液相色譜技術在定量分析中的應用

盧肖蘭

隨著我國科學技術的不斷發展進步，色譜分離柱等低噪音高靈敏的檢測器和數據處理系統也隨之出現，據相關研究表明，液相色譜技術方法非常穩定，能夠快速分離檢測物質，并且檢驗結果十分準確，在實驗室中非常受到液相色譜工作者的青睞，液相色譜技術已經成為實驗室中應用最為廣泛的技術。比如：液相色譜工作者常常把液相色譜技術應用到定量分析中，包括我們日常生活中所食的食品營養素含量分析、血和藥濃度檢測以及生物活性物質分析等等。在本文中，筆者將對液相色譜技術在定量分析中的應用進行研究探討。

液相色譜儀的組成

液相色譜儀是一種對混合物質進行分離的分析鑒定儀器，隨著科學技術的不斷發展，現代液相色譜儀也發展得更加符合實驗室工作要求。在液相色譜儀的組成當中，高壓輸液泵、色譜柱以及檢測器占有非常重要的位置，具體如下所述：

液相色譜儀之高壓輸液泵。由于高壓輸液泵具有耐高壓、輸出流量比較穩定以及流量精度極高等特點，其在液相色譜分析中應用極為廣泛，它通過柱塞泵電機驅動凸輪運轉，將柱塞桿往液缸內部反復攪動，使泵腔內部的液體周期性的以高壓狀態排出，從而使樣品進入色譜柱當中，讓樣品從色譜柱填料與流動相分離開來。

液相色譜儀之色譜柱。液相色譜儀色譜分離是根據樣品的不同成分之間的配比系數，通過色譜柱實現多次吸附和分析，從而將樣品混合物分離出來。其中，色譜柱一般由色譜柱頭螺絲、色譜柱篩板、色譜柱管、色譜柱填料以及色譜柱堵頭組成，其內壁一般由直形不銹鋼管材料制作，這種材料都是經過高度拋光處理的材料，可用于有機溶劑以及水溶性緩沖鹽液等。另外，為了更好的實現樣品混合物質分離，液相色譜固定相基質一般采用無機基質和有機基質兩種，無機基質可以通過樣品物質表面引入多個功能基因進行不同程度的分離，有機基質化學物質相對穩定，可以保證樣品混合物質分離的準確性和高精度性。

液相色譜儀之檢測器。

在液相色譜儀中，除了色譜柱和高壓輸液泵是非常重要的分析儀器之外，檢測器同樣也具有非常重要的作用。檢測器主要用于檢測樣品混合物在經過色譜柱分離之后其成分濃度的變化，為定量分析提供相應的數據。其中，檢測器主要分為UVD（紫外線吸收檢測器）、FLD（熒光檢測器）以及電化學檢測器等等。UVD（紫外線吸收檢測器）是以上三種檢測器中應用范圍最為廣泛的檢測器，它利用自身紫外線光可以吸收的特點來檢測樣品混合物質濃度，靈敏性非常高，并且不具有破壞性。FLD（熒光檢測器）可以吸收一定長度的波長的光，可以用來做梯度分析，雖然沒有UVD（紫外線吸收檢測器）應用的范圍廣，但是作為選擇性的檢測器還是非常不錯的。至于電化學檢測器，這是一種靈敏度極強的選擇器，它的固體工作電極主要是使用玻璃碳電極材料制作，壽命較其他檢測器極長。

液相色譜技術在定量分析中的預處理技術

由于天然樣品的構成非常復雜，實驗室液相色譜工作人員在進行天然樣品成分分析時，都需要進行預處理，將天然樣品的組成成分進行提取，再進一步純化濃縮，才能得到準確的檢測結果。在下文中，筆者講為大家介紹一些常用的天然樣品預處理方法，以供大家分析研究。

