血滯通膠囊與阿托伐他汀鈣聯合用藥對ApoE—/—小鼠的調血脂作用

李欣悅+吳詠梅+梁偉+周雨亭+湯世民+孫桂波+孫曉波

[摘要] 目的 考察血滯通膠囊與阿托伐他汀聯合用藥對ApoE-/-小鼠的調血脂作用。 方法 將125只6周齡雄性ApoE-/-小鼠依據隨機數字表法分為空白對照組、ApoE-/-模型組、阿托伐他汀組、血滯通組、血滯通+阿托伐他汀組，每組25只。ApoE-/-模型組和藥物處理組小鼠均給予高脂飼料喂養，空白對照組小鼠給予普通飼料喂養。藥物處理組小鼠每日灌胃給藥，空白對照組和ApoE-/-模型組小鼠則灌胃等體積的生理鹽水。給藥2、4、6、8、10周時分別測定血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。 結果 給藥2、4、6、8、10周后，與空白對照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），HDL-C顯著下降（P < 0.05或P < 0.01）；與模型組比較，血滯通組小鼠血清HDL-C水平顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），TG、TC、LDL-C水平降低（P < 0.05或P < 0.01）；與阿托伐他汀組比較，血滯通+阿托伐他汀組HDL-C水平顯著升高（P < 0.05或P < 0.01），TG、TC和LDL-C水平顯著降低（P < 0.05或P < 0.01）。 結論 血滯通膠囊具有調血脂作用，且血滯通與阿托伐他汀聯合應用效果優于阿托伐他汀單用。

[關鍵詞] 血滯通；阿托伐他汀；高脂血癥；ApoE-/-小鼠

[中圖分類號] R589.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）03（a）-0012-05

Blood lipid regulation effects of Xuezhitong Capsules combined with Atorvastatin in ApoE-/- mice

LI Xinyue1 WU Yongmei1 LIANG Wei2 ZHOU Yuting3 TANG Shimin1 SUN Guibo4 SUN Xiaobo4

1.College of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Jilin Province， Changchun 130117， China； 2.Dongfang Pharmaceutical Co. Ltd.， Jilin Province， Changchun 130103， China； 3.College of Biological Science and Engineering， Beifang University of Nationalities， Ningxia Hui Autonomous Region， Yinchuan 750021， China； 4.Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College， Beijing 100193， China

[Abstract] Objective To study the blood lipid regulation effects of Xuezhitong Capsules combined with Atorvastatin in ApoE-/- mice. Methods One hundred and twenty-five male ApoE-/- mice aged six weeks old were divided into control group， ApoE-/- model group， Atorvastatin group， Xuezhitong group and Xuezhitong+Atorvastatin group by random number table method， with 25 mice in each group. The mice of ApoE-/- model group and drug treatment groups were fed with high fat diet， while the mice of control group were fed with normal diet. The mice of drug treatment groups were given the corresponding drugs， the control group and ApoE-/- model group were given equivalent volume of normal saline. After drug administration for 2， 4， 6， 8， 10 weeks， the levels of serum total cholesterol （TC）， triglyceride （TG）， high density lipoprotein cholesterol （HDL-C） and low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） were detected. Results After drug administration for 2， 4， 6， 8， 10 weeks， compared with those of control group， the levels of TG， TC and LDL-C in ApoE-/- model group were increased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）， the level of HDL-C was decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with those of model group， the level of HDL-C in Xuezhitong group was increased （P < 0.05 or P < 0.01）， and the levels of TG， TC and LDL-C were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with those of Atorvastatin group， the level of HDL-C in Xuezhitong+Atorvastatin group was increased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）， and the levels of TG， TC and LDL-C were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Xuezhitong can regulate the blood lipid effectively， and the combined effect of Xuezhitong and Atorvastatin is better than that of Atorvastatin alone.

