川芎嗪對AD大鼠氧化應激影響的初步研究①

王圣也，倫 澤，石俊杰，劉福興,許夢婷，宋慶嬌，張 濤，柳朝陽

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007 )

川芎嗪對AD大鼠氧化應激影響的初步研究①

王圣也，倫 澤，石俊杰，劉福興,許夢婷，宋慶嬌，張 濤，柳朝陽

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007 )

目的：探討川芎嗪對AD大鼠氧化應激的影響。方法：用DCFH-DA(二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯)熒光包被探針法檢測細胞內總ROS；鄰苯三酚自氧化法檢測大鼠血清及海馬組織SOD活性； 硫代巴比妥酸法檢測大鼠血清及海馬MDA含量。結果：與AD模型組相比，川芎嗪組大鼠海馬細胞內總ROS含量降低(P<0.05)、血清SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)、海馬細胞內SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)。結論：川芎嗪可提高AD模型大鼠的抗氧化能力，防止神經元細胞損傷。

川芎嗪；AD大鼠；氧化應激

阿爾茨海默病(AD)中，β-淀粉樣蛋白斑塊(Aβ)、神經炎癥、神經纖維纏結、氧化應激反應廣泛[1]是主要病理特征。氧化應激是AD病理過程的最早應激事件[2，3]。活性氧(ROS)的含量反應細胞內氧化應激的水平，本課題中，我們應用川芎嗪干預，檢測AD模型大鼠海馬組織細胞內總ROS、SOD和MDA含量，為川芎嗪防治AD提供實驗依據。

1 材料和方法

1.1 動物和材料

成年雌性SD大鼠 30只，平均240g，由佳木斯大學動物實驗中心提供。

川芎嗪和Aβ1-40購于Sigma公司；ROS、SOD、MD檢測試劑盒購于北京中杉金橋生物公司。

1.2 方法1.2.1 動物模型的建立[4]

1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉各組SD大鼠，注射部位是海馬CAI區：根據Cusmhnao與Pellegrin大鼠腦定位圖譜，制定注射點是中線左側2.1mm，前囪后3.4mm，硬腦膜下2.9mm，Aβ1-40溶液注射1μL，留針5min,假手術組生理鹽水等量注射。

1.2.2 試驗分組與給藥

大鼠隨機分3組：川芎嗪組：川芎嗪(250mg/kg·d灌胃24d;假手術組與AD模型組：等量生理鹽水灌胃。

1.2.3 大鼠海馬組織總ROS測定

10微摩DCFH-DA加入單細胞海馬組織懸液。37℃作用20min，DMEM細胞洗滌。在488納米激發波長和發射波長525納米下，ROS的含量用流式儀檢測的熒光強度來表示。

1.2.4 大鼠血清及海馬組織SOD活性測定

大鼠心臟血清進行分離，在血清中進行SOD活性檢測。在分離的大腦海馬組織中加入4℃生理鹽水，研磨后獲取勻漿組織，取上清液按照試劑盒操作檢測SOD活性。

SOD血清值=(對照管OD值-測定管OD值)/對照管OD值/50%×稀釋倍數×樣本稀釋倍數

SOD組織勻漿值=(對照管OD值-測定管OD值)/對照管O值/50%×反應體系的稀釋倍數/樣本蛋白濃度

1.2.5 大鼠血清及海馬組織MDA含量測定

取待測血清及 10%海馬組織勻漿，按試劑盒要求配試劑和操作。

血清MDA值=(測定管OD值-對照管OD值)/(標準管OD值-空白管OD值)×標準品濃度×樣本稀釋倍數

組織勻漿MDA含量=(測定管OD值-對照管OD值)/(標準管OD值-空白管OD值)×標準品濃度(10nmol/mL)/待測樣本蛋白濃度。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 川芎嗪對AD大鼠海馬細胞總ROS生成的影響

