混合糖發酵產油脂酵母菌的篩選及脂肪酸組成分析

張艷平, 白新鵬, 郭書賢, 王冬梅

1(海南大學 食品學院，海南 海口，570100) 2(南陽理工學院 生物與化學工程學院， 河南 南陽，473000) 3(南陽市工業微生物重點實驗室，河南 南陽，473000)

混合糖發酵產油脂酵母菌的篩選及脂肪酸組成分析

張艷平1, 白新鵬1, 郭書賢2,3*, 王冬梅2,3

1(海南大學 食品學院，海南 海口，570100) 2(南陽理工學院 生物與化學工程學院， 河南 南陽，473000) 3(南陽市工業微生物重點實驗室，河南 南陽，473000)

從海南土壤中分離的12株野生酵母菌株中，篩選到一株能夠利用混合糖發酵高產油脂的酵母菌株YP-32，在葡萄糖∶木糖(質量比)為2∶1條件下發酵120 h，生物量、油脂產量和油脂含量達到最大，分別為22.33 g/L、13.39 g/L和60.42%；該菌株利用5種不同比例混合糖產油脂的脂肪酸組成均以C16和C18系脂肪酸為主，其中油酸含量最高，其次為棕櫚酸和硬脂酸，這3種脂肪酸含量占總脂肪酸含量的90%以上，與植物油脂脂肪酸組成相似，可以作為生物柴油油源。通過形態特征及26S rDNA D1/D2和ITS區域序列分析，初步鑒定菌株YP-32為油脂酵母屬的Lipomycesorientalis，為我國分布新紀錄。

產油脂酵母菌；篩選；混合糖發酵；脂肪酸組成；鑒定；海南省

微生物油脂是繼植物油脂、動物油脂之后又一可開發利用新油脂資源[1-3]。微生物油脂除可替代動植物油脂生產食用油脂外，還可作為生物柴油的替代原料[4-5]。與傳統的植物油脂獲取方法相比較，微生物油脂的諸多優點[6]使其有廣闊的工業化應用前景[7-8]。

目前，霉菌和酵母是較為理想的產油脂微生物，尤其產油脂酵母得到了廣泛地研究，主要集中在3個方面：(1)產油酵母的選育，包括野生產油脂酵母的分離篩選及菌株的誘變[9-11]。這些研究多集中在以葡萄糖為碳源對菌種進行選育，不利于微生物油脂的工業化生產。(2)發酵條件的優化，影響微生物油脂合成的因素主要包括：碳源、碳氮比、pH值、接種量、培養時間等[12]。李靜[13]通過搖瓶培養考察了6種金屬離子(Mg2+、Ca2+、Fe3+、Zn2+、Mn2+、Cu2+)對斯達油脂酵母(Lipomycesstarkeyi1809)生長和油脂蓄積的影響，研究發現當培養基中缺失Mg2+或Fe3+或Zn2+明顯抑制菌體生長和油脂積累。(3)利用多種有機質類物質作為碳源考察微生物的產油脂特性，如玉米和小麥秸稈、甘蔗渣、工業廢水等。孫軍德[14]以玉米秸稈的酸水解液為基質，利用彎隱球酵母(Cryptococcusalbidun)發酵產油脂，菌體生物量達到8.91g/L，油脂得率達到11.63%；YU等[15]用小麥秸稈的稀酸水解液進行酵母發酵產油，油脂含量為33.5%；王華等[16]以啤酒廢水為底物利用Lipomycesstarkeyi發酵產油脂，菌體生物量為12.28 g/L，油脂含量為35.80%。這些研究為資源的利用和能源的再生奠定了基礎。

木質纖維素是我國最豐富的可再生資源，充分水解可得到同時含有葡萄糖和木糖等單糖的混合糖[17]。利用木質纖維素水解液作為底物生產生物燃料和生物產品具有重要的經濟和環境意義[18]。然而，大多數微生物對木質纖維素水解液利用效率較低，這是由于微生物對五碳糖不能利用或利用率較低，使得木質纖維素資源化為生物產品存在較大困難[19-20]。因此，篩選獲得在混合糖條件下高產油脂的微生物菌株已成為微生物油脂技術領域的重要課題之一，我國學者在這方面也取得了不少研究成果[17，21-22]。本文通過對海南土壤中分離的產油脂酵母的篩選，以期得到能夠利用混合糖(葡萄糖和木糖)的高產油脂酵母菌株，并通過高產油脂菌株以不同配比的混合糖為碳源所產油脂的脂肪酸組成分析，為利用混合糖及木質纖維素水解液發酵法生產微生物油脂提供依據和基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株

