紅細(xì)胞參數(shù)及血紅蛋白成分分析與地中海貧血基因分型的關(guān)系探討

鄧婷，袁煒華

(云浮市人民醫(yī)院，廣東云浮527300)

紅細(xì)胞參數(shù)及血紅蛋白成分分析與地中海貧血基因分型的關(guān)系探討

鄧婷，袁煒華

(云浮市人民醫(yī)院，廣東云浮527300)

目的通過檢測(cè)受檢人員血常規(guī)參數(shù)、紅細(xì)胞滲透脆性及血紅蛋白成分分析，探討其與地貧基因分型的關(guān)系。方法采用ABX120血液分析儀檢測(cè)血常規(guī)參數(shù)，“紅細(xì)胞一管法”檢測(cè)紅細(xì)胞滲透脆性，VARII血紅蛋白成分分析儀進(jìn)行血紅蛋白成分分析，PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行地貧基因檢測(cè)。結(jié)果在147例地貧基因受檢者中，確診為地貧基因患者77例，陽性率為52.4%，其中α-地貧56例，β-地貧16例，α-地貧復(fù)合β-地貧5例，且不同類型的地貧患者紅細(xì)胞參數(shù)及血紅蛋白成分分析結(jié)果表現(xiàn)各有不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論血常規(guī)參數(shù)、紅細(xì)胞滲透脆性及血紅蛋白成分分析在地貧篩查中發(fā)揮著重要的作用，且可初步鑒別地貧的類型。

紅細(xì)胞參數(shù)；血紅蛋白成分分析；地中海貧血；紅細(xì)胞滲透脆性

地中海貧血是由于珠蛋白基因的缺陷使珠蛋白鏈合成減少或不能合成導(dǎo)致紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白成分改變而引起的慢性溶血性貧血。患病胎兒出生后身體發(fā)育等可受到一定的影響，而且這種影響程度與珠蛋白基因缺失的多少成正相關(guān)[1，2]。由于大多數(shù)基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)均無基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，不具備地貧確診的條件，因此MCV、紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)和血紅蛋白電泳等成為地貧初篩最常用到的檢測(cè)方法。本文試圖探討地貧初篩的幾種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法與基因確診的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 觀察對(duì)象對(duì)2016年4月至2016年11月在云浮市人民醫(yī)院門診、住院及體檢者147例進(jìn)行血常規(guī)、紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)、血紅蛋白成分分析及地貧基因檢測(cè)，其中男41例，女106例，年齡1月～83歲。

1.2 標(biāo)本采集及保存采用真空采血管分別抽取靜脈血2ml于乙二胺四乙酸鉀（EDTA-K2）和枸櫞酸鈉抗凝管中，顛倒混勻8次備用。紅細(xì)胞參數(shù)在4h內(nèi)完成檢測(cè)，其余項(xiàng)目在一周內(nèi)完成，標(biāo)本保存于2～8℃冰箱內(nèi)。

1.3 方法與試劑采用ABX120血液分析儀及其配套試劑檢測(cè)RBC、HBG、MCV、MCHC、RDW-CV。紅細(xì)胞滲透脆性采用“紅細(xì)胞一管法”檢測(cè)，試劑來自廣州市米基醫(yī)療器械有限公司，并采用VARII血紅蛋白成分分析儀及其配套試劑進(jìn)行血紅蛋白成分分析。采用PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，儀器為CFX96型熒光定量PCR儀（Bio-Rad公司），試劑由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。本次所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 各血液學(xué)項(xiàng)目參數(shù)參考區(qū)間（正常血紅蛋白電泳無異常血紅蛋白帶出現(xiàn)）見表1。

2 結(jié)果

147例基因檢測(cè)者中，非地貧70例，其中異常血紅蛋白病2例，確診為地貧患者77例，陽性率為52.4%，包括α-地貧56例、β-地貧16例、α-地貧復(fù)合β-地貧5例，均為雜合子。本院接診的孕婦中亦以α-地貧為主（72.7%）。α-地貧中檢測(cè)出基因型--SEA/aa 47例，-a3.7/aa 6例，-a3.7/--SEA 3例，以--SEA/aa為主，占α-地貧中83.9%，占地貧患者中61.3%。β-地貧中檢測(cè)出基因型41-42M/N 8例，654M/N3例，17M/N 2例，71-72M/N 1例，43M/N 1例，-28M/N 1例，以41-42M/N為主，占β-地貧中50.0%，占地貧患者中10.4%。α-地貧復(fù)合β-地貧檢測(cè)出基因型--SEA/aa復(fù)合71-72M/N 2例，--SEA/aa復(fù)合17M/N 1例，-28M/N復(fù)合aQSa/aa 1例，-a3.7/aa復(fù)合41-42M/N 1例。見表2、表3、表4。

