胃舒康顆粒質量標準的修訂與完善＊

郭曉英，孫 旭，馬曉昱，劉云云，陳 瑤

胃舒康顆粒是海軍青島第二療養(yǎng)院經多年臨床研究研制的由丹參、黃芪、黃連、紅花和當歸等組成的純中藥制劑，具有行氣活血、溫中祛寒的作用，用于萎縮性胃炎，疣狀性胃炎，胃黏膜脫垂，胃十二指腸球部潰瘍恢復期等慢性胃病的治療，療效確切。為了進一步完善該品種的質量標準，配合醫(yī)療機構制劑標準提高，筆者對該制劑的質量標準進行修訂，采用TLC法對處方中黃芪、原兒茶醛、黃連、紅花、川芎和當歸等進行了定性鑒別，建立HPLC法測定丹參素鈉含量的方法。結果表明本法結果準確，重現性好，能有效控制該制劑質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 薄層層析硅膠G、硅膠G254、硅膠H（青島海洋化工集團）；ZF－6型三用紫外分析儀；METTLER AE240電子天平；Agilent 1100高效液相色譜儀；AS－B超聲波清洗儀；HG－B電熱恒溫干燥箱；HH－8電熱恒溫水浴鍋。

1.2 試藥 對照品黃芪甲苷 （批號110781－201314）、原兒茶醛 （批號 110810－201007，純度98.2%）和丹參素鈉 （批號110855－201311，純度98.1%），對照藥材黃連（批號 120913－201310）、紅花 （批號 120907－201111）、 川芎 （批號 120918－201110）和當歸（批號 120927－201315），上述對照品和對照藥材均購自中國食品藥品檢定所；胃舒康顆粒（批號 20130401、20130902、20140101）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 黃芪的鑒別［1，2］取本品12 g，置索氏提取器中，加甲醇50 ml提取6 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，轉移至分液漏斗中，加0.15 mol/L氫氧化鈉溶液飽和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用0.15 mol/L氫氧化鈉溶液洗滌3次，10 ml/次，棄去氫氧化鈉液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇0.5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg溶液，作為對照品溶液。再取不含黃芪的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述3種溶液各5 μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（65∶35∶10）10 ℃以下放置分層的下層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。結果：供試品色譜與對照品色譜相應的位置上顯示相同顏色的斑點，結果見圖1A；置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應的位置上呈現相同的熒光斑點。結果見圖1B。

圖1 黃芪鑒別

2.1.2 原兒茶醛的鑒別［1，2］取本品12 g，加水25 ml使溶解，用鹽酸調節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加無水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。再取不含原兒茶醛的陰性樣品，供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－甲酸（8∶6∶1.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光（254 nm）下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應的位置上呈現相同的熒光斑點。結果見圖2。

圖2 原兒茶醛的鑒別

2.1.3 黃連的鑒別［1，2］取本品 12 g，加甲醇 20 ml，超聲處理，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.5 g，加甲醇10 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為對照品溶液。再取不含黃連的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法 （《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，點于同一硅膠G254薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－異丙醇－水 （6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）為展開劑（同時在展開箱中放入一小燒杯與展開劑等體積的濃氨試液飽和15 min），展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。供試品色譜與對照藥材色譜相應的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點。結果見圖3。

圖3 黃連的鑒別

2.1.4 紅花的鑒別［1，2］取本品 12 g，加 80%丙酮溶液 30 ml，密塞，振搖 15 min，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對照藥材0.5 g，加80%丙酮溶液5 ml，按供試品溶液項下方法制成對照藥材溶液。再取不含紅花的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法 （《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5～10 μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇（7∶2∶3∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜與對照藥材色譜相應的位置上顯示相同顏色的斑點。結果見圖4。

2.1.5 川芎、當歸的鑒別［1，2］取本品 12 g，加濃氨試液 2 ml，乙醇 50 ml，搖勻，靜置 30 min，超聲處理15min，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另分別取川芎、當歸對照藥材各0.5 g，各加濃氨試液2 ml，乙醇25 ml，按供試品溶液項下方法制成對照藥材溶液。再取不含川芎、當歸的陰性樣品，按供試品溶液項下方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，分別吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。結果供試品色譜與對照藥材色譜相應的位置上顯示相同顏色的熒光斑點，結果見圖5。