從海南省土壤中分離獲得12株產油脂酵母菌株，菌株信息見表1。

表1 菌株信息

1.2 試劑與儀器

葡萄糖、木糖、酵母粉、蛋白胨、瓊脂、玉米粉瓊脂、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、香蘭素、98%濃硫酸、85%磷酸、95%乙醇。

電熱恒溫培養箱(101-2A)、數顯恒溫搖床(HZQ-B)、立式壓力蒸汽滅菌鍋(LDZX-50FB)、電子精密天平(FA1004)、pH數字酸度計(PHS-3C)、電子恒溫水浴鍋、紫外可見分光光度計(752N)、電腦型生物顯微鏡(XSP-13CC)、超凈工作臺(SW-CJ-2G)、大型全溫搖床(HZQ-B)、氣相色譜儀(Agilent Technologies 7890A)，液相色譜儀(Aglient 1100)。

1.3 培養基

① YEPD平板、斜面保藏培養基：葡萄糖 20.0 g，酵母粉10.0 g，蛋白胨 10.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水1 000 mL，pH 6.5。

② 液體種子培養基：葡萄糖 20.0 g，酵母粉10.0 g，蛋白胨 10.0 g，蒸餾水 1 000 mL，pH 6.5。

③ 產孢子培養基：玉米粉瓊脂22 g，蒸餾水1 000 mL，pH 6.0。

④ 限氮發酵培養基：葡萄糖70.0 g，酵母粉0.5 g，(NH4)2SO42.0 g，KH2PO41.0 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，蒸餾水1 000 mL，pH 5.8～6.0。

1.4 實驗方法

1.4.1 培養方法

① 斜面培養：將保藏的菌株劃線接種至YEPD固體斜面培養基，28 ℃恒溫箱中培養3 d。

② 搖瓶種子培養：活化后的菌株接兩環于液體種子培養基中，120 r/min，28 ℃恒溫搖床培養3 d。

③ 搖瓶發酵培養：取種子培養液，按10%接種量接種于限氮發酵培養基中，28 ℃，140 r/min培養120 h。

1.4.2 測定方法

(1)菌體生物量的測定：采用干重法[23]測定菌體生物量。

(2)油脂的測定：單糖初篩時油脂的測定采用磷酸香草醛顯色法[24]，混合糖復篩時油脂的測定采用酸熱法[21]。

(3)計算公式：

細胞干重/(g·L-1)=(管與干重的總質量-空管質量)×1000/V

(1)

發酵液油脂含量/(g·L-1)=提取油脂的質量/量取發酵液體積

(2)

菌體油脂含量/%=提取油脂的質量/發酵液生物量

(3)

油脂系數/(g·L-1)=油脂產量/耗糖量×100

(4)

(4)葡萄糖和木糖含量測定：利用液相色譜儀進行葡萄糖和木糖含量測定[25]。

色譜柱：Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5.0 μm)，流動相：水，柱溫：65 ℃，檢測器池溫：40 ℃，流速：0.5 mL/min，進樣體積：20 μL，工作站：Agilent Rev.B.02.01。

(5)脂肪酸組成分析：樣品甲酯化[26]，利用氣相色譜儀進行脂肪酸組成分析。

色譜柱條件:為 TM 石英毛細管柱(25 m×0.25 mm×0.25 μm)；柱溫:175 ℃；氣化溫度:280 ℃；進樣量:0.3～0.5 μL；檢測器溫度:270 ℃，工作站：Agilent Chemstation B.03。

1.4.3 形態學觀察

參照THE YEASTS，A TAXONOMIC STUDY[27](第五版)對菌株進行形態特征觀察。

1.4.4 分子生物學鑒定

將目標菌株進行26S rDNA D1/D2區和ITS序列的分子生物學鑒定。

基因擴增：20 μL反應體系，純化的PCR產物1 μL，BigDye 8 μL，引物1 μL，滅菌去離子水10 μL。反應條件：96 ℃ 1 min，25個循環(96 ℃ 10 s，50 ℃ 5 s，60 ℃ 4 min)，72 ℃延伸10 min。由PCR產物電泳結果切割所需DNA目的條帶，所得PCR 擴增原液經過DNA膠回收試劑盒(SK1131)回收純化，電泳再次檢測后通過自動測序儀得到供試菌株PCR擴增片段的原始序列。將測序結果用Chromas參照正反序列圖譜人工校對。用校正后的序列在GenBank數據庫中進行同源序列搜索(BLAST)，根據同源序列搜索結果采用Clustal X1.83進行序列比對，采用Mega 4.1軟件構件系統樹，發育樹的生成采用neighbor-joining法。依據系統發育樹，并結合形態學特征確定其種類。