[Key words] Xuezhitong； Atorvastatin； Hyperlipemia； ApoE-/- mice

相關流行病學研究顯示，中國成人血脂異常發生率約為18.6%[1]，且逐年增高，并呈年輕化趨勢[2]。高脂血癥是指脂代謝異常，導致血清三酰甘油（TG）和/或總膽固醇（TC）和/或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平過高和/或高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平過低的代謝紊亂性疾病[3]。高脂血癥為常見的多發性疾病，與糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血壓病、動脈粥樣硬化等疾病的形成密切相關[4]，因此高脂血癥的預防對控制心腦血管疾病的發生有重大意義[5]。西藥治療高脂血癥個體針對性較差，藥理作用靶點較為單一，治療主要以緩解癥狀為主，需長期維持治療[6-7]。目前常用的降脂藥物為貝特類與他汀類藥物，但兩者均具有一定的肝腎毒性[8-9]。調脂藥物的開發和新靶點的發現已成為全球關注的熱點，我國調脂藥物的市場也以每年10%～30%的速度持續增長，特別是中藥市場[10]。血滯通膠囊是以薤白為原料的單方制劑，薤白為百合科蔥屬植物小根蒜Allium macrostemon Bge.或薤Allium chinense G. Don的干燥鱗莖[11]，可通陽散結，行氣導滯。現代藥理學研究表明，薤白可用于預防及治療心絞痛、心肌梗死、動脈粥樣硬化等心血管疾病[12]。ApoE-/-小鼠給予高脂飼料喂養，在數周內可形成高脂血癥的典型病變，可用于防治高脂血癥藥物的篩選。本研究以高脂飼料喂養ApoE-/-小鼠高脂血癥模型血脂水平變化為考察指標，考察血滯通膠囊和阿托伐他汀合用和單用分別對其的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

6周齡雄性ApoE-/-小鼠125只，體重18～20 g，SPF級，由北京維通利華實驗動物公司提供，動物合格證編號為SCXK（京）2012-0001。分籠飼養，自由飲水，普通飼料喂養，溫度（24±2）℃，濕度（50±5）%。

1.2 儀器與試劑

AL104-IC電子天平，Mettler Toledo公司；M1000酶標儀，Tecan公司。血滯通膠囊（內容物為淡棕黃色顆粒或粉末，有蒜臭，味微辣，由吉林省東方制藥有限公司，產品批號：20160402）；阿托伐他汀鈣片（購于輝瑞制藥有限公司，生產批號：M90502）；小鼠HDL-C酶聯免疫吸附法（ELISA）試劑盒（貨號：EXP210621，批號：201605）、小鼠LDL-C ELISA試劑盒（貨號：EXP 210622，批號：201605）、小鼠TC ELISA試劑盒（貨號：EXP210602，批號：201605）、小鼠TG ELISA試劑盒（貨號：EXP210617，批號：201605）購自北京易科拜德科技有限公司。

1.3 動物分組及給藥

125只ApoE-/-小鼠，適應性飼養1周后采用隨機數字表法將其分為5組，每組25只。空白對照組：普通飼料喂養；ApoE-/-模型組：高脂飼料喂養；阿托伐他汀組：阿托伐他汀鈣（6 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養；血滯通組：血滯通（800 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養；血滯通+阿托伐他汀組：阿托伐他汀鈣（6 mg/kg）灌胃給藥，血滯通（800 mg/kg）灌胃給藥，給予高脂飼料喂養。藥物處理組小鼠每日灌胃給藥，空白對照組和模型組小鼠則灌胃等體積的生理鹽水。

1.4 血脂測定

于給藥2、4、6、8、10周時取小鼠（n = 5），禁食12 h，腹主動脈取血，分離血清，ELISA試劑盒測定血清TG、TC、LDL-C和HDL-C。

1.5 統計學方法

利用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用非配對的t檢驗和One-way ANOVA進行統計分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血滯通膠囊給藥2周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥2周后，與空白對照組比較，模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C顯著下降（P < 0.05）。見圖1。

2.2 血滯通膠囊給藥4周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥4周后，與空白對照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C水平顯著下降（P < 0.05）。與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥4周TG、TC和LDL-C水平有降低趨勢，HDL-C水平有升高趨勢，但差異無統計學意義（P > 0.05）。見圖2。

