乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA與IL-21及IFN-γ水平的相關性

陶鵬輝

(信陽市中心醫院檢驗科，河南信陽464000)

乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA與IL-21及IFN-γ水平的相關性

陶鵬輝

(信陽市中心醫院檢驗科，河南信陽464000)

目的探討乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染者血清乙肝病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)與白細胞介素21(IL-21)及γ-干擾素(IFN-γ)水平的相關性。方法選取我院收治的119例慢性乙肝患者，其中乙型肝炎(CHB)46例，乙肝后肝硬化(LC)41例，原發性肝癌(PHC)32例，同期選取35例肝功能檢查表面抗體為陽性的健康正常者作為對照，采用熒光定量聚合酶鏈式反應(Fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR)方法檢測HBV感染者血清HBV DNA，利用酶聯免疫吸附實驗(Enzymes linked immunosorbent assay，ELISA)檢測受試者血清IL-21及IFN-γ水平。結果CHB、LC、PHC三組患者之間血清IL-21、IFN-γ水平比較無顯著差異(P＞0.05)，與健康對照組比較差異顯著，且三組HBV感染者血清IL-21、IFN-γ水平明顯高于健康對照組(P＜0.05)；陰性組血清IL-21水平明顯高于對照組(P＜0.05)，且隨著HBV DNA載量增加呈現明顯升高趨勢；陰性組血清IFN-γ水平明顯低于對照組(P＜0.05)，且隨著HBV DNA載量增加呈現明顯降低趨勢；相關性分析結果顯示，IL-21水平與HBV DNA載量呈較強正相關(rs=0.641，P＜0.05)，IFN-γ水平與HBV DNA載量呈現負性相關(rs=-0.372，P＜0.05)。結論IL-21、IFN-γ與HBV感染者血清HBV DNA持續感染密切相關，推測IL-21、IFN-γ有望成為HBV感染者免疫治療新靶點。

HBV；HBV DNA；IL-21；IFN-γ；相關性

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染是導致乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)以及原發性肝癌(PHC)的主要原因[1]。目前，HBV感染已成為一個全球性公共衛生問題，根據世界衛生組織報道，全球范圍內每年死于HBV感染者大約100萬人[2]。 HBV感染發病與機體免疫能力有關，并且依賴于HBV不斷的復制。研究表明[3]，血清HBV DNA是反映HBV在體內復制及存在的重要指標。研究HBV感染者血清HBV DNA與免疫相關因子之間相關性，有利于HBV感染發病機制的探究，因此，本研究旨在探討HBV感染者血清HBV DNA與免疫相關因子白細胞介素21(IL-21)及γ-干擾素(IFN-γ)的相關性，試圖為HBV感染發病機制提供一定的理論依據，以及為HBV感染治療提供免疫治療新靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2015年2月至2016年2月信陽市中心醫院收治的119例慢性乙肝患者，其中男性72例，女性47例，年齡26～45歲，平均年齡37.43±3.17歲，CHB46例，LC41例，PHC32例，輕度肝臟損傷34例，中度肝臟損傷51例，重度肝臟損傷34例，所有患者診斷均符合2015年中華醫學會肝病分會聯合感染病學分會制定的慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)。入選標準：⑴符合慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)診斷標準者；⑵近期未使用任何免疫調節劑以及抗病毒藥物者；⑶排除其他病毒性肝炎及免疫缺陷病者；⑷排除伴有肝臟、心臟、腎臟等嚴重疾病者；⑸了解本研究，并同意簽署知情同意書者。

同期選取35例肝功能檢查表面抗體為陽性的健康正常者作為對照，其中男性19例，女性16例，年齡25～46歲，平均年齡36.53±4.16歲，入選標準：⑴肝功能檢查各指標均正常者；⑵排除妊娠期或者哺乳期婦女；⑶排除伴有炎癥或者其他免疫性疾病者。

1.2 主要試劑熒光定量聚合酶鏈式反應(Fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR)試劑盒(購自于上海科華生物工程股份有限公司)，FQ-PCR擴增儀(TL988-Ⅱ(48)孔，購自于西安天隆科技有限公司)，IL-21、IFN-γ酶聯免疫吸附實驗(Enzymes linked immunosorbent assay，ELISA)檢測試劑盒(購自于上海森雄科技有限公司)，ELISA檢測儀(購自于美國BIO-RAD公司)。