2 結果與分析

2.1 菌株利用單糖產油脂的篩選

將12株從海南省土壤中分離得到的野生酵母菌株分別以葡萄糖、木糖為碳源的搖瓶培養120 h，各菌株產油脂能力見表1。

表1 菌株單糖發酵產油脂能力

從表1中可以看出，其中YP-08、YP-20、YP-24、YP-32這4株酵母菌株產油脂能力較好，均可利用葡萄糖和木糖進行發酵產油脂，其余8株菌株利用木糖發酵產油脂能力較差。就生物量而言，菌株YP-32最高，YP-24次之，YP-08和YP-20最差；就油脂產量和油脂含量而言，菌株YP-32最高，YP-08次之，YP-20和YP-24最差。菌株YP-08、YP-20和YP-24利用木糖產油脂能力高于葡萄糖；菌株YP-32利用葡萄糖和木糖產油脂能力差別較小，生物量、油脂產量和油脂含量均分別達到19 g/L、13 g/L和64%以上。

2.2 菌株利用混合糖產油脂能力的篩選

將YP-08、YP-20、YP-24、YP-32這4株菌株以3種比例混合糖(葡萄糖∶木糖分別為2∶1，1∶1，1∶2)為碳源進行搖瓶培養120 h，各菌株的產油脂能力見表2。

表2 菌株混合糖發酵產油脂能力

從表2中可知，4株酵母菌株均可利用混合糖進行發酵產油脂，其中菌株YP-08、YP-32和 YP-24利用混合糖發酵產油脂能力較高，菌株YP-20較差。菌株YP-08和YP-24在混合糖質量比例為2∶1時產油脂能力最高，1∶2時次之，1∶1時最差；菌株YP-32在混合糖比例為2∶1時產油脂能力最高，1∶2時最差；就油脂含量而言，菌株YP-08高于菌株YP-32，但綜合生物量、油脂產量和油脂含量來看，菌株YP-32利用混合糖產油脂能力最好，其中在混合糖比例為2∶1時，菌株YP-32產油脂能力最高，生物量、油脂產量和油脂含量分別達到22.21 g/L、13.39 g/L和 60.42%。

通過對12株野生酵母菌株在利用單糖和混合糖進行發酵產油脂能力進行綜合比較分析可以看出，菌株YP-32在單糖和混合糖中產油脂能力均最強，為本文篩選出的目標菌株。

2.3 菌株YP-32利用混合糖發酵產油脂分析

2.3.1 發酵過程中殘糖變化

菌株YP-32在以混合糖為碳源的限氮發酵培養基中發酵培養，每隔24 h采樣離心后，測定發酵上清液中葡萄糖和木糖含量，結果見圖1。

圖1 菌株YP-32混合糖(葡萄糖和木糖)發酵殘糖變化曲線Fig.1 The residual sugar curve of strain YP-32 with mixed sugar fermentation注：“G”代表葡萄糖，“X”代表木糖

由圖1可以看出，當碳源為單糖時，兩種培養基中單糖的濃度隨時間逐漸減少，發酵144 h，葡萄糖培養基中的單糖已消耗完全，而木糖培養基中的單糖含量為2.22 g/L。當碳源為混合糖時，發酵初始，培養基中葡萄糖首先被消耗，此時木糖的利用量很少；發酵96 h，葡萄糖消耗完全，此時木糖利用的速率開始增大；發酵144 h，木糖的含量接近零。發酵結束時，培養基中的碳源均被完全利用，這說明菌株YP-32對葡萄糖和木糖的利用效果較好，但對葡萄糖和木糖的利用是非同步的。

