂肪肝細胞變性的保護作用，為水產保肝藥物的篩選提供依據。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 實驗供試魚建鯉(Cyprinus carpio var．Jian)來自于中國水產科學院淡水漁業研究中心漁場，體質健康無病，取回后飼養于循環水系統中一周，水溫設定為27℃，每天投喂2次商品飼料。

1．1．2 藥品和試劑L-15培養基、二甲基亞砜(DMSO，細胞級)、0．4%臺盼藍染液、鏈霉素/青霉素(Streptomycin/penicillin)、0．25%胰蛋白酶及PBS緩沖液購自于Sigma公司(美國);新生胎牛血清(FCS)購自于杭州四季青生物工程材料有限公司公司(中國杭州);谷丙轉氨酶(glutamatepyruvate transaminase，GPT)、谷草轉氨酶(glutamate oxalate transaminase，GOT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、膽堿酯酶(cholinesterase，CHE)等試劑盒購自于南京建成生物工程研究所科技有限公司(中國南京);CYP2E1、CYP1A1試劑盒購自上海酶聯生物研究所(中國上海);細胞裂解液及免疫印跡(Western blotting)所需試劑購自于碧云天生物技術研究所(中國南通);澤瀉提取物購自南通四海植物提取有限公司(中國南通)。

1．2 試驗方法

1．2．1 建鯉原代肝細胞的分離和培養無菌條件下于超凈臺內取建鯉肝臟，用含雙抗的PBS緩沖液進行漂洗，修剪，加入濃度為0．125%的胰蛋白酶消化液，27℃水浴條件下消化10～15 min。過濾，濾液用PBS緩沖液洗3次，采用梯度離心法進行離心5 min，離心轉數分別為1100、900和800 r·min－1。離心結束后棄上清，用含有10%新生小牛血清(FCS)的L-15培養基制成細胞懸液，臺盼藍染色法進行細胞存活率檢測，計數結束后將細胞接種于24孔培養板中，27℃條件下培養。

1．2．2 澤瀉提取物處理脂肪變性肝細胞實驗組分別設定空白對照組、模型組、澤瀉提取物對照組以及澤瀉提取物處理組。用L-15培養基將澤瀉提取物稀釋為0、1、5、10、20、50 μg·mL－1等濃度，具體分組情況如下。

(1)空白對照組:不添加任何藥物處理肝細胞，直接用L-15培養基培養24和48 h后，分別收集24和48 h 2個時間段細胞及培養上清液。

(2)油酸造模組:用含濃度為0．4 mmol·L－1油酸的L-15培養基培養48 h，培養結束后收集細胞及培養上清液。

(3)澤瀉提取物對照組:將生長狀態良好的肝細胞換用含質量濃度50 μg·mL－1澤瀉提取物的L-15培養基培養24和48 h，然后分別收集2個時間段細胞及培養上清液。

(4)澤瀉提取物處理組:先將貼壁生長良好的肝細胞與0．4 mmol/L油酸共培養48 h造成脂肪肝變性細胞后，再加入含濃度分別為0、1、5、10、20、50 μg·mL－1澤瀉提取物的L-15培養基培養24和48 h，培養結束后分別收集2個時間段細胞及上清培養液。

以上每個試驗組均設6個重復孔。收集各組上清液及細胞用于后續生化指標檢測及蛋白表達研究。

1．2．3 肝細胞上清培養液中生化指標測定GOT、GPT、TG、TC等試劑盒的測定參照南京建成科技有限公司說明書進行操作。

1．2．4 Elisa法測定肝細胞培養液中CYP2E1、CYP1A1含量水平采用雙抗體夾心法測定魚肝臟中CYP2E1、CYP1A1水平。分別設定空白孔、標準孔、待測樣品孔。所加樣品要加于酶標孔板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動均勻。經過孵育、洗滌、加酶標試劑、顯色、終止等步驟后，以空白孔調零，450 nm波長處測定各孔吸光度值，然后通過標準曲線計算樣品中CYP2E1、CYP1A1含量。