2.3 血滯通膠囊給藥6周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥6周后，與空白對照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.05），HDL-C水平顯著下降（P < 0.05）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TC、TG、LDL-C的水平（P < 0.01或P < 0.05），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01或P < 0.05），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.05）。見圖3。

2.4 血滯通膠囊給藥8周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥8周后，與空白對照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.01），HDL-C水平顯著下降（P < 0.01）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TC、TG、LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥8周能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）。見圖4。

2.5 血滯通膠囊給藥10周后各組血脂水平比較

血滯通膠囊給藥10周后，與空白對照組比較，ApoE-/-模型組小鼠血清中TG、TC、LDL-C均顯著升高（P < 0.01），HDL-C水平顯著下降（P < 0.01）。與ApoE-/-模型組比較，血滯通組可以顯著降低血清中TG、TC、LDL-C的水平（P < 0.01），升高HDL-C的水平（P < 0.05）；與血滯通組比較，血滯通+阿托伐他汀組給藥10周能夠顯著降低TG、TC和LDL-C的水平（P < 0.01），顯著升高HDL-C的水平（P < 0.01）。見圖5。

3 討論

高血脂會加大血液的黏度，危害冠狀動脈，形成粥樣硬化，導致冠心病、心肌梗死、高血壓病、脂肪肝等疾病，TC每增高1 mmol/L，缺血性腦卒中發病率會增加20%[13-14]。目前，臨床前高脂血癥動物模型的制備方法有先天性、基因缺陷和化學物質誘導三種方式[15]。ApoE-/-小鼠目前是國內外公認的研究高脂血癥較好的動物模型[16]。本研究采用長期給予ApoE-/-小鼠高脂飼料建立的高脂血癥模型，形成率高，死亡率低，抵抗力強，與人患病機制較相似[17-18]。

血滯通膠囊為藥食兩用藥材薤白提取加工而得，采用現代化生產工藝，除藥用輔料外無任何外源性添加物質，是天然的純植物降脂產品。薤白自古作為治療冠心病、心絞痛的經典藥物備受推崇。漢代醫圣張仲景的《傷寒雜病論》中治療冠心病心絞痛的經典方劑薤白瓜蔞白酒湯、薤白瓜蔞半夏湯也是現代中醫都有在使用的方劑，而血滯通膠囊保留其中白酒的作用，采取醇提方式，加大薤白有效成分溶出率，保障臨床效果。臨床除適用于高脂血癥治療外，亦可廣泛用于治療高血脂癥引起的心腦血管疾病。

大量文獻表明，高脂飲食能引起血脂水平及機體氧化應激水平升高，特別是血清TC水平[19-22]。TC和TG是人類血脂的主要成分[23]，其血清濃度可作為脂代謝的指標。LDL-C是血漿中主要攜帶膽固醇的脂蛋白，易透入動脈內膜，促進動脈粥樣硬化形成。HDL-C為有效的抗動脈粥樣硬化因子，可將外周組織的游離膽固醇轉移到肝臟代謝，有利于減少膽固醇在外周組織細胞中的積聚和對血管內皮細胞的廣泛性損害[24-25]。本研究結果提示，血滯通膠囊能在顯著降低ApoE-/-小鼠高脂模型血清中TC、TG、LDL-C水平的同時升高HDL-C水平，且具有量效關系。隨著給藥時間的延長，血滯通的治療效果更穩定，血滯通與阿托伐他汀聯合效果優于阿托伐他汀單用。

[參考文獻]

[1] 仰艷冰.冠心病合并高脂血癥應用阿托伐他汀治療的效果評估報道[J].中國醫藥指南，2015，13（29）：81.

[2] 謝小英.瑞舒伐他汀與阿托伐他汀治療高脂血癥合并高血壓的臨床對比研究[J].現代醫藥衛生，2015，31（18）：2814-2816.

[3] 肖學鳳，劉昌孝.關于代謝組學的降脂中藥的作用物質基礎及作用機制研究探索[J].天津中醫藥大學學報，2009， 28（1）：54-55.

