新鮮冰凍血漿制備時間對冷沉淀凝血因子的質量影響

盧少芬+梁潔貞+仇嚴妹

[摘要] 目的 探討不同制備時間新鮮冰凍血漿對冷沉淀凝血因子（簡稱冷沉淀）中Ⅷ因子含量（FⅧ）和纖維蛋白原（Fg）含量的影響，以期找到制備冷沉淀凝血因子原料血漿的最佳及最長的制備允許間隔時間。 方法 以200份的血液樣本作為研究對象，分別于全血采集后6、8、13、18h內制備成新鮮冰凍血漿，并標識，將四組不同制備時間段的新鮮冰凍血漿分別制備成冷沉淀凝血因子，檢測其FⅧ活性和Fg含量。 結果 四組不同制備時間段的新鮮冰凍血漿制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時間延長明顯下降，組間比較差異有統計學意義（P<0.05），Fg含量比較差異無統計學意義（P>0.05）；其中6h合格率為96%，8h合格率為94%，13h合格率為86%，均滿足質控要求的75%受控要求，而18h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達不到冷沉淀凝血因子的質量要求，6、8、13h合格率與18h比較差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論 為了保證冷沉淀凝血因子的質量及滿足臨床用血需求量，用于制備冷沉淀凝血因子的新鮮冰凍血漿最佳選擇在采集后6～8h內，最長不宜超過13h分離并速凍的新鮮冰凍血漿作為原料漿。

[關鍵詞] 新鮮冰凍血漿；制備時間；冷沉淀；質量影響

[中圖分類號] R943 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）08-247-04

[Abstract] Objective To explore the effect of fresh frozen plasma of different preparation time on the content of factor VⅢ（FⅧ） and fibrinogen （Fg） content in cold coagulation factor.In order to find the best and the longest time interval for the preparation of the raw material of cold coagulation blood coagulation factor. Methods 200 blood samples were selected as the study objects.Fresh frozen plasma after whole blood collection 6h，8h，13h，18h was identified.Fresh frozen plasma prepared in different time periods of the four groups were respectively prepared into cold coagulation factors.FⅧ activity and Fg content were detected. Results The content of activeFⅧ in fresh frozen plasma prepared in different time periods of the four groups decreased significantly with the increase of preparation time，there was significant difference（P<0.05）.There was no statistical significance on Fg content（P>0.05）.The qualified rate of 6h was 96%，the qualified rate of 8h was 94 %，and the qualified rate of 13h was 86%，which could meet the requirement of quality control of 75%.However，the qualified rate of cold coagulation factor isolated from fresh frozen plasma prepared in 18h was only 54%，which could not meet the quality requirement of cold coagulation factor.There were significant differences in 6h，8h，13h and 18h，there was the statistical significance（P<0.05）. Conclusion In order to ensure the quality of blood coagulation factors and meet the demand of clinical blood，the best choice for the preparation of fresh frozen plasma was within 6-8h，the longest should not exceed 13h to separate and froze the fresh frozen plasma as raw material.

[Key words] Fresh frozen plasma；Preparation time；Cold precipitation；Quality influence

冷沉淀凝血因子是用新鮮冰凍血漿（FFP）制備的成分血，主要用于治療先天性缺乏Ⅷ因子（FⅧ）的血友病A，另外還可對因大失血、肝功能障礙等凝血因子減少而導致的出血性疾病進行輔助治療[1-2]。由于肇慶市地處山區，在四會、廣寧、懷集、德慶、封開分別設立了5個固定獻血點，路途最遠的往返需要五、六個小時，這在一定程度上影響了血液的制備，另外在采血數量方面也存在一些難以預估的影響因素，所以更加不利于新鮮冰凍血漿的制備。本研究通過收集血液采集后6、8、13、18h共4個時間段內制備新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子樣本各50份，檢測其FⅧ和Fg含量，并進行對比分析，以期找到制備冷沉淀凝血因子原料血漿的最佳及最長的制備允許間隔時間，既可保證冷沉淀凝血因子質量符合《全血及成分血質量要求GB18469-2012》[3]中的相關要求，又滿足其在臨床輸注應用中的安全性和有效性，還能最大限度開發利用血液資源，同時對成分制備工作產生積極的推動作用，意義深遠，其產生的經濟效益和社會價值也是可觀的?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

采集2014年7月～2016年9月期間我站符合《獻血者健康檢查要求》的全血（保存液為CPDA-1），并按照不同的采集時間段對其進行分組，分別為6、8、13及18h四個時間段，每段制成50份的新鮮冰凍血漿，并制定出相應的標識，對其進行加工，使其成為冷沉淀凝血因子，一共200份樣本。

1.2 試劑與儀器

大容量離心機（CR7、KR4i）、全自動血液成分分離機（德國LMB）、血凍速凍機（多美達MBF-21、天商冰源）、三洋低溫冰箱、血漿解凍箱、恒溫水浴箱、全自動血凝分析儀等；FⅧ試劑盒（德國西門子，546585A）、APTT試劑（北京普利生儀器有限公司，143209012）、CaCl2試劑（北京普利生儀器有限公司，20140821C）、纖維蛋白原含量測定試劑盒（北京普利生儀器有限公司，142812011）等，均在有效期內使用。

1.3 方法

1.3.1 新鮮冰凍血漿的制備 采用一次性離心（3800轉/min，15min，4±2℃）分離出新鮮冰凍血漿，并按采集后6、8、13、18h內制備分別標識，放于平板速凍機，速凍40min，再置于入-18℃低溫冰箱保存備用。