1.3 方法采集HBV感染者清晨空腹狀態下靜脈血5ml，離心分離血清，分裝于2支已滅菌試管中，-70℃保存待檢，利用FQ-PCR方法檢測HBV感染者血清HBV DNA，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行；采集體檢肝功能正常者空腹狀態下靜脈血3ml，利用ELISA檢測所有受試者血清IL-21及IFN-γ水平，具體操作嚴格按照ELISA試劑盒使用說明書進行。

1.4 統計學分析利用統計學軟件SPSS 19.0進行數據統計學分析，計數資料采用卡方檢驗，相關性分析采用Pearson法，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 FQ-PCR檢測結果FQ-PCR檢測HBV感染者HBV DNA載量＜103copies·ml-1者36例，即DNA陰性組36例；103copies·ml-1≤HBV DNA載量≤104copies·ml-1者43例，即DNA低拷貝組43例，104copies·ml-1＜HBV DNA載量＜108copies·ml-1者40例，即DNA高拷貝組40例。

2.2 HBV感染者與健康對照組血清IL-21及IFN-γ水平比較CHB、LC、PHC三組患者血清IL-21水平均明顯高于健康對照組，差異均顯著，且具有統計學意義(P＞0.05)，CHB、LC、PHC三組患者之間血清IL-21水平比較無顯著差異(P＞0.05)；CHB、LC、PHC三組患者血清IFN-γ水平均明顯高于健康對照組，差異均顯著，且具有統計學意義(P＞0.05)，CHB、LC、PHC三組患者之間血清IFN-γ水平比較無顯著差異(P＞0.05)。具體結果見表1、圖1。

表1 HBV感染者與健康對照組血清IL-21及IFN-γ水平比較

圖1 HBV感染者與健康對照組血清IL-21及IFN-γ均數值

2.3 不同HBV DNA載量之間血清IL-21及IFN-γ水平比較DNA陰性組血清IL-21水平明顯高于健康對照組(P＜0.05)，DNA低拷貝組血清IL-21水平明顯高于DNA陰性組(P＜0.05)，DNA高拷貝組血清IL-21水平明顯高于DNA低拷貝組(P＜0.05)，即隨著HBV DNA載量增加，血清IL-21水平呈現明顯升高趨勢(P＜0.05)；DNA陰性組血清IFN-γ水平明顯高于健康對照組(P＜0.05)，DNA低拷貝組IFN-γ水平明顯低于DNA陰性組(P＜0.05)，DNA高拷貝組血清IFN-γ水平明顯低于DNA低拷貝組(P＜0.05)，即隨著HBV DNA載量增加，IFN-γ水平呈現明顯降低趨勢(P＜0.05)。具體結果見表2、圖2。

表2 不同HBV DNA載量之間血清IL-21及IFN-γ水平比較

圖2 不同HBV DNA載量血清IL-21及IFN-γ均數值

2.4 HBV DNA載量與血清IL-21及IFN-γ水平相關性分析相關性分析結果顯示，IL-21水平與HBV DNA載量呈較強正相關(rs=0.641，P＜0.05)，IFN-γ水平與HBV DNA載量呈現負性相關(rs=-0.372，P＜0.05)。

3 討論

HBV屬嗜肝病毒科，有包膜雙鏈DNA[4，5]，對于外界環境抵抗力極強，-20℃狀態下可存活15年之久。部分HBV感染者早期無任何明顯癥狀，是潛在的最為危險的傳染源之一[6]。我國HBV感染流行病學調查結果顯示[7]，60%的人群被HBV感染過，10%的人群為HBsAg陽性攜帶者[8]。我國慢性HBV感染者已達1.1億人，每年死于CHB相關肝病者約30萬例，給我國社會及家庭造成了巨大的經濟壓力。

HBV感染者發病與機體免疫功能有著極大的關系，免疫能力較強者感染HBV后，機體免疫系統通過免疫相關因子作用清除HBV，同時可獲得保護性抗體，若免疫能力差者感染HBV，由于機體無法及時清除HBV而發病，甚至進一步發展為肝硬化、肝癌危及生命[9]。大量研究表明，HBV通常引起免疫系統損傷而導致肝臟發生病變。多數學者認為[10，11]，HBV發病機制與免疫系統介導以及HBV DNA復制密切相關。研究HBV感染者血清HBV DNA與免疫相關因子之間相關性具有十分重要的臨床價值。IL-21是一種具有多種功能的免疫相關細胞因子[12]，可促進B細胞增殖分化，調節多種免疫蛋白產生，同時還可增強T淋巴細胞活性，因此對于細胞免疫以及體液免疫均具有十分廣泛的調節作用。研究表明[13]，IL-21參與多種自身免疫性疾病的發生及發展，且在多種慢性病毒感染中發揮重要調節作用。因此，IL-21為HBV感染的免疫學治療提供了新方向。IFN-γ是Th1和NK細胞在免疫應答過程中產生的一種具有高度生物活性的細胞因子。大量研究證實[14]，IFN-γ在機體內發揮抗腫瘤、免疫調節以及抗病毒的作用。因此，本研究選取IL-21與IFN-γ兩個免疫相關細胞因子，研究其與HBV感染者血清HBV DNA載量的關系，試圖為HBV感染治療提供新的免疫治療靶點。