1．2．5 Western blotting方法檢測澤瀉提取物對脂肪變性肝細胞CYP1A蛋白表達的影響將培養結束后的肝細胞先用PBS清洗后，加入細胞裂解液，震蕩混勻，凍融(－20℃)，12 000 r·min－1離心10 min，吸取上清液，用于后續免疫印跡實驗研究。將待測樣本取出后，用雙蒸水稀釋到相同濃度，然后加入5×蛋白上樣緩沖液，于95℃變性儀上變性5 min，冷卻后備用。

12%SDS-PAGE膠進行電泳，電泳結束后用Bio-Rad半干轉膜儀進行轉膜，將轉印好的NC膜放入封閉液中4℃過夜，加入一抗CYP1A孵育2 h，洗滌液洗滌3次，每次10 min，然后加入含有堿性磷酸酶標記的二抗繼續孵育2 h，結束后洗滌液洗滌3次，每次10 min，NBT/BCIP顯色。

1．2．6 數據分析所有數據均用SPSS16．0軟件包進行處理。采用One-Way ANOVA檢驗法進行顯著性分析，結果以平均值±標準誤表示，以P＜0．05為差異顯著，P＜0．01為差異極顯著。

2 結果與分析

2．1 澤瀉提取物對建鯉肝細胞培養液中GOT、GPT、LDH、AKP活性的影響

如圖1所示，油酸與原代肝細胞共培養后發現，GOT、GPT、LDH和AKP幾個經典酶學指標活性值與空白對照組相比，差異極顯著(P＜0．01)。經過藥物澤瀉提取物處理后，幾個藥物濃度組均可以不同程度降低GOT、GPT、LDH和AKP酶的活性值，效果以處理48 h為最佳。澤瀉提取物對照組與空白對照組相比，無統計學意義。

2．2 澤瀉提取物對建鯉肝細胞中TG和TC含量的影響

由圖2所示，油酸作用于肝細胞48 h，肝細胞中TG、TC含量明顯升高，與空白對照組相比，差異極顯著(P＜0．01)。經澤瀉提取物作用24和48 h后，TG、TC含量得到不同程度抑制，治療效果以48 h為佳。其中，澤瀉提取物濃度在5 μg·mL－1時降低TC含量，澤瀉提取物濃度在20 μg·mL－1時降低肝細胞中TC含量較好。澤瀉提取物對照組與空白對照組相比，無差異顯著性。

2．3 澤瀉提取物對建鯉肝細胞培養液中CHE活性的影響

由圖3所示，油酸處理后的肝細胞內CHE活性與空白對照組相比，差異極顯著(P＜0．01)。加入澤瀉提取物與肝細胞共培養后發現，各處理組澤瀉提取物均可不同程度降低其活性值，但以作用48 h效果較好。澤瀉提取物與空白對照組相比無統計學意義。

2．4 澤瀉提取物對建鯉肝細胞培養液中CYP1A1含量的影響

由圖4所示，油酸與肝細胞共培養后發現，肝細胞內CYP1A1含量顯著升高，與空白對照組相比，差異顯著(P＜0．05)。加入澤瀉提取物處理肝細胞后，各濃度處理組在24 h可以降低肝細胞內CYP1A1含量，但與空白對照組相比，無統計學意義。澤瀉提取物處理48 h，濃度為10、20、50 μg· mL－1時，可以顯著降低CYP1A1含量，但與空白對照組相比，差異顯著(P＜0．05)。澤瀉提取物對照組與空白對照組相比無明顯變化。

圖1 澤瀉提取物對油酸致建鯉肝細胞培養液中GOT(A)、GPT(B)、LDH(C)和AKP(D)活性的影響Fig．1Effects of RAE on the activities of GOT(A)，GPT(B)，LDH(C)and AKP(D)in primary hepatocytes culture medium of Jian Carp

圖2 澤瀉提取物對油酸致建鯉肝細胞中TG和TC含量的影響Fig．2Effects of RAE on the contents of TG(A)and TC(B)in primary hepatocytes culture medium of Jian carp

2．5 澤瀉提取物對建鯉肝細胞培養液中CYP2E1含量的影響

由圖5所示，經過油酸處理后，建鯉肝細胞內CYP2E1含量明顯升高，與空白對照組相比，差異極顯著(P＜0．01)。加入澤瀉提取物與肝細胞共培養后發現，各濃度處理組均可不同程度降低CYP2E1含量，以作用時間48 h效果最好。澤瀉提取物對照組與空白對照組相比無明顯變化。

