mTOR、p70S6K在子宮腺肌病中的異常表達及其意義①

吳雅冬，李亞君，朱紫薇，馮元元，陳 麗

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

mTOR、p70S6K在子宮腺肌病中的異常表達及其意義①

吳雅冬，李亞君，朱紫薇，馮元元，陳 麗

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：通過研究哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70S6K在子宮腺肌病異位病灶、在位內膜組織中及正常子宮內膜組織中的表達情況，以探索其與子宮腺肌病發生發展的關系。方法：采用免疫組化方法檢測p-mTOR和p-P70S6K在異位病灶組、在位內膜組、正常子宮內膜組細胞中的表達。結果：p-mTOR和p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中及在位內膜中的表達高于正常子宮內膜組(P<0.05)，異位病灶與在位內膜中二者的表達無差異(P<0.05)。異位病灶組中p-mTOR和p-P70S6K的表達具有相關性(r=0.778,P<0.05)。結論：mTOR與P70S6K的高表達促進了子宮腺肌病的發生與發展。

mTOR；P70S6K；子宮腺肌病

子宮腺肌病是指異位的子宮內膜腺體及間質向正常的子宮肌層彌漫性或局限性浸潤生長的良性疾病，伴隨異位細胞的增殖、侵襲、黏附、以及新生血管的形成，具有與惡性腫瘤諸多相似的特征[1]。育齡期女性是本病的高發人群(8.8%～31.0%)，且近年來有逐漸年輕化趨勢[2,3]。其主要臨床癥狀是進行性加重的痛經、月經量增多、經期延長、不孕等。而痛經發病率高達77%～80%，嚴重的影響患者的日常工作學習與生活[4,5]。到目前為止，子宮腺肌病的詳細發病機制仍不明確。大多認為子宮肌瘤、子宮內膜息肉、盆腔炎、宮腔操作史、情志異常、嗜肉食和辛辣是其高危因素；而放置宮內節育器、適當的運動量、高文化水平等是其保護性因素[6，7]。隨著醫學的進步，子宮腺肌病的早期診斷與治療取得了較大的進步，但子宮腺肌病的分子生物學發生機制尚不明確，探索子宮腺肌病的分子生物學發病機制，為子宮腺肌病的診療途徑提供新的思路，是目前醫學形式所趨的。

mTOR(mammaliantargetofrapamycin，哺乳動物雷帕霉素靶蛋白)是一種進化十分保守的絲/蘇氨酸蛋白激酶，屬于磷脂酰肌醇3激酶PI3K相關激酶蛋白激酶類家族，廣泛存在于從酵母到哺乳動物的所有的真核生物中[8]。目前發現mTOR信號通路為細胞啟動翻譯所必需，不僅在正常細胞的生長增殖與分化中起著舉足輕重的作用，并且多數研究表明mTOR信號通路的過度激活能夠加速細胞周期、促進細胞遷移以及抑制細胞凋亡等。作為該通路中的重要因子，mTOR在相關研究中已被證實其在結腸癌、乳腺癌、宮頸癌、淋巴瘤等多種腫瘤中表達異常[9]，但其在子宮腺肌病中的表達情況在國內外尚未見報道。mTOR主要通過調控其下游蛋白P70S6K(40ssmallsubunitribosomalproteinS6kinase，核糖體40S小亞基S6蛋白激酶)來影響細胞周期、細胞凋亡以及細胞生長。P70S6K通過激活S6使核糖體40S小亞基易于結合翻譯復合物，從而促進蛋白質的合成[10]。mTOR信號通路已成為目前腫瘤生物治療的新靶點和新途徑的熱點。本實驗試圖在子宮腺肌病中找到mTOR和p70S6K在子宮腺肌病中的表達情況的及二者的關系，為子宮腺肌病的靶向治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選取2013-01～2015-07在佳木斯大學附屬第一醫院行全子宮或次全子宮切除術的手術標本，其中子宮腺肌病并腺肌瘤標本20例，取其異位病灶標本及在位內膜標本為異位病灶組和在位內膜組；卵巢畸胎瘤患者術前取的子宮內膜標本且病理回報內膜無病變20例為正常子宮內膜組，所有患者術前6個月內均未接受激素治療且月經正常來潮。所有患者年齡41～51(47.35±2.39)歲，各組患者年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 主要試劑

mTOR兔多克隆抗體為Abcam公司產品；P70S6K鼠單克隆抗體購自SantaCruz公司。鏈霉抗生物素-生物素-過氧化物酶復合物(SABC)試劑盒購自武漢博士德公司，二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑購自北京中杉生物技術公司。結果判定采用雙盲法，由兩位資深病理醫生分別對同一切片進行計數，細胞質或細胞核中明顯出現棕黃色顆粒的細胞判斷為陽性細胞，隨機選擇3個高倍鏡視野，計算陽性細胞百分數；再按照染色強度計分，無染色為1分，淺黃色為2分，棕黃色為3分，黃褐色為4分。每例積分為以上兩種方法結果的乘積，積分<2分為陰性(-)，≥2分為陽性(+)。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1p-mTOR在子宮腺肌病異位病灶組、在位內膜組及在正常子宮內膜中組的表達

p-mTOR在這三組的陽性率分別是90%(18 例)，85%(17 例)，45%(7 例)，通過卡方檢驗，三組間存在顯著差異(P<0.05)；兩兩組間比較發現異位內膜組及在位內膜組的細胞陽性率均高于正常子宮內膜組，差異具有統計學的意義(P<0.05)；異位內膜組與在位內膜組兩組間的p-mTOR陽性率進行比較發現差異無統計學意義。