2.3.2 產油脂能力的比較

菌株YP-32在限氮培養基中發酵培養120 h，測定計算出該菌株的生物量、油脂產量、油脂含量、油脂系數等指標結果見表3，圖2為發酵后菌體細胞和脂肪球形態。

表3 菌株YP-32混合糖發酵產油脂能力比較

由表3可知，當碳源為單糖(葡萄糖或木糖)時，生物量、油脂產量、油脂含量和油脂系數差別不大；當碳源為混合糖(葡萄糖與木糖不同比例)時，其油脂含量和油脂系數相比于單糖時均有微小的下降；隨著木糖含量的增加，菌體的生物量，油脂產量，油脂含量和油脂系數有所下降。當碳源為單糖時，葡萄糖和木糖的消耗速率接近，分別為0.470 g/(L·h)和0.460 g/(L·h)；當碳源為混合糖時，葡萄糖消耗速率高于木糖，隨著葡萄糖比例的減少，葡萄糖消耗速率逐漸降低，木糖消耗速率逐漸增加，這說明菌株YP-32利用混合糖中葡萄糖和木糖是非同步的；以產油脂速率來看，碳源為葡萄糖時，產油速率最大達到0.115 g/(L·h)；碳源為混合糖時，葡萄糖∶木糖(質量比)為2∶1時，產油脂速率達到0.112 g/(L·h)，略低于碳源為葡萄糖時的產油脂速率，且隨著木糖含量的增加，產油脂速率有微小的下降。

從圖2中可以看出，當碳源為葡萄糖及葡萄糖∶木糖(質量比)為2∶1的混合糖時，菌體細胞和脂肪球最大；增加木糖比例，菌體細胞和脂肪球較小。

圖2 菌株YP-32混合糖發酵細胞及脂肪球形態Fig.2 Cell morphology and lipid globule of strain YP-32 after fermentation with mixed sugar注：“G”代表葡萄糖，“X”代表木糖

2.4 油脂脂肪酸組成分析

菌株YP-32分別以葡萄糖、木糖和混合糖為碳源的限氮發酵培養基進行發酵120 h，用酸熱法提取油脂，分析脂肪酸組成，結果如表4。

表4 菌株YP-32產油脂的脂肪酸組成分析

注：-表示未檢出。

從表4中可以看出，菌株YP-32以5種不同比例的葡萄糖、木糖為碳源產油脂的脂肪酸組成相似，均以C16和C18系脂肪酸為主，且均以油酸為主，其次為棕櫚酸和硬脂酸，且這3種脂肪酸占總脂肪酸含量的90%以上。從不飽和脂肪酸所占比例來看，碳源為木糖時，不飽和脂肪酸含量所占比例最高，達到48.29%，其次為混合糖質量比例為1∶2；混合糖比例為2∶1和1∶1時，兩者的不飽和脂肪酸含量最低。

2.5 菌株YP-32形態學特征

參照The yeasts，a taxonomic study第五版對菌株YP-32進行形態學觀察，結果見圖3。在YEPD液體培養基中，25 ℃培養3 d鏡檢，細胞呈圓形或橢圓形，細胞大小為(2.5～9.0 μm)×(3.0～9.9 μm)，可觀察到脂肪球顆粒，有性繁殖形成子囊孢子，孢子為橢圓體，數量從1到4不等。在YEPD固體平板上，菌落形態為圓形，表面光滑、濕潤、粘稠，不透明。

圖3 菌株YP-32菌體細胞及子囊孢子Fig.3 Morphology and ascospore of strain YP-32

2.6 菌株YP-32分子生物學鑒定

菌株YP-32的26S rDNA D1/D2和ITS區域序列長度分別為588 bp和514 bp。將菌株YP-32的26S rDNA D1/D2和ITS區域序列與GenBank數據庫中的序列進行同源性比較，該菌株與Lipomyces orientalis的26S rDNA D1/D2和ITS序列相似性均達到99%。從系統發育樹圖4可以看出，菌株YP-32在26S rDNA D1/D2和ITS發育樹上與Lipomyces orientalis處于同一分枝聚為一群，表明菌株YP-32 與Lipomyces orientalis的親緣關系最近，為我國分部新紀錄。

圖4 菌株YP-32 26S rDNA D1/D2和ITS區域序列系統發育樹Fig.4 Phylogenetic tree of 26S rDNA D1/D2 and ITS domain sequence of strain YP-32