2．6 澤瀉提取物對建鯉肝細胞CYP1A蛋白表達的影響

由圖6所示，加入不同濃度的澤瀉提取物處理脂肪肝變性細胞24 h，CYP1A蛋白表達隨著藥物濃度的增加減弱，在濃度為10 μg·mL－1時，明顯降低。澤瀉提取物作用48 h，濃度為在1、5、10 μg· mL－1時，CYP1A表達明顯降低。

3 討論與結論

3．1 利用魚類肝細胞進行抗脂肪肝藥物篩選研究

魚類脂肪肝的發生原因比較復雜，飼料中營養失衡、抗生素藥物的濫用等均可導致本病的發生［17－18］。魚類脂肪主要蓄積在皮下、肝臟等部位，當肝臟不能夠及時將多余脂肪轉運出去，就會造成肝臟的代謝功能出現紊亂，引起魚類脂肪肝疾病的發生。發生脂肪肝疾病的魚肉品質以及在高溫季節魚類的抗應激能力都會出現下降，嚴重影響到了魚類養殖戶的效益以及養殖業的健康發展［19］，因此，魚類脂肪肝的防治研究引起了廣泛關注。利用原代培養的肝細胞來模擬魚類脂肪肝損傷，具有很多優點，如細胞的培養條件可控、實驗周期短、成本低、能有效避免外界因素對實驗所造成的影響，而且可以比較準確模擬在體魚生理狀態。在國內外關于藥物篩選以及動物發病機制方面研究，細胞培養得到了廣泛應用［20－23］。本實驗旨在利用油酸作為脂肪肝細胞變性誘導劑，探究澤瀉提取物對原代脂肪肝細胞變性的保護作用。

圖3 澤瀉提取物對油酸致建鯉肝細胞培養液中CHE活性的影響Fig．3Effects of RAE on the activity of CHE in primary hepatocytes culture medium of Jian carp

圖4 澤瀉提取物對油酸致建鯉肝細胞培養液中CYP1A1含量的影響Fig．4Effects of RAE on the amounts of CYP1A1 in primary hepatocytes culture medium of Jian Carp

圖5 澤瀉提取物對油酸致建鯉肝細胞培養液中CYP2E1含量的影響Fig．5Effects of RAE on the amounts of CYP2E1 in primary hepatocytes culture medium of Jian Carp

3．2 澤瀉提取物對原代肝細胞GPT、GOT、LDH、AKP活性的影響

GOT、GPT、LDH、AKP是肝臟疾病檢查過程中常用指標，正常情況下，其活性值很低，當肝臟呈現病理狀態時，肝細胞膜的通透性就會增加，這幾個酶指標就會從肝細胞分泌出來［24－25］。由于肝細胞膜受損，細胞膜的正常功能受到影響，細胞內電解質失衡，尤其是細胞內鈣離子失衡，鈣離子在肝細胞過多聚集，導致了肝細胞的脂肪變性，甚至壞死的發生。在本實驗中，經油酸作用后，肝細胞上清培養液中GOT、GPT、LDH、AKP4種酶活性值顯著升高，說明油酸成功誘導了脂肪肝細胞變性。加入澤瀉提取物后，四種酶活性值升高趨勢得到抑制。類似結果在大鼠中也有相關報道，王振海等［16］在研究澤瀉對DL-乙硫氨酸引起大鼠肝臟損傷的保護作用中發現，澤瀉可以降低肝細胞中轉氨酶的升高。這說明澤瀉提取物可以提高肝微粒體膜的活性，修復受損傷的肝細胞膜，恢復細胞膜的正常功能。