表1 p-mTOR在三組標本中的陽性表達率(n=20)

圖1 p-mTOR在三組標本中的表達

2.2p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶組、在位內膜組及在正常子宮內膜組織中的表達

p-P70S6K在這三組中的陽性率分別是 80%(16 例)，75%(15 例)，55%(11 例)，三組間差異有統計學意義(P<0.05)；兩兩比較后，發現異位內膜組和在位內膜組陽性率均高于正常組，差異具有統計學的意義(P<0.05)；但異位內膜組與在位內膜組兩者p-P70S6K陽性率比較差異無統計學的意義。

圖2 p70S6K在三組標本中的表達

組別陽性陰性陽性率(%)異位組16480在位組13765正常組51525

2.3p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中表達的相關性

在異位病灶組中18例p-mTOR呈陽性表達的標本中有15例p-P70S6K陽性表達,，2例p-mTOR蛋白呈陰性表達的標本中有1例p-P70S6K呈陽性表達。對各個標本免疫組化得分進行相關分析顯示，子宮腺肌病異位病灶組p-mTOR與p-P70S6K的表達具有相關性(r=0.778,P<0.05)。經F檢驗F=27.622P<0.05，有顯著差異，即建立的p-mTOR與p70S6K間的回歸方程有意義。

表3 p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病異位 病灶組織表達的相關性

圖3 p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病病灶組織表達的相關性

3 討論

子宮腺肌病雖屬良性病變，但它卻有著侵襲、異常增殖、血管新生等類似于惡性腫瘤的生物學行為，因此也被稱作 “良性癌”[11]。隨著醫學的進步，對腫瘤在分子生物學水平的研究越發深入，發現調控細胞增殖與生長的信號通路在腫瘤的發生發展中起到重要作用，因而細胞因子、信號通路逐漸成為診斷以及治療腫瘤的靶點，如VEGFa、TP53、PIK3CA、mTOR/P70S6K等信號通路，這些信號通路的傳導大都與mTOR/P70S6K有相當的關系[12，13]。而在子宮內膜癌、乳腺癌、腎癌的相關研究中已證實mTOR抑制劑能有效抑制mTOR的表達。

本研究表明在子宮腺肌病異位病灶中及在位內膜組織中，p-mTOR、p-P70S6K的表達明顯高于正常子宮內膜組織，而在異位病灶組織中及在位內膜組織中二者的表達無明顯差異。p-mTOR、p-P70S6K在異位病灶組中的表達呈明顯的正相關關系，組織中p-mTOR的表達水平越高，相應的p-P70S6K蛋白的水平也越高。同時也證實了P70S6K是mTOR信號通路中下游的一個重要因子，mTOR激活后，促使P70S6K磷酸化,從而促進參與和調控各種生理生化活動的蛋白的合成，最終實現調控細胞的生長和增殖的作用。

綜上所述，作為mTOR信號通路中重要因子的mTOR、P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中處于高表達狀態，在子宮腺肌病的發生發展過程中起到重要作用，同時也具有一定的診斷價值以良好的治療前景的靶點，為子宮腺肌病的診斷、靶向治療提供一定的理論基礎。

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The abnormal expression of mTOR and P70S6K in adenomyosis and its clinical significance

WUYa-dong，LIYa-jun，ZHUZi-wei，FENGYuan-yuan,CHENLi

(Department of Gynecology and Obstetrics, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

: Objective: To evaluate the expression and function of mammalian target of rapamycin (mTOR) and its substrate kinase P70S6K signal pathway in adenomyosis. Methods: The expression of mTOR and P70S6K in the ectopic endometrium group, in eutopic endometrium group and the normal endometrium group were detected by the immunohistochemistry, respectively. Results: Compared to those in normal endometrium group, protein of mTOR and P70S6K in the ectopic endometrium group and eutopic endometrium group were significantly increased (P<0.05),butwasundifferentiatedbetweentheeutopicendometriumgroupandtheectopicendometriumgroup.TherewasapositivecorrelationbetweenproteinmTORandP70S6Kexpressioninectopicendometrium(r=0.778,P<0.05). Conclusion: High expressions of mTOR and P7OS6K may play an important role in the pathogenesis and the development of adenomyosis.

adenomyosis;mTOR;P70S6K

吳雅冬(1968～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫師，碩士研究生導師。

李亞君(1989～)女，河南開封人，在讀碩士研究生。E-mail:lyjyimiyangguang@sina.com。

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B

1008-0104(2017)02-0073-03

2015-11-27)