1.3.2 冷沉淀凝血因子的制備 對于冷沉淀凝血因子的制備，采用虹吸法完成，按照《血站技術操作規程》（2015版）[4]中相關方法進行操作，嚴格控制其容量，使其保持在（40±5）mL左右即可，熱合后需立即將其轉移到-50℃的速凍機中，速凍30min，再將其放置在-18℃低溫冰箱進行保存，以備使用。

1.3.3 FⅧ和Fg檢測 將冷沉淀凝血因子置入37℃恒溫水浴箱中，待其融化后，按照質管科的SOP《凝血因子Ⅷ促凝活性檢測標準操作規程》、《血漿纖維蛋白原檢測標準操作規程》《C2000-A全自動血凝儀標準操作規程》使用凝固法對FⅧ和Fg進行檢測。

1.3.4 判斷標準[2] 依據《全血及成分血質量要求GB18469-2012》中冷沉淀凝血因子質量控制項目和要求：來源于200mL全血：FⅧ≥40IU，Fg≥75mg。

1.4 統計學處理

采用SPSS19.0統計學軟件進行統計處理，計量資料以（）表示，采用t檢驗，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組采用不同制備時間冷沉淀FⅧ、Fg含量比較

四組不同制備時間段的新鮮冰凍血漿制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時間延長明顯下降，差異有統計學意義（P<0.05），Fg含量差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 各組采后不同制備時間冷沉淀凝血因子質量檢測結果

采后6h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為96%，8h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為94%，13h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為86%，均滿足質控要求的75%受控要求，而18h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達不到冷沉淀凝血因子的質量要求，6、8、13h合格率與18h比較均存在明顯差異，具有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

冷沉淀凝血因子是用新鮮冰凍血漿（FFP）制備的成分血，對于8～18h分離出來的新鮮冰凍血漿所制備的冷沉淀凝血因子是否能達到質量控制項目和要求，尚未有詳細資料報道，因此研究新鮮冰凍血漿的制備時間對冷沉淀凝血因子的質量影響有著重要的指導意義[5]。但由于冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子是一種不穩定的凝血因子，因其半衰期短，僅8～12h，其活性受獻血者自身凝血因子水平、血液采集過程、制備時間、制備溫度、制備方法、運輸溫度等影響[6]。研究結果顯示4組不同制備時間段的新鮮冰凍血冰鎮制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時間延長明顯下降，差異有統計學意義（P<0.05），Fg含量差異無統計學意義（P>0.05）；四組不同制備時間段的新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子中6h合格率為96%，8h合格率為94%，13h合格率為86%，均滿足《血站技術操作規程》（2012版）質量控制中“75%的抽檢結果落在質量控制指標范圍內可以為血液采集和制備過程受控”的規定[7]，而18h內制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達不到冷沉淀凝血因子的質量要求，這說明選擇合適的制備時間段制備新鮮冰凍血漿對冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子含量（FⅧ）含量的有較大影響。眾所周知冷沉淀凝血因子的制備經歷了全血、新鮮冰漿血漿、冷沉淀凝血因子三個階段，有些環節可控，有些不可控，任何一個環節的誤差都會影響質量。我站制備冷沉淀凝血因子主要是采用虹吸法，在虹吸過程中，一部分凝血因子及纖維蛋白容易隨血漿流入空袋，冰渣量很少或基本無冰渣，都會造成冷沉淀凝血因子的Ⅷ因子含量降低，這要求加強工作人員的培訓，提高質量意識，合理控制好每次放入血漿解凍箱的原料新鮮冰凍血漿袋數，制備完成后，及時放入速凍機迅速凍結，盡量縮短從新鮮冰凍血漿到冷沉淀在室溫停留的時間，減少Ⅷ因子損失[8]。

隨著成分輸血理念的推廣和血站成分制備能力的提高，冷沉淀凝血因子的應用被越來越多的臨床醫生掌握，冷沉淀凝血因子在改善凝血方面具有其它血液成分無法替代的重要意義，肇慶地區冷沉淀凝血因子的臨床使用數量逐年上升，將來北大醫療肇慶康復醫院以及中山大學附屬第三醫院肇慶醫院等政府項目的建設完成，也會加大冷沉淀凝血因子的使用[9]。我站血液全部來源于無償獻血，范圍多為縣、市、區及街頭等，血液采集后到站時間往往較長，受原來時間條件限制不能及時分離制備新鮮冰凍血漿，大多數血液只能分離制備冰凍血漿，未能做到一血多用[10]。自2012年頒布新版《全血及成分血質量要求GB18469-2012》[11]及第3版《臨床輸血》[12]中，對新鮮冰凍血漿進行了重新定義，對之前全血采集后6h（全血保養液為ACD）或8 h（全血保養液為CPD、CPD-1）內進行了更改，使其變更為6～8h內但不超過18h，血漿分離后對其進行速凍，使其成為固態成分血。國外在該方面規定，對于新鮮冰凍血漿，其制備時間不可高于18h[13-15]。本研究于2014年向市科技局申報《新鮮冰凍血漿制備時間對冷沉淀凝血因子質量影響的研究》科研項目，通過兩年的時間收集血液采集后6、8、13、18h共四個時間段內制備新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子樣本共200份，檢測其FⅧ和Fg含量，并進行對比分析，認為用于制備冷沉淀凝血因子的新鮮冰凍血漿最佳選擇在采集后6～8h內，最長不宜超過13h分離并速凍的新鮮冰凍血漿作為原料漿，并將研究結果應用于血液成分制備工作當中，使轄區內制備冷沉淀凝血因子的原料新鮮冰凍血漿制備量平均每年增加了8175500mL，既滿足臨床輸注的安全性和有效性，又能滿足臨床日益增長的冷沉淀凝血因子需求量。

[參考文獻]

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（收稿日期：2017-02-08）