HPLC法測定復方絞股藍袋泡茶中橙黃決明素的含量

魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗

HPLC法測定復方絞股藍袋泡茶中橙黃決明素的含量

魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗

目的建立測定復方絞股藍袋泡茶中橙黃決明素含量的HPLC方法。方法色譜柱為：InertSustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60）為流動相，流速為1.0 ml/min。檢測波長為284 nm。結果

復方絞股藍袋泡茶為筆者所在醫院自制制劑，由決明子、絞股藍等中藥材組成，清熱平肝，化瘀去濕；用于高血脂、輕度高血壓的輔助治療。方中決明子味甘、苦、咸，微寒，歸肝、大腸經。具有清肝明目，潤腸通便的作用。現代研究證明決明子具有降血壓、降血脂、保肝及抑菌等活性［1］。

決明子有效成分主要為蒽醌類物質，其中橙黃決明素具有較好的降血脂、抗動脈粥樣硬化作用［2，3］。筆者采用HPLC法測定復方絞股藍袋泡茶中橙黃決明素的含量，為全面有效控制該制劑質量提供參考和依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器SPD10A高效液相色譜儀（島津公司）、FA-2004N電子天平（上海精科）、CPA225D電子天平（賽多利斯）。

1.2 試藥橙黃決明素對照品（批號：111900-201001），購自中國藥品生物制品研究所；復方絞股藍袋泡茶（每袋3.0 g，解放軍第454醫院）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果［4-7］

2.1 色譜條件色譜柱為：InertSustain C18（4.6 mm× 250mm，5μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（40∶60），流速為1.0 ml/min。檢測波長為284 nm。理論塔板數按橙黃決明素峰計算應不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備取橙黃決明素對照品適量，精密稱定，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每1 ml約含橙黃決明素20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備精密稱定本品內容物約1.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 ml，蒸干，加稀鹽酸30 ml，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，30 ml/次，合并三氯甲烷，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，轉移至25 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 專屬性試驗按以上色譜條件分別取對照品溶液、供試品溶液各20 μl，進樣，對照品、供試品色譜圖見圖1。

2.4 線性關系考察精密吸取已配制好的對照品溶液2、6、20、14、18 μl，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標Y，以對照品進樣量（μg）為橫坐標X，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y= 8×106X+67226，r=0.9998；結果表明橙黃決明素在0.042～0.378 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗精密吸取對照品溶液20 μl，連續進樣6次，對照品溶液峰面積的RSD為1.06%，結果表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗取同一供試品溶液，分別于0、8、16、24、48 h進樣20 μl，按上述條件測定峰面積，以考察其穩定性，RSD為1.84%，表明供試品溶液至少在48 h內穩定。

2.7 重復性試驗精密稱取同一供試品，按2.2.2項下方法平行制備6份供試品溶液，依次測定，計算得橙黃決明素含量，RSD為1.77%，結果表明重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗精密稱取已知含量的批號為20150721的復方絞股藍袋泡茶樣品約1.5 g，加入橙黃決明素約0.16 mg，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下方法檢測。其結果見表1。結果表明準確度良好。

圖1 復方絞股藍袋泡茶HPLC

表1 復方絞股藍袋泡茶加樣回收率試驗結果（n=5）

2.9 供試品含量測定按“2.2.2”項下方法制備10批供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件測定，計算得橙黃決明素含量分別為0.1063、0.1087、0.1077、0.1046、0.1092、0.1053，0.1079、0.1059、0.1061、0.1073 mg/g，最低0.1046 mg/g，以最低測定值的80%為限，故擬復方絞股藍袋泡茶中含決明子以橙黃決明素計，不得低于83.7 μg/g。

3 討論

前期實驗中，在定量物質的選擇方面，課題組曾以絞股藍中皂苷類成分絞股藍皂苷Ⅲ為定量指標，但實驗發現，其分離效果不佳，后轉為測定制劑中橙黃決明素的含量。查閱文獻發現，絞股藍中約含皂苷130多種，成分比較復雜［8，9］。接下來擬研究以絞股藍中黃酮類成分槲皮素、異鼠李素為定量成分，以期實現對復方絞股藍袋泡茶質量的全面控制。

供試品提取方法的選擇方面，以甲醇為提取溶劑，提取方法采用加熱回流提取1.5、2、2.5 h。測定方法相同，超聲提取2、2.5 h時，提取較完全，因此選用甲醇作為提取溶劑、加熱回流2 h。

流動相的選擇方面，參考相關文獻，適當提高磷酸比例，選用乙腈-0.1%磷酸（40∶60）、流速1 ml/ min作為流動相，橙黃決明素與其他成分能完全分離，達到較佳的效果［10-12］。

該實驗采用HPLC法測定復方絞股藍袋泡茶中橙黃決明素的含量，方法簡單、準確，測定結果穩定可靠，且重現性好，可用于復方絞股藍袋泡茶的含量測定和質量控制。

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［3］胡軼娟，萬麗，張加雄，等.高效液相色譜法測定不同產地決明子中橙黃決明素含量［J］.時珍國醫國藥，2006，17（7）：1138-1139.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：145.

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［2016－11－21收稿，2016－12－18修回］［本文編輯：劉一洋］

Determination of aurantio-obtusin content of Compound Jiaogulan Daipaocha by HPLC

LU Yi，LI Yan-si，WANG Ya-wei，et al.Department of Pharmacy，the No.454 Hospital of PLA，Nanjing，Jiangsu 210002，China

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of aurantio-obtusin in Compound Jiaogulan Daipaocha.MethodsThe operating conditions by HPLC were Inert Sustain C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），the mixture of acetonitrile-0.1%Phosphoric acid water（40∶60）as mobile phase，1.0 ml/min as flow speed and wavelength 284 nm.ResultsAurantio-obtusin can be well separated from other components.Aurantio-obtusin showed a good linear relationship within the range of 0.042-0.378 μg（r=0.9998，n=5）with an average recovery of 98.71%（RSD=1.02%）.ConclusionThe method is accurate and sensitive，which may be used for the quality control of compound Jiaogulan Daipaocha.

Compound Jiaogulan Daipaocha；HPLC；Aurantio-obtusin；Levels（content）

R917

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.06.026

210002江蘇南京，解放軍454醫院藥劑科（魯毅，李燕思，王亞威，段靖，許桂麗）

橙黃決明素與其他組分能較好分離，其在0.042～0.378 μg范圍內線性關系良好（r=0.9998，n=5），平均回收率為98.71%，RSD為1.02%。結論該方法測定結果準確、靈敏，可用于復方絞股藍袋泡茶的質量控制。［關鍵詞］復方絞股藍袋泡茶；高效液相色譜法；橙黃決明素；含量