[4] 盧錕剛，樂智勇，陳桂林，等.決明子、丹參、苦丁茶、絞股藍不同組分配伍的降血脂作用[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（9）：191-195.

[5] 陳東方，王海玉，張聰恪，等.蝦青素膠囊對高脂血癥人群降血脂功能研究[J].實用預防醫學，2015，22（12）：1435-1436.

[6] 汪海婭，焦青萍，陳書燕，等.多廿烷醇治療老年高脂血癥的臨床研究[J].中國新藥與臨床雜志，2015，34（9）：679-682.

[7] 羅海東.辛伐他汀聯合非諾貝特對比單用辛伐他汀治療高脂血癥療效與安全性的系統評價[J].中國藥房，2015， 26（12）：1658-1661.

[8] 彭長維，劉秋，馮定奇.非諾貝特治療急性高脂血癥性胰腺炎臨床研究[J].檢驗醫學與臨床，2015，12（7）：963-964.

[9] 楊玲，王陶麗.阿托伐他汀治療伴高脂血癥的非酒精性脂肪肝臨床觀察[J].中國藥師，2012，15（6）：865-866.

[10] Bitzur R，Rozenman Y，Vinker S，et al. Israeli guidelines for thetreatment of hyperlipidemia [J]. Harefuah，2015，154（5）：330-338.

[11] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：353.

[12] 《中藥辭海》編審組.中藥辭海（第三卷）[M].北京：中國醫藥科技出版社，1997：1546-1549.

[13] 劉永蘭，趙喜榮，李燕.高脂血癥的危害及其預防對策[J].中國醫學創新，2012，9（26）：150-151.

[14] 陳名杰，李向平.代謝綜合征血脂異常的特點及治療研究進展[J].心血管病學進展，2011，32（1）：104-107.

[15] Mokale SN，Shete MT，Shaikh SI，et al. Synthesis and hypolipidemic activity of novel2-（4-（2-amino-6-（4-substituted.phenyl）pyrimidin-4-yl）-2-substituted.phenoxy）acetic acid derivatives [J]. Chem Biol& Drug Design，2012， 79（4）：548-552.

[16] 徐道峰，謝東明.動脈粥樣硬化動物模型研究現狀[J].贛南醫學院學報，2012，32（4）：637-638.

[17] 李淑珍，李進.黑果枸杞總黃酮降血脂作用[J].時珍國醫國藥，2012，32（5）：1072-1074.

[18] 楊蓮芳，石敏娟，高錦誠，等.苦丁茶對酒精性脂肪肝模型大鼠脂質代謝的影響[J].中國藥業，2014，23（19）：30-32.

[19] Lin CP，Huang PH，Lai CF，et al. Simvastatin attenuates oxidative stress，NF-κB activation，and arterycalcification in LDL-CR-/- mice fed with high fat diet viadown-regulation of tumor necrosis factor-α and TNF receptor1 [J]. PLoS One，2015，10（12）：e0143686.

[20] Ali MI，Chen X，Didion SP. Heterozygouse NOS deficiency is associated with oxidative stress and endothelial dysfunction in diet-induced obesity [J]. Physiol Rep，2015，3（12）. pii：e12630. doi：10.14814/phy2.12630.

[21] 劉大亮，彭錦德，符洪明.不同劑量辛伐他汀治療老年高血壓病合并高脂血癥的對照研究[J].現代診斷與治療，2015，26（12）：2669-2670.

[22] Yida Z，Imam MU，Ismail M，et al. High fat diet-induced inflammation and oxidative stress are attenuated byN-acetylneuraminic acid in rats [J]. J Biomed Sci，2015，22：96.

[23] 孫若東.臨床血脂測定的主要種類及意義[J].中國實用醫藥，2010，5（18）：100-101.

[24] 徐佳楊，蔡輝.氧化低密度脂蛋白與動脈粥樣硬化的研究[J].安徽醫藥，2011，15（2）：98-102.

[25] 趙德強，王大英，吳秀芬，等.益氣活血化痰方對高脂血癥兔血脂及動脈粥樣硬化的影響[J].時珍國醫國藥，2011， 22（12）：2959-2960.