HPLC法測定氯霉素滴眼液含量的不確定度分析

宋增炫?陳媛?藍紅梅

[摘要] 目的 建立HPLC 法測定氯霉素滴眼液含量的不確定度分析的一般方法。 方法 建立計算氯霉素滴眼液含量的不確定度的數學模型， 找出影響不確定度的因素， 并對各個不確定度分量進行評估。 結果 計算各變量的不確定度分量，最終給出測量結果的擴展不確定度和置信水平。含量測定的標準不確定度為0.522%，擴展不確定度為1.0%。含量測定結果表示為（94.64±1.0）%，包含因子k=2。 結論 建立的不確定度評估方法適用于對HPLC 法測定的氯霉素滴眼液含量進行不確定度分析。

[關鍵詞] 測量不確定；氯霉素滴眼液；HPLC

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）05-31-04

[Abstract] Objective To establish the general method of determination of chloramphenicol eye drops by HPLC. Methods A mathematical model for calculating the uncertainty of chloramphenicol eye drops content was established. Factors affecting uncertainty was selected. The uncertainty components were evaluated. Results The uncertainty components of each variable were calculated， and the extended uncertainty and confidence level were given. The standard uncertainty of measurement was 0.522%， and the expanded uncertainty was about 1%. The results were expressed as （94.64±1）%， including factor k = 2. Conclusion The method of uncertainty evaluation is suitable for the determination of the content of Chloramphenicol Eye Drops by HPLC.

[Key words] Measurement uncertainty； Chloramphenicol eye drops； HPLC

近年來廣東省省級及以上食品藥品檢驗實驗室均開展了大量的測量不確定度評定工作，但地方市級食品藥品檢驗檢測室則對測量不確定度評定工作了解不多。筆者結合日常藥品檢驗的實際工作，對監督抽樣中重點關注品種氯霉素滴眼液的含量測定進行不確定分析。食品藥品檢驗的結論取決于測量所得到的數據或量值（測得值），顯然測得值的質量優劣或可信程度至關重要。其評價指標就是測量不確定度[1]，本文根據《測量不確定度評定與表示》（JJF1059.1-2012）和《化學分析測量不確定度評定》（JJF1135-2005）中的有關規定[2-3] ，對《中國藥典》2010年版氯霉素滴眼液中HPLC法測定氯霉素含量的不確定度進行分析，初步建立了適用于評估氯霉素滴眼液含量測定的不確定度方法，以控制測量結果的有效性和適宜性。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20AT高效液相色譜儀；METTLER AG135電子分析天平；氯霉素滴眼液（規格8mL：25mg， 廣東宏盈科技有限公司，批號：15042401） 氯霉素對照品（由中國食品藥品檢定研究院提供，批號：130555-201203。含量：99.8%）。

2 方法與結果

照《中國藥典》2010年版氯霉素滴眼液項下含量測定方法[4]進行試驗，規定本品含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）應為標示量的90.0%～120.0%。

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3（5μm 4.6mm×250mm）；流動相A為含0.01mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1000mL，再加三乙胺5mL，混勻，用磷酸調節pH值至2.5）；流動相B為甲醇，按下表進行線性梯度洗脫；流速為1.0mL/min；柱溫為 30℃； 進樣量為10μL；檢測波長為277nm。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液（2份） 取供試品5支混勻，精密量取2mL，置50ml量瓶中，用流動相A-B（68：32） 稀釋至刻度搖勻，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液（2份） 精密稱取氯霉素對照品10mg置100mL量瓶中，加甲醇1mL使溶解，用流動相A-B（68：32）稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 測定

精密量取對照品溶液和供試品溶液各10?L注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算供試品中氯霉素（C11H12Cl2N2O5）的含量，并計算與標示量（2.5mg/mL）的百分比。

2.4 結果

試驗結果見表2。

3 標準不確定度的評定[5-8]

3.1 對照品取樣量的相對標準不確定度urel（m對）

對照品取樣量m對的不確定度由天平引入，天平稱量重復性不確定度查天平檢定證書：RDJZ-20130301給出重復性誤差為± 0.02 mg，認為矩形分布，則Urel（R1）=0.02/=0.0115。天平示值不確定度查天平檢定證書：RDJZ-20130301給出示值誤差為± 0.03 mg，認為矩形分布 ，Urel（R2）=0.03/=0.0173 。因稱量為減重法，即2 次稱量，每份對照品稱量的相對標準不確定度為：

3.2 對照品溶液體積n對的相對標準不確定度urel（n對）

對照品溶液定容產生的不確定度，包括容量瓶允差、溫度帶來的不確定度，認為線性疊加。

3.2.1 查JJG196-2006《常用玻璃量器》檢定規程，A級100mL量瓶的允許誤差為±0.10mL，因歷年校準結果實際誤差都較小，故按三角分布考慮：

u允差（100）=0.10/=0.0408（mL）

4.2 計算測得值的合成標準不確定度

報告值的不確定度還應包含測量重復性的影響，為提高可信度，對樣品平行操作6份，以貝塞爾公式計算標準差，數據見表3。

5 擴展不確定度的評估

取包含因子k=2，擴展不確定度為：U= uc測得值（c氯霉素）×2=1.0%。

6 報告

氯霉素滴眼液中氯霉素相當于標示量的含量測量結果為C=（94.64±1.0）%，k=2。

7 討論

通過對不確定度測量的評定可幫助我們在日常檢驗工作中找到影響檢測結果準確性的關鍵因素，提高我們檢驗結果的準確性和可靠性[11-15]。分析不確定的每一個來源，對其影響因素進行分析，結果見表3。由表3可見對照品取樣量的相對標準不確定度urel（m對）是分析中不確定度的主要因素，因此，試驗過程中應采用精密度高、性能佳的天平；實驗室要經常對天平進行維護保養。供試品取樣量的相對標準不確定度urel（V供）是第二影響因素，對吸量管、容量瓶等玻璃儀器一定要經校正后再使用，HPLC法中，儀器的進樣量，流速、檢測器的靈敏度、積分的準確性等均會影響測定結果，無法一一進行評估，因此，我們平時在試驗中因此應加強對實驗儀器的維護保養， 保持其穩定的工作狀態， 同時要加強實驗過程的控制，可選定一種或幾種較為穩定的樣品作為平時對儀器性能的監測和內控。

多參加各種實驗室測試能力比對。并加強試驗人員基本操作以及減少各種人為因素對結果的影響。

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（收稿日期：2016-01-04）