惠州市無償獻血者血液HBV,HCV,HIV(1+2型)核酸篩查匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式結果分析

萬小春，鐘展華，嚴鳳好，曾演強，曾少麗，湛玉武

(惠州市中心血站，廣東惠州516000)

惠州市無償獻血者血液HBV,HCV,HIV(1+2型)核酸篩查匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式結果分析

萬小春，鐘展華，嚴鳳好，曾演強，曾少麗，湛玉武

(惠州市中心血站，廣東惠州516000)

目的探索單人份檢測模式與匯集檢測模式兩種血液核酸篩查方式對于血液核酸篩查結果的影響。方法先采用蘇州華益美生物科技有限公司生產的乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1+2型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法），對ELISA篩查合格的標本進行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸篩查（匯集檢測模式），再用該試劑盒按照單人份檢測模式對匯集檢測過的樣本進行復檢。結果本研究采用單人份檢測模式共檢測5385例經過匯集檢測模式篩查的樣本，篩查出HBV DNA核酸陽性標本10例(陽性率1.86‰)。10例核酸陽性標本與匯集檢測模式的結果一致，本研究的兩種檢測模式均未檢測到HCV RNA核酸陽性和HIV（1+2型）RNA陽性的標本。結論在酶免檢測的基礎上應用核酸檢測能有效避免HBV、HCV、HIV（1+2型）的漏檢，降低輸血傳播相關病毒的風險。匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式對于檢測結果無明顯差異。

核酸檢測；血液安全；單人份檢測；匯集檢測

病毒核酸檢測技術（NAT）是直接檢測病原體核酸的一系列技術的總稱，相比血清學抗原抗體檢測方法(EIA)，血液病毒核酸檢測技術可以有效縮短抗原抗體免疫檢測的“窗口期”，從而大大降低經輸血傳播病毒的風險[1-3]。盡管NAT從理論上并不能完全消除病毒感染的“窗口期”，但可以有效地預防經輸血傳播病毒性疾病。單人份檢測模式的標本處理相對直接，耗時較短，且即使出現檢測陽性的樣本也可以直接出具核酸檢測結果而不必經過匯集檢測的拆分檢測，能有效縮短血液放行時間，實現快速檢測，同時降低檢測成本，血液核酸的單人份檢測模式尤其適用于采樣量相對較少的血小板樣本的核酸檢測以及日均采血量較少的血站開展核酸檢測，因此，在原有核酸篩查試劑的技術基礎上，以保證核酸檢測結果準確性、穩定性為原則，開展了血液核酸單人份檢測模式的探索，現將初步的研究結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本2016年惠州市中心血站的無償獻血者標本5385例，獻血者年齡為18～55周歲，經過HB-sAg、丙氨酸氨基轉移酶篩查合格才允許捐獻。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑NAT匯集檢測采用蘇州華益美生物科技有限公司產品，NAT單人份檢測采用蘇州華益美生物科技有限公司產品。

1.2.2 儀器華益美全自動核酸檢測系統包括BACME全自動核酸提取系統（瑞士Hamilton）、ABI7500熒光PCR儀（美國ABI）。SLA-DI4800核酸提取儀（臺灣）、ABI7500熒光PCR儀（美國ABI）。以上儀器均在校驗合格期使用。

1.3 檢測方法判定規則

1.3.1 常規檢測所有血液標本均按照我國《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2011）進行常規的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的2次ELISA檢測和ALT項目的2次速率法檢測，由不同人員用不同廠家的試劑嚴格按試劑說明書的要求進行檢測。

任一種試劑檢測為陽性的，重取血樣雙孔復試，復試任一孔為陽性的判定為不合格，其中2例抗HIV陽性標本送疾病預防控制中心確認實驗確認。所有試驗結果均按試劑盒說明書在實驗室管理軟自動判讀。

1.3.2 核酸匯集檢測對常規檢測合格的標本進行核酸（NAT）檢測，首先由全自動核酸提取儀自動混樣，最多每8份標本（150μl/份）混合成1份（1.2ml）匯集池（pool）標本，由全自動核酸提取儀和熒光核酸擴增檢測儀采用核酸定性篩查試劑進行HBV、HCV、HIV（1+2型）核酸檢測。每批檢測均設置1個陰性質控和1個陽性質控，1個外部陽性質控，每個匯集池均含DNA內對照（DNA IC）和RNA內對照（RNA IC）。

匯集檢測為核酸陰性，匯集池中的標本合格；匯集檢測為核酸陽性，對該匯集池子中的標本進行拆分檢測，拆分檢測無核酸反應性判定為NAT檢測陰性，拆分檢測為核酸陽性判定為NAT檢測陽性。所有試驗結果均按試劑盒說明書的要求用華益美實驗室管理件自動判讀。

1.3.3 核酸單人份檢測每份標本分別取樣400μl，按照操作說明書進行標本的處理、核酸擴增、分析，得出標本陰陽性結論。每批檢測均設置1個陰性質控和1個陽性質控，每個樣本和質控品均含DNA內對照（DNA IC）和RNA內對照（RNA IC）。該檢測結果與匯集檢測與拆分檢測的結果進行分析。

2 結果

本實驗嚴格按照考核試劑說明書要求操作，共對5385例臨床用血標本進行了核酸檢測。5385例EIA合格標本中，混合檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標本10例，在5385例標本中未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性標本；5385例EIA合格標本中，單人份檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標本10例，在5385例標本中未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性標本。

考核試劑檢測單人份模式檢測EIA合格的臨床用血標本5385例。經考核試劑檢測，其中10個樣本檢測為HBV DNA陽性，未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性的樣本。匯集模式檢測EIA合格的臨床用血標本5385例。匯集池數量為698個，其中檢出陽性14個，拆分率2.0%，其中8個匯集池拆分檢測出10例HBV DNA陽性樣本，拆分收益率57.14%；匯集模式未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性樣本。

單人份模式結果和混合模式結果比對見表1～3。

3 討論

我們采用單人份三聯HBV DNA、HCV RNA和HIV（1+2型）RNA核酸鑒別檢測試劑檢測血液標本，實驗結果顯示惠州地區無償獻血人群中核酸初次反應率較低(1.86‰)，這與汪德海等報道的結果基本一致，提示惠州地區的獻血人群處于低感染狀態，這有利于保障血液安全[4]。

表1 單人份模式與混合模式HBV檢測結果

表2 單人份模式與混合模式HCV檢測結果

表3 單人份模式與混合模式HIV（1+2）檢測結果

在本考核的5385例EIA合格標本中，混合檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標本10例，在5385例標本中未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性標本；5385例EIA合格標本中，單人份檢測模式篩查出HBV DNA核酸陽性標本10例，在5385例標本中未檢測到HCV RNA和HIV（1+2型）RNA陽性標本，這可能與本次樣本量較少有關，同時也顯示HBV輸血傳播的殘余風險高于HIV-1或HCV，本實驗結果中NAT收益標本全部為HBV DNA反應性，這與已有的報道是相似的[5-10]，也證實HBV輸血傳播的殘余風險相對較高，這可能與我國HBV高感染率有關。

綜上所述，在酶免檢測的基礎上進行核酸檢測可以大大降低輸血的殘余風險，特別是HBV輸血傳播的殘余風險；而核酸檢測的兩種模式匯集檢測和單人份檢測兩種檢測模式的結果一致，說明檢測模式對于檢測結果幾乎沒有影響。

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R193.3，R512.6，R512.91，R446.62

A

1674-1129(2017)03-0447-03

2016-12-19；

2017-04-04)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.054