EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義

盧玉元，王新

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科，黑龍江佳木斯154007）

EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其臨床意義

盧玉元，王新*

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科，黑龍江佳木斯154007）

目的：聯(lián)合檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中表皮生長因子受體（EGFR）和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)及其相關(guān)性，并探討其臨床意義。方法：選取本院2010年9月至2015年12月經(jīng)病理學(xué)確診為甲狀腺乳頭狀癌樣本和癌旁組織樣本各80例，病例臨床資料完整。采用免疫組織化學(xué)方法檢測甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中EGFR和PCNA的表達(dá)，并分析其臨床病理特征與甲狀腺乳頭狀癌中EGFR和PCNA表達(dá)情況的相關(guān)性。結(jié)果：EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率分別為78.75%和88.75%，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為35.00%和38.75%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EGFR和PCNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌組織表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；EGFR和PCNA在不同年齡、性別、臨床分期和有無家族史的甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝1，P＜0.01）。結(jié)論：EGFR和PCNA均有可能作為鑒別甲狀腺組織良惡性病變的有意義指標(biāo)。甲狀腺乳頭狀癌組織中EGFR和PCNA的表達(dá)情況與其伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，且EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。

甲狀腺乳頭狀癌；表皮生長因子受體；增殖細(xì)胞核抗原

甲狀腺癌被認(rèn)為是一種在全身惡性腫瘤中約占1%的女性常見惡性腫瘤，并且在頭頸部和內(nèi)分泌系統(tǒng)中占據(jù)首位［1］，甲狀腺癌的具體病因目前尚不明了，其發(fā)生可能與遺傳、飲食、體內(nèi)激素水平及電離輻射等多因素相關(guān)，針對甲狀腺癌患者，手術(shù)治療被認(rèn)為是目前行之有效的方式，但一些患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)處于晚期或者其分化低或已轉(zhuǎn)移，對這些特殊類型患者手術(shù)效果不理想［2］，甲狀腺癌患者的預(yù)后與其組織學(xué)類型有一定的關(guān)系。人類表皮生長因子受體（EGFR）是一種參與細(xì)胞有絲分裂并對細(xì)胞增生、存活、黏附、遷移和分化狀況等細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)，具有調(diào)控作用的酪氨酸激酶受體家族成員［3］。細(xì)胞生物學(xué)行為的改變可能與EGFR的表達(dá)異常相關(guān)，從而引發(fā)疾病的發(fā)生。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）是一種對DNA合成和細(xì)胞增殖有作用的有DNA多聚酶δ輔助蛋白作用的細(xì)胞周期蛋白，細(xì)胞周期的調(diào)控失控是腫瘤共同具有的基本特征，將導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，其活性反映腫瘤的惡性傾向，細(xì)胞的增殖狀態(tài)可由其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的高低狀況來評價(jià)。已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)研究證明腫瘤的分級、分期及預(yù)后與PCNA的表達(dá)有一定的相關(guān)性［4］。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合檢測甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中EGFR和PCNA的表達(dá)情況，并探討二者之間相關(guān)性及其意義。

圖1 EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)（免疫組化染色×200）

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2010年9月至2015年12月在本院經(jīng)病理學(xué)確診的甲狀腺乳頭狀癌樣本和癌旁組織樣本各80例，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例?；颊吲R床資料完整，年齡21～67歲，平均年齡為（46.38±11.53）歲。

1.2 試劑兔抗人EGFR抗體即用型試劑盒和兔抗人PCNA抗體濃縮型試劑盒均購于武漢博士德生物公司；濃縮DAB試劑盒、枸櫞酸鹽抗原修復(fù)液、蘇木素染液和免疫組化PV試劑盒均購自福州邁新公司。石蠟切片機(jī)、電烤箱、恒溫水浴箱、冰箱、光學(xué)顯微鏡、可調(diào)微量加樣器、計(jì)算機(jī)病理圖文分析系統(tǒng)等均由佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科提供。

1.3 方法采用免疫組化PV法研究甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中EGFR、PCNA的表達(dá)情況。將選取的標(biāo)本蠟塊按4μm厚度切片，PBS漂洗、抗原修復(fù)、再次沖洗，切片擦干后滴加3%H2O2溶液，再次沖洗，檢測EGFR表達(dá)時(shí)滴加一抗（EGFR稀釋度為1∶100）、檢測PCNA表達(dá)時(shí)滴加適當(dāng)濃度的一抗（PCNA稀釋度為1∶200），沖洗，滴加相應(yīng)二抗后再次沖洗，新鮮DAB工作液，蘇木素染色2min，分化液浸洗后病理返藍(lán)液洗，脫水、透明、封片，最后用PBS緩沖液代替一抗做陰性對照。