圖4 紅花的鑒別

圖5 川芎、當歸的鑒別

2.2 丹參素鈉的含量測定［2－4］

2.2.1 色譜條件及系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－1%醋酸溶液 （2∶98）為流動相；檢測波長280 nm；柱溫為25℃；流速1.0 ml/min；丹參素鈉峰保留時間為12.848 min，分離度為2.21，理論板數為2322。陰性對照、對照品以及供試品的HPLC色譜圖見圖6A，6B和6C。

圖6陰性對照、對照品以及供試品的HPLC色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備 取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成濃度為1.017 mg/ml的對照品溶液 （對照品儲備液），精密量取1 ml置25 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得濃度為40.69 μg/ml的對照品溶液。

正確的監(jiān)測分析方法是獲得準確結果的關鍵因素之一。每一種監(jiān)測分析方法的靈敏度和準確度要能滿足要求，方法成熟，抗干擾能力強，操作簡便。在常規(guī)監(jiān)測中，分光光度法用得較多，可測定多種金屬和非金屬離子或化合物；原子吸收法主要用于多種微量、痕量金屬元素的測定；容量法主要用于DO、COD、BOD5等的測定。審核時主要關注一些新監(jiān)測標準和方法有沒有進行及時更新。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取胃舒康顆粒6 g，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇30 ml，超聲處理30 min，放冷，濾過，取續(xù)濾液5 ml至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液的制備 取缺制丹參的樣品，按“2.2.3”項下方法制備成陰性對照品溶液。

2.2.5 標準曲線的繪制 取“2.2.2”項下丹參素鈉對照品貯備液適量，用50%甲醇稀釋，得系列標準溶液。含丹參素鈉分別為 10.17、20.35、40.69、81.38、162.77 μg/ml，分別取 20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。 以峰面積值為縱坐標（Y），濃度（μg/ml）為橫坐標 （X）繪制標準曲線。計算得回歸方程，Y=13.671X+5.8542，R2=0.9998。實驗結果表明丹參素鈉在10.17～162.77 μg/ml的范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取“2.2.5”項下40.69 μg/ml對照品溶液 20 μl，按“2.2.1”項下色譜條件重復進樣6次，記錄峰面積值，計算RSD （n=6）為0.15%。說明儀器的精密度良好。

2.2.7 重現性試驗 取胃舒康顆粒 （批號20130401），按“2.2.3”項下方法分別制備 6份供試品溶液，分別進樣20 μl，記錄丹參素鈉峰面積值，計算RSD（n=6）為0.13%，表明方法重復性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取胃舒康顆粒 （批號20130401），按“2.2.3”項下方法配制供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、12 h 進樣 20 μl，按“2.2.1”項下色譜條件，測定丹參素鈉的峰面積，計算RSD為0.37%，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

表1 胃舒康顆粒中丹參素鈉加樣回收率試驗測定結果

2.2.10 樣品含量測定 按“2.2.1”項下色譜條件，精密吸取“2.2.2”、“2.2.3”項下溶液各 20 μl，照 2015年版《中國藥典》四部通則0512，進樣胃舒康顆粒樣品（批號 20130401、20130902、20140101），每批樣品測定2份，以外標法計算各個樣品中丹參素鈉的含量，結果詳見表2。

表2 胃舒康顆粒中丹參素鈉含量測定結果（n=2）

3 討論

3.1 TLC鑒別 該文通過試驗制定了黃芪、黃連、原兒茶醛、紅花、川芎和當歸的TLC鑒別方法，該方法特征斑點明顯，色譜分離清晰，可作為胃舒康顆粒中黃芪、黃連、原兒茶醛、紅花、川芎和當歸［1，3，4］的專屬性鑒別。

3.2 樣品溶液的制備 該實驗在前處理過程中進行了不同提取溶劑的比較［2，5－11］，如酸處理－乙酸乙酯萃取或50%甲醇回流提取，結果表明采用顆粒直接加50%甲醇超聲30 min提取制備丹參素鈉含量測定樣品溶液，可有效提取所含丹參素鈉；該方法簡便、可靠、重現性好，縮短了檢驗流程，避免了回流提取萃取分離的繁瑣操作，節(jié)省了人力物力。

3.3 流動相選擇 該實驗亦比較了不同比例流動相對峰型、分離度的影響，如甲醇－1%HAc（2∶98），甲醇－1%HAc（4∶96），甲醇－1%HAc（6∶94），最終確定流動相為甲醇－1%HAc（2∶98）時丹參素鈉峰型及分離度較好。

該實驗建立的含量測定方法，經方法學研究結果表明簡便、可行、快捷，專屬性強，準確度、靈敏度及重現性好，可用于胃舒康顆粒的質量控制。

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