3．3 澤瀉提取物對原代肝細胞TG、TC含量的影響

肝臟是脂質代謝的重要場所，能夠合成和儲存各種脂類，滿足機體需要。在哺乳動物脂肪肝研究方面，有研究證明，動物脂肪肝疾病發生，主要是由于體內脂質代謝失衡導致大量甘油三酯在肝臟內聚集而發病［26］。將肝細胞中TG、TC含量測定作為油酸誘導脂肪肝細胞變性以及藥物治療脂肪肝療效判定的指標，可直接反映脂類物質在肝臟內代謝、沉積的情況，通過觀察這兩個指標可以客觀、合理地反映出澤瀉提取物對油酸誘導的脂肪肝細胞變性真實的保護作用效果。在本實驗中，油酸與肝細胞共培養后，肝細胞TG、TC含量與空白對照組相比差異極顯著(P＜0．01)。加入澤瀉提取物后，澤瀉提取物可以不同程度降低肝細胞內TG、TC含量，這說明澤瀉提取物在降低血脂和治療脂肪肝變性方面具有較好的效果。其具體保護作用機制可能與其含有的膽堿以及卵磷脂等成分有關系［27］。

3．4 澤瀉提取物對原代肝細胞CHE含量的影響

膽堿酯酶(cholinesterase)是一類由肝臟合成而分泌入血的糖蛋白，主要分為乙酰膽堿酯酶和羥基膽堿酯酶。在臨床中，測定血清中膽堿酯酶活性是診斷和評估肝實質細胞損害的重要手段，發生脂肪肝疾病會使乙酰膽堿在肝臟內過多聚集，導致膽堿酯酶水解乙酰膽堿出現障礙［28］。有報道稱，脂肪肝患者CHE平均水平較正常對照組比較顯著升高，是脂肪肝患者又一突出的生化指標［29］。在本實驗中，油酸處理后的肝細胞膽堿酯酶水平較空白對照組相比極顯著升高，與前人報道結果相同。加入中藥澤瀉提取物后48 h，肝細胞內膽堿酯酶水平出現了顯著下降。這說明澤瀉提取物恢復了膽堿酯酶活性，抑制了乙酰膽堿在肝細胞內的聚集。

圖6 澤瀉提取物對肝細胞中CYP1A蛋白表達的影響Fig．6CYP1A expression in primary hepatocytes of Jian Carp induced by RAE

3．5 澤瀉提取物對原代肝細胞CYP1A1和CYP2E1含量及CYP1A1蛋白表達的影響

細胞色素酶P450是存在于肝臟內重要的藥物代謝酶，主要參與了內源性物質和外源性物質在肝臟內的代謝，在新藥研發方面發揮著重要作用，而CYP1A1和CYP2E1其中2個主要的亞型［30－31］。有國內外文獻報道稱，在非酒精性脂肪肝發病過程中CYP1A1經游離脂肪酸誘導活性會有升高趨勢［32］;有文獻報道稱，發生肝臟損傷和脂肪肝疾病時，CYP2E1的表達與活性會發生相應的變化［33］，這說明CYP1A1和CYP2E1參與了脂肪肝疾病的形成。有研究表明脂肪肝的形成主要是由于機體內氧化應激和脂質過氧化過程的影響，CYP450酶系統參與了此過程，抑制抗氧化酶系發揮保護作用［34］。在本實驗中，油酸處理過后的CYP1A1和CYP2E1含量顯著升高，CYP1A1蛋白表達也相應增強，這說明油酸誘導脂肪肝損傷后，導致了細胞色素酶P450含量的增加。加入澤瀉提取物后，CYP1A1和CYP2E1含量以及CYP1A1蛋白表達，均不同程度出現了降低現象，這說明藥物抑制了機體內氧化應激產物以及脂質過氧化物的產生，保護肝臟受到外界物質的損害。

當前，魚類脂肪肝疾病是我國水產養殖業多發病之一，是我國水產科技工作者面臨的一項重要課題。本研究利用油酸成功復制了脂肪肝細胞損傷模型，并以此模型開展了抗脂肪肝藥物篩選工作，經澤瀉提取物處理后，肝臟中轉氨酶指標、甘油三酯、總膽固醇以及細胞色素酶P450含量及蛋白表達均出現不同程度升高或降低，以48 h處理效果最佳，分析其保護機制可能與其調節肝微粒體膜活性，修復油酸對肝細胞膜造成的損害，調節藥物代謝酶P450水平，使肝細胞恢復對脂肪的代謝功能等有關，關于中藥澤瀉提取物的具體保護機制還有待于進一步研究。