預處理技術之沉淀提取。沉淀提取在預處理技術中是一種比較傳統的提取方法，它具有操作簡單以及經濟適用的特點。它主要是通過在天然樣品中添加沉淀劑，讓天然樣品中的大分子在不進行分析的情況下就可以沉淀出來，然后再通過離心操作，選取上清液分析天然樣品成分。這種方法非常適合生理體液和組織體液樣品的定量分析，不僅節約了檢測成本，還能使檢驗結果更加準確。

預處理技術之溶劑萃取。溶劑萃取是指將天然樣品的成分進行提取、濃縮。往往在天然樣品中添加的萃取劑越多，提取被測物質的次數也就越多，但是相對應的萃取率也就更高。這種方法一般用于血漿藥物的濃度分析。

預處理技術支持固相萃取。據調查顯示，固相萃取是當前預處理技術中應用最多的方法，它主要用于生物材料的藥物提取以及活性物質提取。液相色譜工作者將需要檢測的物質放入常壓色譜柱當中去除雜質，然后再用相應的溶劑進行洗脫，將被測物質純化。在這個過程中，常會用到氧化鋁以及樹脂等固定相。

預處理技術之超臨界流體萃取。進行超臨界流體萃取操作一般要在固定的溫度以及壓力下進行，通過特殊裝置，將固體樣品用超臨界的二氧化碳流體進行提取。由于超臨界流體萃取方法擴散速度非常快，分離操作不僅環保而且省時，常用于提取一些脂溶性物質。

液相色譜技術在定量分析中的儀器實驗技術

儀器實驗技術在液相色譜技術中占有非常重要的位置，它主要涉及流動相配置、色譜柱使用方法以及檢測器使用技術三個方面，具體如下所述：

流動相配置。實驗室液相色譜工作者在進行流動相配置時，必須使用符合有關規定和要求的溶劑和純水。另外，為了保證流動相配置的質量，配置所使用的溶劑必須使用達到液相色譜純度的溶劑，配置所用的純水則必須使用電阻率為18歐姆米。配置完成之后還需要注意通過0.14微米的過濾膜過濾，這樣不僅能有效保證流路管道通暢，還能防止溶劑被污染。除此之外，在進行液相色譜系統之前，工作人員需要對流動相進行脫氣操作，防止氣體溶解在溶劑中，破壞溶劑的純度。

色譜柱使用方法。色譜柱作為液相色譜儀進行分離的重要組成部分，液相色譜工作者要注意保持色譜柱的效果以及延長色譜柱的壽命，如果色譜柱出現以上兩個任一問題，對待測樣品的檢測結構都非常不利。因此，在使用色譜柱時，要在進樣閥和色譜柱中間使用相應的過濾器，如在線過濾器，還要避免使用對固定相具有強侵蝕性的流動相組合，從而延長色譜柱的使用時間。

檢測器使用技術。在液相色譜儀中，有三種常用的檢測儀器，不同的檢測器有不同的使用方法，檢測器的好壞直接關系到液相色譜在定量分析中的應用，因此，必須對每一種檢測器都有所了解，并掌握主要的三種檢測儀器。

紫外檢測器在使用時需要注意周圍環境，一定要在固定的溫度和壓力下進行，否則會影響檢測結果的準確度。熒光檢測器相比紫外檢測器靈敏度要高出很多，在使用時不能使用不穩定或具有較強吸收力的溶劑來作為流動相，并且在進行熒光檢測時，待檢測的樣品需要配成低于0.000006g/mL濃度的樣品。電化學檢測器一般用于痕量分析，這種檢測器對電極精密度要求非常高，因此，平時要注意對工作電極的保護，保證電化學檢測器的靈敏度。另外，在使用電化學檢測器時，需要注意消除氣泡，減少金屬離子干擾被測樣品。

綜上所述，液相色譜技術在定量分析中應用應該注意預處理技術和儀器實驗技術的使用，為了保證樣品定量分析結果的準確度，在使用預處理技術時需要根據樣品的屬性選擇科學合理的預處理方法，并且按照相關規定和要求使用檢測儀器。