表觀彌散系數評價壁虎活性單體治療兔肝臟VX2移植瘤療效的價值＊

范鵬琳，林明明，劉 峰，王苗苗，劉玉璽，賀 皓，孫業全

介入治療是肝細胞肝癌的主要非外科治療手段，具有創傷小、栓塞腫瘤供血動脈效果明顯、局部藥物濃度高等優點［1］。由于常規的化療藥物介入治療后可引起肝功能損害、免疫功能降低等不良反應，使得經皮肝動脈化療栓塞（transcatheter hepatic arterial chemoembolization，TACE）技術受到一定的限制。因此，研制低毒、靶向的介入制劑成為提高肝癌化療栓塞療效的發展方向。20世紀80年代，馮敢生等［2］在國內首次應用中藥白芨經肝動脈介入治療肝癌，取得了良好的效果，從此，中藥聯合TACE成為中晚期肝癌及肝轉移瘤頗為有效的姑息治療方法［3］。壁虎活性單體是從新鮮的無蹼壁虎中提取而來，對腫瘤特別是肝癌等實體瘤具有獨特的療效［4］。該研究通過局部灌注壁虎活性單體治療兔肝臟VX2移植瘤，并應用磁共振彌散加權成像技術監測評估其近期介入治療療效。

1 材料與方法

1.1 動物模型建立 隨機取普通級純種健康成年新西蘭大白兔 （購于山東省農科院，許可證號SCXK20090013）25 只，雌雄不限，體重 2.5～3.0 kg，將傳代荷瘤兔腫瘤制成1 mm3大小的瘤塊備用，將麻醉（2%戊巴比妥鈉，5±1 ml/只）好的實驗兔固定于兔臺，碘附消毒，鋪無菌洞巾后行腹部正中切口，自劍突下切開長約1.5 cm的切口，鈍性分離后暴露出肝臟，輕柔地將肝左葉拉出體外，用眼科鑷在肝左葉膈面插入約0.5 mm深的竇道，將準備好的瘤粒植入，然后用明膠海綿填塞竇口，用蘸有生理鹽水的紗布按壓數分鐘，確認無出血后回納肝臟，逐層縫合。縫合后碘附消毒，術后連續四天后肢外側肌肉注射頭孢氨芐青霉素（60萬U/只·d）。

1.2 實驗分組和藥物干預 2 w后，超聲 （美國Siemens Medical公司的乳腺容積成像系統，型號ACUSON S2000，探頭為 9L4，頻率范圍為 5～8 MHz）篩選20只建模成功的大白兔，隨機平均分為2組。實驗組：選擇右側腹般溝區備皮、消毒，暴露出約2 cm的股動脈。用眼科剪剪一“V”字形小口，引入3F微導管及微導絲，透視下間斷注入造影劑尋找腹腔干開口，當導管頂端在胸12和腰1椎體間出現“嵌入”現象時造影，直至找到腹腔動脈開口，進入腹腔動脈并超選至肝左動脈，造影可見腫瘤組織輕度染色（圖1A），然后灌注混有壁虎活性單體的碘化油栓塞目標血管（圖1B），完成后近端股動脈結扎。對照組操作同實驗組，栓塞劑僅有碘化油。

圖1 藥物灌注前后腫瘤組織圖像

1.3 MRI檢查 術前1 d及術后3周采用GE Signa3.0TMR掃描儀行MR掃描，掃描參數：T1WI TR 2240 ms，TE22.0 ms，NEX 為 2 次；T2WI TR5620 ms，TE119.6 ms，NEX為1次，所有軸位成像采用快速自旋回波 （Fast Spinecho，SE），FOV24.0 cm， 矩陣256×256，層厚 5.0 mm，層間距 5.5 mm。DWI參數：TR5000 ms，TE75.9 ms，NEX 為 2 次，FOV24.0 cm，矩陣 160×160，層厚 5.0 mm，層間距 5.5 mm，b值分別取0、1000 s/mm2。觀察腫瘤的形態、境界、信號以及有無局部浸潤等情況。在腫瘤的最大層面上測量感興趣區（ROI）的 DWI信號值（b=1000），ADC 參數圖上自動顯示ADC值，連續層面測定并計算平均值（去除頭尾兩層避免部分容積效應）。ROI應選擇相應層面同一位置進行測量。比較兩組腫瘤DWI信號強度及ADC值治療前后變化［5］。