表1 各項(xiàng)目參數(shù)參考區(qū)間

2.1 各類別的紅細(xì)胞參數(shù)及血紅蛋白成分分析特點(diǎn)見表2。

2.2 正常對(duì)照組與由基因確診的地貧組在MCV、HbA2與紅細(xì)胞滲透脆性陽性率見表3。

2.3 MCV、HbA2與紅細(xì)胞滲透脆性相對(duì)地貧基因檢測(cè)結(jié)果的敏感、特異度及漏診率見表4。

3 討論

表2 各類別的紅細(xì)胞參數(shù)及血紅蛋白成分分析特點(diǎn)

表3 正常對(duì)照組與由基因確診的地貧組在MCV、HbA2與紅細(xì)胞滲透脆性陽性率

表4 MCV、HbA2與紅細(xì)胞滲透脆性相對(duì)地貧基因檢測(cè)結(jié)果的敏感、特異度及漏診率

地中海貧血屬小細(xì)胞低色素性貧血，血液學(xué)常規(guī)參數(shù)改變主要以MCV、MCH降低為特征，MCV法目前仍然是最為簡單快捷篩查地中海貧血的指標(biāo)，鄧捷[3]、何雅軍[4]等報(bào)道MCV的敏感性分別為98.9%、91.3%，本研究中MCV對(duì)地貧篩查的敏感性為97.4%，特異度為70.1%，與其較為接近，但特異度偏低。僅2例達(dá)到正常范圍，且2例均為靜止型α-地貧，靜止型α-地貧可不表現(xiàn)貧血癥狀。而地貧與非地貧患者標(biāo)本的RBC、Hb、MCHC、RDW-CV無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。由此可見可以通過檢測(cè)MCV初步判斷是否屬地貧，但MCV的降低常見的還有缺鐵性貧血[5]、慢性病貧血、環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性貧血、鉛中毒等[6]。本要排除其他類型的貧血還需要聯(lián)合進(jìn)一步檢查，如紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)、血紅蛋白電泳、血清鐵蛋白檢測(cè)等。紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)也是目前應(yīng)用較為廣泛的篩查地中海貧血的方法。它的簡單、易行、不需要配備特殊儀器的特點(diǎn)能滿足較多基層衛(wèi)生單位的地貧篩查需求，鄧捷[3]等報(bào)道紅細(xì)胞脆性診斷地中海貧血敏感度較MCV低，特異度較MCV高，與本研究一致。但該方法與基因確診的方法相比仍有19.5%的漏診率，見表3，紅細(xì)胞滲透脆性敏感度、漏診率在三個(gè)項(xiàng)目中位居第二，原因可能是該方法采用手工操作，存在一定的操作誤差，并影響了檢測(cè)的靈敏度，但其特異度卻比MCV和HbA2法的要高，所以該方法雖然敏感度不高，但因有較高特異度的優(yōu)勢(shì)亦應(yīng)保留作為篩查地貧的方法，但必須考慮其存在較高漏診率的情況。同時(shí)我們應(yīng)從該方法的非技術(shù)性影響因素入手盡可能的減少影響檢測(cè)靈敏度的各種因素，如操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守項(xiàng)目檢測(cè)的操作規(guī)程，做好相關(guān)的質(zhì)量控制。