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(責任編輯 李潔)

Effects of Rhizoma Alismatis Extract on Biochemical Index and CYP1A Protein Expression of Hepatocyte Steatosis Injury Induced by Oleic Acid in Jian Carp(Cyprinus carpio var．Jian)

DU Jin-liang1，2，CAO Li-ping1，2，JIA Rui3，XU Pao1，2，3*，YIN Guo-jun1，2，3*
(1．Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization，Ministry of Agriculture，Freshwater Fisheries Research Center，Chinese Academy of Fishery Sciences，Jiangsu Wuxi 214081，China;2．International Joint Research Laboratory for Fish Immunopharmacology，Freshwater Fisheries Research Center，Chinese Academy of Fishery Sciences，Jiangsu Wuxi 214081，China;3．Wuxi Fisheries College，Nanjing Agricultural University，Jiangsu Wuxi 214081，China)

Fish fatty liver is one of increasingly serious diseases in aquaculture，it has become more and more serious in China aquaculture，In recent years，the incidence of fatty liver in fish had an increasing trend，but the occurrence mechanism of the fatty liver was still not very clear．Cytochrome P450 enzymes were the main oxidases metabolic enzymes in the liver microsome and played a very important role in the liver metabolism．However，no effective methods have been found for the prevention and treatment of this disease．The present study aimed to develop an in vitro model of hepatocyte steatosis using oleic acid as hepatotoxicant and evaluate the protective effects of Rhizoma Alismatis extracts against oleic acid induced hepatocyte steatosis in Jian carp．The primary cultured hepatocytes in Jian Carp were isolated and purified by trypsin digestion，cultured in vitro．The activities of glutamatepyruvate transaminase(GPT)，aspertate aminotransferase(GOT)，triglycerides(TG)，total cholesterol(TC)，alkaline phosphatase(AKP)，cholinesterase(CHE)，lactate dehydrogenase(LDH)were detected．The content of enzyme cytochrome P4501A1(CYP1A1)and enzyme cytochrome P4502E1 were detected by double antibody sandwich ELISA method．CYP1A expression in the hepatocytes was analyzed by Western blot method．The results showed，the hepatocytes of Jian Carp grew well and had a good morphology，and they could be used for investigation of lipid metabolism．Exposure of the hepatocytes to 0．4 mmol/L oleic acid for 48 h，significantly elevated the levels of glutamatepyruvate transaminase(GPT)，aspertate aminotransferase(GOT)，triglycerides (TG)，total cholesterol(TC)，alkaline phosphatase(AKP)，cholinesterase(CHE)，lactate dehydrogenase(LDH)，the enzyme cytochrome P4501A1(CYP1A1)and the enzyme cytochrome P4502E1 (P＜0．01 or P＜0．05)．After the primary hepatocytes treatment with five concentrations of Rhizoma Alismatis extract(0，1，5，10，20，50 μg/mL)for 24－48 hours，results showed that Rhizoma Alismatis extract could suppress the elevations of GOT，GPT，TG，TC，LDH，AKP，CHE，CYP1A1，CYP2E1(P＜0．01 or P＜0．05)，and reduced the protein expression of CYP1A to varying degrees，the most optimal action time is 48 h．It can be concluded that Rhizoma Alismatis extract exhibited protective effect against hepatocyte steatosis in Jian carp．Further in vivo studies are needed to provide more evidence for using Rhizoma Alismatis extract as a hepatoprotective agent for the treatment of hepatocyte steatosis．

Jian carp;Hepatocyte;Oleic acid;Rhizoma Alismatis extract

S965．116

A

1001－4829(2017)1－0226－07

10．16213/j．cnki．scjas．2017．1．039

2016－02－25

中央級公益性科研院所基本科研業務費專項資金(2015JBFM01)

杜金梁(1982－)，男，河北滄州市人，助理研究員，主要從事臨床藥理與藥物代謝研究工作，E-mail:dujl@ffrc．cn，Tel:0510-85558876，*為通訊作者:殷國俊，E-mail:yingj@ffrc．cn;徐跑，E-mail:xup@ffrc．cn。