本研究結果表明，CHB、LC、PHC三組HBV感染者血清IL-21以及IFN-γ水平均明顯高于健康對照組，提示HBV感染機體引發免疫病理反應，可刺激血清IL-21、IFN-γ產生，二者與CHB、LC、PHC發病均密切相關；DNA陰性組血清IL-21水平明顯高于健康對照組，DNA低拷貝組血清IL-21水平明顯高于DNA陰性組，DNA高拷貝組血清IL-21水平明顯高于DNA低拷貝組，可見隨著HBV DNA載量增加，血清IL-21水平呈現明顯升高趨勢，提示隨著HBV DNA含量的增加，機體免疫反應發生越來越嚴重，血清IL-21水平可反應不同HBV DNA含量所導致的免疫反應程度，推測可作為HBV感染的免疫學生物指標；DNA陰性組血清IFN-γ水平明顯高于健康對照組，DNA低拷貝組IFN-γ水平明顯低于DNA陰性組，DNA高拷貝組血清IFN-γ水平明顯低于DNA低拷貝組，由此可見，隨著HBV DNA載量增加，IFN-γ水平呈現明顯降低趨勢，與已知報道研究結果一致[15]，但與李彩東[16]等研究結果相反，提示IFN-γ與HBV感染患者血清HBV DNA載量密切相關，但其作用機制仍有待進一步深入研究；相關性分析結果顯示，IL-21水平與HBV DNA載量呈較強正相關，IFN-γ水平與HBV DNA載量呈現負性相關，提示二者與HBV感染者血清HBV DNA載量密切相關，有望成為HBV感染者免疫治療新靶點，值得更深入的進一步探究。

綜上所述，IL-21、IFN-γ與HBV感染者血清HBV DNA載量密切相關，推測IL-21、IFN-γ有望成為HBV感染者免疫治療新靶點，但是本研究仍存在一些不足之處，如樣本量較少，研究機制不太完善，因此仍有待于進一步擴大樣本量深入研究。

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Correlation of serum DNA HBV with IL-21 and IFN-in patients with HBV infection

TAO Penghui.
Department of Laboratory Medicine，Central Hospital of Xinyang City，Xinyang Henan，464000 China.

Objective To investigate the correlation of serum DNA HBV with IL-21 and IFN-in patients with HBV infection. Methods A total of 119 cases of chronic hepatitis B patients as the research object，which is CHB 46 cases，LC 41 cases，PHC 32 cases，selected 35 cases of liver function examination surface antibody positive healthy controls，FQ-PCR method for detection of HBV infection serum HBV DNA，detected by ELISA method and subjects of serum IL-21 and IFN-levels.Results CHB，LC，PHC three groups of patients with serum IL-21，IFN-levels were no significant difference(P＞0.05)，compared with the healthy control group had significant difference，and the three groups of HBV infected serum IL-21 and IFN-levels were significantly higher than those of the healthy control group(P＜0.05)；the level of IL-21 group were significantly higher than the negative the control group(P＜0.05)，and with the HBV DNA load increased significantly increased；Serum IFN-levels of the negative group were significantly lower than the control group(P＜0.05)，and with the HBV DNA load increased significantly decreased；Correlation analysis showed that the IL-21 level and HBV DNA load was strong positive correlation(rs=0.641，P＜0.05)，IFN-gamma level and HBV DNA load negatively related(rs=-0.372，P＜0.05).Conclusion IFN-and IL-21 are closely related to the persistent infection of DNA HBV in the serum of HBV infected persons，suggesting that IL-21 and IFN-are expected to be a new target for immunotherapy of HBV infection.

∶HBV；HBV DNA；IL-21；IFN-γ；Correlation

R512.6+2，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0347-04

2016-12-16；

2017-05-05)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.016

陶鵬輝，男，1972年生，本科學歷，學士學位，副主任檢驗技師，研究方向是臨床免疫、生化、微生物學檢驗。E-mail：taopenghui88@163.com。