血紅蛋白電泳是初步分類α和β地中海貧血并且篩查異常Hb最主要的試驗(yàn)方法[7]，亦有文獻(xiàn)報(bào)道[8]在篩查的實(shí)施過程中血紅蛋白電泳起到了非常重要的作用，能夠定量檢測(cè)HbA、HbF、HbA2含量，可將地中海貧血進(jìn)行初步分類為α地貧或B地貧。可以有效地篩查出高危夫婦(夫婦是同型地貧者)，同時(shí)還可篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等，有助于臨床確診，為進(jìn)一步進(jìn)行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎(chǔ)。同時(shí)據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[9]血紅蛋白電泳可以篩查出95%以上的β-地貧和α-復(fù)合β-地貧，但篩查α-地貧的敏感性和特異性均相對(duì)較低。在本結(jié)果中HbA2在β-地貧、α+ β地貧中均升高，陽性率為100%，在α-地貧中24例正常，漏檢率為34.3%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。但敏感度和特異度分別為68.8%，67.1%，漏診率為31.2%，從中可以看出該方法學(xué)的敏感度和特異性并不高，且存在較高的漏檢率，很可能是受α-地貧敏感度特異性偏低的數(shù)據(jù)影響，同時(shí)可能也與本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)相對(duì)較少有關(guān)。因此有文獻(xiàn)報(bào)道[10]Hb電泳對(duì)某地區(qū)孕婦易漏篩，不適于當(dāng)?shù)卦袐D的篩查或普查，適用于β-地貧鑒別。

由于地中海貧血的確診需要進(jìn)行基因檢測(cè)，因此我們選擇的標(biāo)本均已進(jìn)行過血液常規(guī)、紅細(xì)胞滲透脆性、血紅蛋白電泳及基因檢測(cè)，以基因檢測(cè)結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，其他方法用于對(duì)比。所有檢測(cè)方法在分析前、分析中、分析后進(jìn)行質(zhì)量控制，保證檢測(cè)準(zhǔn)確度。而對(duì)于基因檢測(cè)其要求就更高，上崗人員必須經(jīng)過相關(guān)培訓(xùn)，基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需要獨(dú)立設(shè)置和應(yīng)符合相關(guān)建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)并通過相關(guān)專業(yè)機(jī)構(gòu)評(píng)審等。以上情況說明并不是所有的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)均能及時(shí)做到地中海貧血的確診的，尤其是基層衛(wèi)生單位。鑒于以上各種篩查方法的在靈敏度、特異性的不同，為了減少地貧的漏檢率，我們建議基層衛(wèi)生機(jī)構(gòu)同時(shí)開展血常規(guī)、紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)及血紅蛋白電泳的聯(lián)合檢測(cè)。

重型β地中海貧是危害最為嚴(yán)重的血紅蛋白病，患兒多于3～12個(gè)月開始發(fā)病，需靠輸血來維持生命，多于童年期夭折；中間型β地中海貧的臨床表型有很大的異質(zhì)性，輕者只有輕微的地貧表征，重者需要定時(shí)輸血。出現(xiàn)肝脾腫大等明顯的地貧特征。因類預(yù)防此類患兒出生是一項(xiàng)重要的工作[11]。在本次的147例基因檢測(cè)中，有77例被確診為地貧患者，β-地貧16例、a-地貧復(fù)合β-地貧5例，α地貧56例，說明本次實(shí)驗(yàn)中α地貧的檢出比例較高（72.7%）。同時(shí)本次檢測(cè)亦無發(fā)現(xiàn)重型地貧，均是輕型及中間型或靜止型地貧。可能與本次的實(shí)驗(yàn)例數(shù)較少有關(guān)。相關(guān)資料表明重型β地中海貧漏診會(huì)給患兒家庭帶來極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和社會(huì)負(fù)擔(dān)，所以實(shí)驗(yàn)室工作人員在發(fā)現(xiàn)β地中海貧標(biāo)本時(shí)應(yīng)復(fù)查和使用其他相關(guān)技術(shù)手段進(jìn)行印證。當(dāng)標(biāo)本在血紅蛋白電泳中出現(xiàn)β地中海貧血的結(jié)果時(shí)，應(yīng)及時(shí)建議患兒做進(jìn)一步的地貧基因檢測(cè)以明確診斷。

地中海貧血篩查方法中均存在一定的漏診風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明血常規(guī)參數(shù)、紅細(xì)胞滲透性及血紅蛋白成分分析在地貧篩查中發(fā)揮著重要的作用，且可初步鑒別地貧的類型，因此在基層衛(wèi)生機(jī)構(gòu)能準(zhǔn)確的做好這三個(gè)篩查實(shí)驗(yàn)就顯得十分重要。但我們建議任一種篩查結(jié)果陽性后均應(yīng)及時(shí)地進(jìn)行中海貧血基因檢查。

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R556.6+1，R446.11+1

A

1674-1129(2017)03-0372-03

2017-01-11；

2017-05-02)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.024

廣東省云浮市醫(yī)藥衛(wèi)生科研課題（編號(hào)：2016B10）