腎毒寧顆粒劑對慢性腎衰竭大鼠抗氧化作用研究

胡雙燕 熊榮兵 傅曉駿#

1 浙江中醫藥大學第三臨床醫學院 浙江 杭州 310053 2 浙江省金華市中醫醫院 浙江 金華 321017

腎毒寧顆粒劑對慢性腎衰竭大鼠抗氧化作用研究

胡雙燕1熊榮兵2傅曉駿2#

1 浙江中醫藥大學第三臨床醫學院 浙江 杭州 310053 2 浙江省金華市中醫醫院 浙江 金華 321017

目的：研究腎毒寧顆粒劑抗氧化應激的作用及延緩慢性腎功能衰竭進展的可能作用機制。方法：Platt法5/6腎切除慢性腎衰大鼠模型，術后一周下頜靜脈采血，測定腎功能，根據肌酐分組，分為腎毒寧顆粒低、中、高劑量組，科素亞組，另設正常組，模型組，每組18只，灌胃60天，在處死大鼠前1天收集24h尿液，測定24h尿蛋白定量,處死大鼠測定尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、血肌酐（serumcreatinine，Scr）、24h尿蛋白含量、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）。結果：與模型組比較，各治療組BUN、Scr、24h尿蛋白含量表達均下降，SOD升高，MDA表達均下降(P＜0.05)，腎毒寧顆粒低，中，高劑量組與科素亞組間無統計學差異。結論：腎毒寧顆粒劑可降低大鼠BUN、Scr、24h尿蛋白含量，保護腎功能，并可以降低MDA，提高大鼠SOD含量提高抗氧化能力。

慢性腎衰竭 氧化應激 抗氧化 腎毒寧 實驗研究

為探討腎毒寧顆粒劑及其不同劑量具有的抗氧化應激，延緩慢性腎功能衰竭進展作用功效，探討腎毒寧的作用是否存在劑量相關性，我們進行了此項研究，現報道如下。

1 材料

1.1 實驗動物:健康成年雄性SD大鼠(SPF級)120只，8周齡,體重(200±20)g，由上海西普爾-必凱實驗有限公司提供。大鼠分籠飼養于25℃12h光照、45%濕度的環境中，自由飲水，進食標準普通飼料。

1.2 試驗藥物和使用劑量:腎毒寧顆粒（廣東一方制藥有限公司，主要成分:黃芪、仙靈脾各30g，沉香粉2g，丹參、制大黃各15g，桃仁10g，黃精20g)。高劑量為人鼠計量20倍換算，低劑量5倍，中劑量為10倍。科素亞（杭州默沙東制藥有限公司生產）大鼠用量按照人鼠計量10倍劑量換算為=100×6/70=8.6mg/kg/d。每日每只予相應藥液2ml灌胃。正常組和模型組給予2ml生理鹽水灌胃。

1.3 主要試劑及儀器:全自動生化分析，尿素氮（Bloodureanitrogen，BUN）、血肌酐（serumcreatinine，scr）、24h尿蛋白含量、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）、脂質過氧化物丙二醛（malondialdehyde， MDA）試劑購自由南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 模型制作:大鼠適應性飼養1周后，以2%戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉，備皮，用碘酒、75%酒精消毒手術區后鋪巾，距左脊肋骨1.5cm處斜向外方切口,經后腹膜取腎,暴露腎臟,分離腎周脂肪后,弧型切除2/3腎組織(主要切除皮質部分)，用明膠海綿壓迫止血片刻,再滴加數滴纖維蛋白原和凝血酶溶液,稍等片刻,當切面上不再有活動性出血后復位剩余左腎,縫合；1周后再次手術切除整個右腎。另取正常SD大鼠15只,造模步驟同上,但不切除腎組織，僅剝離左右腎包膜,保留腎上腺,作為模型組。正常組正常飼養,不做處理。

2.2 實驗分組:動物模型造模后1周測定大鼠血肌酐，根據肌酐隨機分組。剔除手術死亡的大鼠12只，每組18只，共6組。分為A組（正常），B組（模型），C組（腎毒寧顆粒），其中腎毒寧顆粒組又分低、中、高劑量組（分別為C1、C2、C3組），D組（科素亞組）。

2.3 干預方案:Platt模型制備成功并按照血肌酐分組后，腎毒寧顆粒方組中藥每日灌胃，高劑量為人鼠計量20倍換算，低劑量為人鼠計量5倍換算，中劑量為鼠計量10倍換算。對照組科素亞每日灌胃，大鼠用量按照人鼠計量10倍劑量換算為=100×6/70=8.6mg/kg/d，共60天。灌胃容積控制在2ml以下。正常組和模型組同體積生理鹽水灌胃。

2.4 取材、觀察指標及檢測方法：分述如下。

2.4.1 取材:治療結束后各組大鼠首先分別置代謝籠內留取24h尿液,-70℃保存；末次給藥后禁食12h,摘眼球采血,分離血清后待測-70℃保存，并取腎皮質加0.9%生理鹽水制成勻漿,取上清液備測。

