電化學發光法與時間分辨熒光免疫法檢測AFP的臨床應用

鄔登敏，陳啟紅，柳兵，曾同祥

長江大學第二臨床醫學院 荊州市中心醫院皮膚科，湖北 荊州 434023

電化學發光法與時間分辨熒光免疫法檢測AFP的臨床應用

鄔登敏，陳啟紅，柳兵，曾同祥

長江大學第二臨床醫學院 荊州市中心醫院皮膚科，湖北 荊州 434023

目的：分析電化學發光法(ECLIA)與時間分辨熒光免疫法(TRFIA)檢測AFP的臨床應用。方法： 釆用ECLIA和TRFIA兩種方法同時檢測5組血清甲胎蛋白(AFP)含量，其中肝癌120例，胃癌48例，乳腺癌32例，卵巢癌45例；健康人群50例。觀察兩者的準確率、穩定性、線性范圍與相關性回歸分析。結果：肝癌組AFP值(ECLIA法: 520.36±354.26ng/mL;TRFIA 法: 558.48±360.27ng/mL)，胃癌組(ECLIA法:15.38±2.34ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL)，乳腺癌組(ECLIA法:10.35±3.51ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL),卵巢癌組(TRFIA法:11.81±4.36ng/mL;ECLIA法:13.53±2.96ng/mL)。正常組(ECLIA法:6.32±5.14ng/mL；TRFIA法:6.51±5.42ng/mL)，兩種方法檢測結果無顯著差異(P>0.05),其相關系數為0.992,呈正相關。ECLIA法與TRFIA法批內批間變異系數分別低于2.9%和5.7%,前者優于后者。結論： TRFIA法和ECLIA法檢測AFP具有較好的準確率、穩定性及相關性,可應用于臨床血清AFP的檢測。

電化學發光法； 時間分辨熒光免疫法； 甲胎蛋白

本研究通過TRFIA法和ECLIA法檢測不同腫瘤患者血清AFP含量，并對結果進行統計分析，旨在進一步了解TRFIA法和ECLIA法的應用特點及對各類良、惡性腫瘤AFP測定值的影響。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

各類良、惡性腫瘤標本共245例,其中原發性肝癌120例,胃癌48例，乳腺癌32例,卵巢癌45例；健康對照組50例。均為2015年7月至2016年7月在我院住院與體檢人群,年齡和性別無統計學差異,符合美國癌癥聯合會 (AJCC2002＇6th)提出的惡性腫瘤TNM的臨床診斷與分期指標。

采集標本均為晨起空腹靜脈血3mL，并于2h內分離血清，置-70℃冰箱保存備用。

1.2 儀器與試劑

上海新波生物技術公司ANYTEST2000時間分辨熒光測定儀及配套試劑，美國雅培公司i2000SR全自動微粒子化學發光免疫分析儀及配套試劑。

1.3 實驗方法

實驗操作過程均嚴格按照試劑盒說明書和儀器操作規程進行。AFP≤20ng/mL為陰性，AFP>20ng/mL為陽性。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 ECLIA與TRFIA法測定AFP值

用ECLIA和TRFIA兩種方法同時檢測5組血清甲胎蛋白(AFP)含量數值，見表1。

表1 ECLIA與TRFIA法檢測AFP含量結果比較

注：與同組ECLIA法測定平均值比較，*P>0.05；與健康對照組比較，#P<0.01。

2.2 線性試驗

將AFP測定值在(500～520)ng/mL范圍內的5份血清混合，重復測定5次取平均值。將混合血清6點倍比稀釋，重復測定3次，以平均值為標準計算理論值，再根據理論值的稀釋倍數與6種濃度血清實際測定值作對比，進行線性回歸分析。ECLIA法回歸方程為：Y= 0.9903X-3.7131,r2=0.9998；TRFIA法回歸方程為：Y=1.0171X-0.2211,r2=0.9946。

ECLIA法在(0～1000)ng/mL范圍內線性良好，TRFIA法在(2.85～680)ng/mL范圍內線性良好。ECLIA法比TRFIA法具有更寬的檢測范圍。