與假手術組比，AD大鼠海馬細胞ROS含量增加(P<0.05)。川芎嗪治療后，AD模型大鼠海馬細胞內總ROS含量降低(P<0.05)，與假手術組比無顯著差異(P>0.05) ，見表1。

2.2 川芎嗪對AD大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響

與假手術組比，AD大鼠血清SOD活性降低

(P<0.05)。川芎嗪治療后，與AD模型組相比，大鼠血清SOD活性升高(P<0.05)，與假手術組比無顯著差異(P>0.05)。見表2。與假手術組比，AD大鼠血清MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治療后，與AD模型組相比，大鼠血清MDA含量降低(P<0.05)，與假手術組比無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表1 各組大鼠海馬組織細胞內總ROS含量±s,n=10)

注：與假手術組相比a)P<0.05，與AD模型組相比b)P<0.05。

表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量

注：與假手術組相比a)P<0.05，與AD模型組相比b)P<0.05。

2.3 川芎嗪對AD模型大鼠海馬細胞內SOD活性和MDA含量的影響

與假手術組比，AD大鼠海馬細胞內SOD活性降低(P<0.05)。川芎嗪治療后，與AD模型組相比，大鼠海馬細胞內SOD活性升高(P<0.05)，與假手術組比無顯著差異(P>0.05)，見表3。與假手術組比，AD大鼠海馬細胞內MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治療后，與AD模型組相比，大鼠海馬細胞內MDA含量降低(P<0.05)，與假手術組比無顯著差異(P>0.05)，見表3。

表3 各組大鼠海馬細胞內SOD活性和MDA含量

注：與假手術組相比a)P<0.05，與AD模型組相比b)P<0.05。

3 討論

氧化應激指有害刺激作用機體時，氧化系統和抗氧化系統失衡，活性氧自由基(ROS)產生過多超出氧化物的清除，導致組織損傷[5,6]。細胞內氧化應激的水平可由ROS的生成多少直接反應。本實驗川芎嗪干預后，AD模型大鼠總ROS含量明顯降低，說明川芎嗪對AD模型大鼠海馬組織細胞內氧化應激水平有明顯的影響。川芎嗪減輕氧化應激對神經元損傷可能通過降低過氧化物和氧化自由基的生成。生物體清除自由基通過SOD(超氧化物歧化酶)，SOD可阻斷并修復氧化自由基對組織細胞的侵害[7, 8]。MDA是是生物細胞的氧化應激導致脂質過氧化的終末代謝產物。AD發病過程中MDA的毒性可使神經元變性壞死凋亡，因此，機體受ROS攻擊的程度MDA能夠間接反映出來[9,10]。老年斑、神經元纖維纏結常和MDA的高水平同時出現在AD模型大鼠腦組織。本實驗中AD模型大鼠血清SOD活性下降，MDA含量顯著升高。川芎嗪干預后，提高了SOD活性，可使脂質過氧化減少，氧化自由基被有效的清除，川芎嗪干預后，降低了MDA含量，減輕了組織脂質過氧化損傷，MDA毒性引發的組織損傷可以避免。綜上，AD大鼠抗氧化能力川芎嗪能夠在整體水平提高。本實驗中，川芎嗪干預后，明顯升高AD大鼠海馬細胞SOD活性，降低MDA含量，提示川芎嗪可從整體和病變的關鍵區域(海馬組織)兩方面提高AD模型大鼠機體的抗氧化能力。

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1.黑龍江省大學生創新創業訓練計劃項目，編號：201610222037；2. 佳木斯大學科基礎研究類(自然類)面上項目，編號：JMSUJCMS2016-023；3.黑龍江省普通高等學校青年學術骨干支持計劃項目，編號：1252G059。

王圣也(1996～)男，黑龍江巴彥人，在校本科生。

柳朝陽(1971～)男，黑龍江嘉蔭人，碩士，副主任醫師，碩士研究生導師。E-mail：ztlzy888@163.com。

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1008-0104(2017)02-0029-02

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