1.4 病理學檢查 實驗結束后，將腫瘤組織完整切除，觀察瘤組織大小、色澤質地、表面結節等。4%甲醛固定、石蠟包埋、切片，常規HE染色。

1.5 統計學處理 采用統計學軟件SPSS 17.0進行相關統計學檢驗，連續正態分布變量資料數據以x±s表示，組間比較采用 t檢驗；P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 MRI表現 肝左葉可見圓形或類圓形的實性瘤灶，T1WI呈低信號，T2WI示腫瘤呈高信號，境界清楚，腫瘤信號均勻；術前腫瘤DWI信號呈高信號，信號均勻（圖 2A、3A），強度（1626.20±370.10），ADC 值為（0.9±0.1）×10－3mm2/s；術后實驗組及對照組T2WI及DWI信號較術前減低，以實驗組較明顯（圖2B、3B），術后實驗組、對照組腫瘤DWI信號強度分別為 653.69±67.82，785.34±98.13，ADC 值分別為（1.67±0.54）×10－3mm2/s 和（1.47±0.36）×10－3mm2/s，治療前、后實驗組DWI信號強度及ADC值差異均具有統計學意義 （P＜0.01）；治療前、后對照組DWI信號強度及ADC值差異均具有統計學意義（P＜0.05）；術后兩組DWI信號強度及ADC值差異均具有統計學意義（P＜0.05）。

圖2 對照組術前和術后DWI掃描像

圖3 實驗組術前和術后DWI掃描像

圖4 對照組和實驗組的病理切片圖像（10×）

2.2 病理學結果 腫瘤表面欠光滑，質地較韌，切面呈灰白色、魚肉狀，部分腫瘤組織內部凝固性壞死；對照組鏡下觀可見散在的細胞核固縮、碎裂，壞死程度相對較輕；實驗組切片可見小片狀無結構的紅染區，壞死程度較重。

3 討論

肝癌嚴重影響著人類健康，在傳統抗腫瘤藥物存在一定不良反應的情況下，從天然動植物中提取低毒、高效、多靶點的抗腫瘤藥物成了藥物研發的熱點［6］。國醫藥典中記載，壁虎對腫瘤特別是肝細胞癌等實體瘤具有獨特的療效［4］，其主要作用機制為：（1）免疫調節作用；（2）抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡；（3）抑制血管生成；（4）調節腫瘤微環境。雖然壁虎活性單體的藥效學研究很多，但其治療劑量的研究卻少有報道，該實驗采用的濃度（20 mg/kg）是在趙榮榮等［5］研究的基礎上確定，其認為壁虎活性單體對兔VX2移植瘤具有雙重作用，低濃度時促進腫瘤的生長，高濃度（20 mg/kg）時抑制腫瘤的生長。

MR彌散加權成像（DWI）因其評價抗腫瘤藥物的療效具有早期、可重復、無創傷等優點［7］，而成為近年來研究的熱點［8－10］。 DWI能夠反映在體組織內水分子的微觀擴散情況，ADC值的變化反映組織結構的變化。ADC值的大小主要由細胞外間隙的彌散阻力決定，其次為細胞的含水量等［11］。DWI評價介入短期療效的原理：TACE能直接或間接閉塞腫瘤的供血動脈，使得腫瘤細胞因缺少營養物質而出現凋亡、壞死，從而增加細胞外間隙游離水的含量，DWI圖像上表現為低信號，ADC值升高。而正常肝組織中70%左右的血供由門靜脈供血，且組織內枯否細胞能代謝碘油，因此介入治療前后對正常肝臟組織的 ADC值變化無明顯影響［12］。研究發現：實驗組和對照組的ADC值均升高，而且實驗組升高的較為明顯，說明實驗組的腫瘤組織壞死較多，病理結果也證實實驗組瘤組織出現壞死較對照組范圍廣且徹底，與理論相符合。該實驗說明了壁虎活性單體聯合碘油栓塞較單純栓塞對癌細胞的殺傷能力更強，其效果優于單純碘油栓塞，說明壁虎活性單體對腫瘤細胞具有顯著的抑制作用。

綜上所述，適量壁虎活性單體聯合介入能夠有效抑制腫瘤的生長；MR彌散加權成像可以準確、客觀、無創的評價壁虎活性單體聯合對兔肝VX2移植瘤的作用。

參考文獻

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