2.4.2 觀察指標:血清BUN、Scr、24h尿蛋白含量、SOD、MDA。

2.4.3 檢測方法:全自動生化分析儀測定血BUN、Scr水平；磺柳酸比色法檢測24h尿蛋白含量；化學比色法測定腎皮質SOD和MDA水平。

2.5 統計學方法:計量資料用-x±s表示，應用SPSS17.0軟件進行統計分析,組間比較用單因素方差分析檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 死亡情況:在實驗過程中，共有6只大鼠死亡，其中腎毒寧低劑量組1只，中劑量組1只，高劑量組2只，科素亞組2只。

3.2 各組大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量統計結果情況:見表1。各組大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量與模型組比較明顯降低(P＜0.05)，而各治療組（C1組，C2組，C3組，D組）比較無明顯差異（P＞0.05）；腎毒寧中,高劑量組具有相對明顯的降尿蛋白定量作用。

表1 各組大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量比較（±s）

表1 各組大鼠血清Scr、BUN及24h尿蛋白定量比較（±s）

注:與A組比較,*P＜0.05；與B組比較,▲P＜0.05。

組別 例數Scr(mmol/L)BUN(mmol/L) A組B組C1組C2組C3組D組6.86±0.63▲19.58±3.66*15.44±2.66*▲14.65±2.34*▲14.47±2.03*▲16.20±2.40*▲18 18 17 17 16 16 24尿蛋白定量(mg/24h) 41.99±12.7▲243.76±94.33*168.31±24.25*▲157.07±23.91*▲153.14±24.63*▲175.36±35.34*▲29.47± 4.40▲91.47±21.02*56.54±11.95*▲54.01±11.98*▲52.23± 9.41*▲60.70± 9.61*▲

3.3 各組大鼠血清SOD、MDA統計結果情況:見表2。與模型組比較，各組血清SOD明顯升高，有統計學意義(P＜0.05)；血清MDA明顯降低，有統計學意義（P＜0.05）。而各治療組比較無明顯差異（P＞0.05）；各治療組中，腎毒寧低,中劑量組提高SOD含量，降低MDA含量效果更優。

4 討論

腎毒寧顆粒由黃芪、仙靈脾、沉香粉、丹參、制大黃、桃仁、黃精組成，方中黃芪性溫，有益氣、升陽、補虛、消腫的功效，通過抗氧化、清除自由基、促進細胞

代謝、利尿消腫、減少尿白蛋白排泄、促肝臟合成白蛋白、降脂、調節免疫、降血壓等作用，保護腎臟細胞免受傷害,保護殘存腎單位,延緩腎臟疾病進展的作用。仙靈脾性溫，有溫腎、助陽、填補精氣作用，可以升高SOD水平，增加清除自由基能力，減少MDA的增多，從而增強組織抗氧化系統，對抗自由基損傷，具有抗氧化、延緩衰老的作用。沉香性溫味辛，有行氣止痛，溫中止嘔，納氣平喘作用，沉香揮發油能通過增強細胞內抗氧化酶活力，保護細胞對抗氧化損傷，減少細胞內活性氧水平，顯著增強細胞內抗氧化酶SOD、GSH-Px活力，減少MDA生成，具有一定的抗氧化作用。丹參微寒，有益氣補血活血之功效，丹參的脂溶性有效單體丹參酮ⅡA治療后，可使大鼠血清Bun、Cr水平降低、SOD活力明顯升高，MDA含量明顯降低。丹參酮ⅡA可以通過改善大鼠腎組織的氧化應激，減少尿蛋白、改善腎功能和延緩腎臟損害。大黃性寒有清熱泄濁、活血通便作用，瀉下作用增加腸道對尿毒癥毒素排泄,現代藥理研究證實,大黃具有清除氧自由基、調節脂質代謝、抗菌消炎、調節免疫、拮抗炎性細胞因子等作用。桃仁性平而活血祛瘀，能提高腎臟血流量,改善微循環和提高組織膠原酶活性,從而促進腎內的膠原分解、代謝,減少腎內膠原的含量,改善腎纖維化。黃精性平而益腎補精，具有抗氧化、抑制體內氧化應激水平、減輕腎組織氧化應激損傷的作用[1]。本實驗研究結果證實，腎毒寧顆粒劑具有一定的腎保護作用，其機制可能與其改善抗氧化作用有一定的關系，其具體作用機制待進一步研究。

表2 各組大鼠血清SOD、MDA比較（±s）

表2 各組大鼠血清SOD、MDA比較（±s）

注:與A組比較，*P＜0.05；與B組比較，▲P＜0.01，◆P＜0.05。

MDA(nmol/ml) 6.70±1.12▲16.71±2.11*9.11±1.30*◆8.89±0.97*◆8.67±1.76*◆9.73±1.69*◆組別A組B組C1組C2組C3組D組例數18 18 17 17 16 16 SOD(U/ml) 133.97±37.14▲76.71±15.76*113.85±19.28*◆106.96±20.17*◆116.00±19.16*◆116.23±21.06*◆

[1]郎旭軍,傅曉駿,成棟,等.腎毒寧沖劑抗慢性腎衰大鼠自由基損傷的實驗研究[J].浙江中醫雜志,2007,42（10）:602-604.

2016-09-23

浙江省自然科學基金項目腎毒寧對腎衰大鼠HO-1蛋白基因表達及Nrf2/ARE信號通路的影響，編號：LY15H270001

# 通訊作者：傅曉駿,E-mail：fuxiaojun@medmail.com.cn