3 討論

(1)孔祥莉等[13]在研究斯達氏油脂酵母Lipomycesstarkeyi利用混合糖發酵產油脂的特性的過程中發現Lipomycesstarkeyi利用木糖發酵產油脂能力與葡萄糖相當；HU等[9]研究了皮狀絲孢酵母Trichosporoncutaneum在混合糖條件下對葡萄糖和木糖利用情況，結果表明增加木糖比例，產油脂能力有微小的下降；本文中的菌株YP-32在混合糖條件發酵培養的過程中利用木糖的產油脂能力微小于葡萄糖，與HU研究結果相一致；以上菌株均在葡萄糖∶木糖(質量比)為2∶1發酵120 h，產油脂能力達到最高，菌株YP-32油脂產量和油脂含量分別為13.42g/L和60.42%，均高于同條件下的Lipomycesstarkeyi和Trichosporoncutaneum的產油能力，這說明目標菌株YP-32能夠高效地利用混合糖為碳源發酵產油脂。

(2)HU等[9]研究了Trichosporoncutaneum在以5種比例的混合糖為碳源條件下發酵產油脂脂肪酸的組成情況，油脂脂肪酸組成均以棕櫚酸為主，其次為油酸和硬脂酸，其中油酸含量在混合糖比例為1∶2時最高為39.0%，不飽和脂肪酸種類較為單一；本文菌株YP-32的油脂中脂肪酸以油酸為主，在木糖為碳源條件下最高達到48.29%，其次為棕櫚酸和硬脂酸，不飽和脂肪酸種類較多。Trichosporoncutaneum油脂不飽和脂肪酸比例在葡萄糖∶木糖為1∶2和1∶0條件下分別達到最高和最低，分別為39.6%和32.3%；菌株YP-32在混合糖比例0∶1和1∶1條件下不飽和脂肪酸比例達到最大和最小，分別為48.29%和44.84%。

4 結論

(1)從海南土壤中分離的12株野生酵母菌株中篩選得到1株能夠利用混合糖(葡萄糖、木糖)發酵高產油脂的酵母菌株YP-32，該菌株在3種比例混合糖(葡萄糖∶木糖(質量比)為2∶1，1∶1，1∶2)條件下產油脂能力均較好，其中在葡萄糖∶木糖為2∶1產油脂能力最好，發酵120 h的生物量、油脂產量和油脂含量分別為22.21 g/L和13.42 g/L和60.42%。

(2)菌株YP-32以5種比例的混合糖為碳源發酵產油脂脂肪酸組成相似，均以C16和C18系脂肪酸為主，其中油酸含量最高，其次為棕櫚酸和硬脂酸，且這3種脂肪酸含量占90%以上。

(3)通過形態特征和26S rDNA D1/D2和ITS區域序列分析，初步鑒定菌株YP-32為Lipomycesorientalis，為我國分布新紀錄。

[1] 薛飛燕,張栩,譚天偉.微生物油脂的研究進展及展望[J].生物加工過程,2005,3(1):23-27.

[2] 賈彬,王亞南,何蔚紅,等.生物柴油新原料-微生物油脂[J].生物技術通報,2014(1):19-26.

[3] RATLEDGE C,WYNN J P.The biochemisty and molecular biology of lipid accumulation in oleaginous microorganisms[J].Adv Appl Microbiol,2002,2(51):1-51.

[4] RATLEDGE C.Microorganisms for lipids[J].Acta Biotechnol,1991,11(5):429-438.

[5] 趙宗寶.加快微生物油脂研究為生物柴油產業提供廉價原料[J].中國生物工程雜志,2005,25(2):8-11.

[6] LUQUE R,LOVEET J C,DATTA B,et al.Biodiesel as feasible petrol fuel replacement:a multidisciplinary overview[J].Energy &Environmental Science,2010,3(11):1 706-1 721.

[7] 劉波,孫艷,劉永紅,等.產油微生物油脂生物合成與代謝調控研究進展[J].微生物學報,2005,45(1):153-155.

[8] Li Qiang,Du Wei,Liu De-hua.Perspectives of microbial oils for biodiesel production[J].Applied Microbiology and Biotechnology, 2008,80(5):749-756.

[9] 許振杰,胡容,李珍,等.高產油脂紅酵母的選育及培養條件優化[J].食品科學,2011,32(11):209-215.

[10] 李艾,郝玉芹.產油脂酵母菌株的篩選及發酵條件的初步研究[J].唐山學院學報,2014,27(3):87-90.

[11] 孔凡敏.產油脂酵母菌株的選育[D].泰安:山東農業大學,2010.

[12] 石婷婷.產油脂微生物菌株的選育[D].濟南:山東輕工業學院,2012.