2.3 相關性分析

圖1 ECLIA法與TRFIA法相關性回歸分析

兩種方法測得結果取平均數比較(配對t檢驗)無差異性(P>0.05)；兩種方法回歸分析，以ECLIA結果為自變量X，以TRFIA結果為因變量Y,計算相關系數和回歸方程，直線回歸方程為Y=0.9891X+1.5623,r2=0.992，兩者呈顯著正相關。見圖1。

2.4 精密度試驗

表2 ECLIA與TRFIA法重復檢測AFP標準品結果比較

3 討論

甲胎蛋白由胚胎肝、卵黃囊和胃腸上皮細胞產生,成人的甲胎蛋白由肝臟產生，是單鏈多肽糖蛋白，在血清中的半衰期為3.5～6d。肝細胞癌、卵黃囊和胚胎性腫瘤及部分肝外腫瘤可重新合成甲胎蛋白，在妊娠早期胎兒血清中濃度很高，出生后6個月～1年可降至健康成人水平。以后在沒有疾病的情況下，終身將維持低水平。但在細胞惡變過程中，某些細胞基因被重新激活，細胞重新開始合成AFP，以致其含量在腫瘤患者體內明顯增加，故測定血清AFP濃度對各相應惡性腫瘤的早期診斷和治療監測具有重要參考價值[1]。

時間分辨熒光免疫測定的基本原理是以鑭系元素銪(Eu)螯合物作為熒光標記物，利用這類熒光物質壽命長的特點，延長熒光測量時間，待短壽命的自然本底熒光完全衰退后再行測定。所得信號完全為長壽命的鑭系螯合物的熒光，從而有效排除非特異性本底熒光的干擾而提高靈敏度[2]。

另外TRFIA的線性范圍寬，也是因為TRFIA采用銪離子(Eu3+)作為標記物。由于銪離子(Eu3+)發光信號具有寬線性，同時采用獨特的熒光解離增強技術，有非常優良的可檢測性，大大提高了TRFIA的檢測線性[3]。

TRFIA與傳統的方法相比較，具有靈敏度高、操作簡便、示蹤物穩定、標準曲線范圍寬、不受樣品自然熒光干擾、無放射性污染、標記物儲存時間長的優點[4，5]。TRFIA法也有其缺點，如果一次實驗的標準沒做好，這批的結果可能都會受影響，甚至完全出不了結果。TRFIA法更適合大批量標本檢測[6]。

ECLIA法是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，包括電化學和化學發光兩個過程，可對反應進行精確控制，能對各種物質進行快速分析，是目前最先進的標記免疫檢測技術[7]。采用電促化學發光，使用非同位素金屬三聯吡啶釕作為標記物，但電極激發在三丙胺的參與下迅速穩定發光，使得檢測結果穩定可靠，磁性微珠包被技術的應用提高了檢測的靈敏度[8]。

電化學發光免疫法檢測采用磁性微珠包被技術，由于微珠體積小可以吸附更多的抗原或抗體，同時磁珠的核心是鐵，在磁場中很快下沉，因此容易進行洗滌和固相載體分離[9]。發光信號檢測的寬線性加上獨特的標記物本身循環發光，使電化學發光檢測的線性范圍更寬。

試劑穩定性好、有效期長，是由于同位素金屬三聯吡啶釕在自然環境下非常穩定，因此用它標記的試劑也非常穩定[10]。但檢測儀器試劑大多需進口，成本昂貴。

本研究釆用兩種方法同時檢測4種不同腫瘤患者血清AFP含量，對比檢測結果無顯著差異(P>0．05)，其相關系數為r2=0.992，結果呈正相關。重復試驗ECLIA法和TRFIA法批內批間變異系數CV%均≤6% ，兩種方法略有不同。電化學發光免疫法檢測結果的穩定性、靈敏度、精密度均優于時間分辨熒光免疫法，兩種儀器在臨床中可結合實際需要同時或交替使用。

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[編輯] 何勇

2016-12-05

鄔登敏(1984-)，女，檢驗師，主要從事臨床檢驗診斷工作，794948832@qq.com。

R730.23

A

1673-1409(2017)08-0044-03

[引著格式]鄔登敏，陳啟紅，柳兵，等.電化學發光法與時間分辨熒光免疫法檢測AFP的臨床應用[J].長江大學學報(自科版) ,2017,14(8):44～46.