[13] 李靜.金屬離子對斯達油脂酵母發酵產油脂的影響[D].楊凌:西北農林科技大學,2010.

[14] 孫軍德,楊冉.產油酵母菌的篩選及其利用玉米秸稈發酵產油研究[J].沈陽農業大學學報,2010,41(3):335-338.

[15] YU Xiao-chen,ZHENG Yu-bin,DORGAN K M,et al.Oil production by oleaginous yeasts using the hydrolysate from pretreatment of wheat straw with dilute sulfuric acid.Bioresource Technology, 2011,102(10):6 134-6 140.

[16] 王華,劉歡,郭書賢,等.啤酒生產廢水培養斯達油脂酵母發酵產油脂培養基的優化[J].中國油脂,2011,36(8):31-36.

[17] HU Cui-min,WU Si-guo,WANG Qian,et al.Simultaneous utilization of glucose and xylose for lipid production by Trichosporon cutaneum[J].Biotechnlogy for Biofuels,2011,4(25):2-8.

[18] 黃超.基于木質纖維素水解液的發酵性絲孢酵母發酵產油脂的研究[D].廣州:華南理工大學,2011.

[19] RUBIN E M.Genomics of cellulosic biofuels[J]. Nature, 2008, 454(7206):841-845.

[20] ZALDIVAR J,NIELSEN J,OLSSON L.Fuel ethanol production from lignocelluloses:a change for metabolic engineering and process integration[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2001,56(1):17-34.

[21] 孔祥利.斯達氏油脂酵母2#利用葡萄糖和木糖混合發酵產油脂的研究[D].大連:遼寧師范大學,2007.

[22] 宋兆齊,王莉,梁峰.混合糖發酵產油脂酵母菌的篩選[J].中國釀造,2012,31(6):65-68.

[23] 曲威,劉波,呂建州,等.高產油脂斯達油脂酵母菌株的選育及搖瓶發酵條件的初步研究[J].遼寧師范大學學報(自然科學版): 2006, 29(1): 88-92.

[24] 胡元維,任路靜,張麗,等.基于微孔板比色法的微生物胞內油脂快速檢測方法的建立及應用[J].中國油脂,2013,38(7):89-94.

[25] 孫守兵.高效液相色譜法測定轉化糖電解質注射液中果糖和葡萄糖的含量[J].中國新藥與臨床志,2010,29(12):916-918.

[26] 趙永芳.生物化學技術原理及其應用[M].武漢大學出版社,1988.

[27] KURTZMAN C P,Fell J W, BOEKHOUT T.The yeasts, a taxonomic study,5th edition[M].Amsterdam: Elsevier Science Publishers B.V, 2011:554-555.

Screening of oil-producing yeast strains by co-fermentation of glucose and xylose and lipid-acid component analysis

ZHANG Yan-ping1, BAI Xin-peng1, GUO Shu-xian2,3*, WANG Dong-mei2,3

1(School of Food, Hainan University, Haikou 570100,China) 2(School of Biological and Chemical Engineering, Nanyang Institute of Technology, Nanyang 473000, China) 3(Key Laboratory for Industrial Microbiology of Nanyang City, Nanyang 473000, China)

In this paper, the strain YP-32 which could use mixed sugar of glucose and xylose as carbon source to produce lipid were screened from 12 wild yeast strains from the soil of Hainan province. The biomass, lipid concentration and lipid content of the strain reached 22.33 g/L, 13.39 g/L and 60.42% respectively by fermenting with 2∶1 of glucose and xylose as carbon source. Simultaneously, lipid-acid component was analyzed. There was almost no difference in lipid-acids component by using different mixed sugar ratios as carbon source. Results showed that C16 and C18 series were main fatty acids. Oleic acid content was the highest, palmitic acid and stearic acid were next in all samples and the sum of them accounted for over 90% of total content of lipid acids. The lipid component of this strain was similar to plant oil and could be used as biodiesel source. The strain was primarily identified asLipomycesorientalisby the morphology feature, 26S rDNA D1/D2 and ITS domain sequence analysis. The strain is a new record for distribution in our country.

oleaginous yeast; screening; mixed sugar fermentation; lipid-acid component; identification; Hainan province

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201704006

碩士研究生(郭書賢教授為通訊作者，E-mail: guoshux@163.com)。

河南省基礎與前沿技術項目(132300410087)；河南省基礎與前沿技術研究項目(102300410059)

2016-09-12，改回日期：2017-01-04