1.4 陽性結(jié)果判定由具有豐富工作經(jīng)驗(yàn)的病理科兩位醫(yī)師在高倍鏡視野下，雙盲隨機(jī)觀察100個(gè)細(xì)胞，評判方法：（1）陽性細(xì)胞所占百分比：分為5個(gè)等級，分別為0分、1分、2分、3分、4分，其陽性細(xì)胞數(shù)分別＜10%、10%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%。（2）染色程度評分：分為3個(gè)等級，分別為：1分、2分、3分，分別為淡黃色、棕黃色、棕褐色。（1）+（2）＜3分為陰性，（1）+（2）≥3分為陽性。按分?jǐn)?shù)將表達(dá)程度分4個(gè)等級：分別為0～2分、3～4分、5～8分、＞9分，對應(yīng)陰性（-）、低表達(dá)（+）、中表達(dá)（++）、高表達(dá)（+++），其中低、中、高表達(dá)均按陽性記。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，EGFR和PCNA在甲狀腺癌和癌旁組織表達(dá)比較采用χ2檢驗(yàn)，EGFR和PCNA的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌和癌旁組織中的表達(dá)EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中陽性產(chǎn)物主要存在于細(xì)胞核內(nèi)，均為黃色或棕黃色顆粒，見圖1。EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率分別為63/80（78.75%）和71/80（88.75%），在癌旁組織中的陽性表達(dá)率分別為28/80（35.00%）和31/80（38.75%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義（χ2= 13.412、9.753，P均＜0.05）。

2.2 EGFR和PCNA表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理因素的關(guān)系甲狀腺乳頭狀癌患者的年齡、性別、臨床分期和家族史等臨床病理因素與EGFR和PCNA在甲狀腺癌組織中的表達(dá)均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）；甲狀腺癌組織中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的EGFR和PCNA的陽性表達(dá)率均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）。見表1。

表1 EGFR和PCNA表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理因素的關(guān)系

2.3 甲狀腺乳頭狀癌組織中EGFR和PCNA表達(dá)的相關(guān)性分析在甲狀腺乳頭狀癌組織中，EGFR和 PCNA的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝1，P＜0.01），見表2。

表2 甲狀腺乳頭狀癌組織中EGFR和PCNA表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

甲狀腺癌是一種近年來發(fā)病率呈上升趨勢的常見內(nèi)分泌腫瘤。甲狀腺癌從病理學(xué)角度分為乳頭狀癌、濾泡狀癌、髓樣癌和未分化癌4個(gè)類型，乳頭狀癌占所有病理類型的80%，雖然其分化程度較好，但是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率卻高達(dá)72%［5］。人類腫瘤細(xì)胞系中EGFR廣泛表達(dá)，劉菊林等［6］研究發(fā)現(xiàn)在分化型甲狀腺癌中EGFR的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，可以作為甲狀腺腫瘤良惡性的鑒別或甲狀腺癌患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。葉宣光等［7］研究證實(shí)在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生中，EGFR異常表達(dá)升高，并可能促使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。PCNA又稱周期素，由Miyachi等通過免疫熒光的方法在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清中檢測到抗體的表達(dá)，因在增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中出現(xiàn)，所以稱為增殖細(xì)胞核抗原。其主要表現(xiàn)細(xì)胞的增殖狀態(tài)，因此在腫瘤細(xì)胞中PCNA表達(dá)的更明顯，尤其是在惡性腫瘤細(xì)胞中。探討PCNA在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)對于研究細(xì)胞的生長、損傷修復(fù)，評估惡性腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移能力都有重要的意義［8］。

本研究通過聯(lián)合檢測EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示EGFR和PCNA在癌組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示在甲狀腺良惡性病變的判斷中，二者均有可能作為鑒別診斷的有意義的指標(biāo)。EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)均明顯高于甲狀腺乳頭狀癌無轉(zhuǎn)移組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示甲狀腺乳頭狀癌容易早期向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能與二者的高表達(dá)相關(guān)。EGFR和PCNA與甲狀腺乳頭狀癌患者的年齡、性別、臨床分期、家族史等臨床病理因素均無關(guān)（P＞0.05），在甲狀腺乳頭狀癌組織中PCNA和EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)（r=1，P＜0.01），提示二者對甲狀腺乳頭狀癌可能具有關(guān)系密切的協(xié)同作用，共同對甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生及發(fā)展起促進(jìn)作用，EGFR和PCNA在甲狀腺乳頭狀癌組織中的共同高表達(dá)可能協(xié)同對癌細(xì)胞起作用。目前對于EGFR和PCNA的研究正在逐步深入，這將進(jìn)一步闡明甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，并對甲狀腺癌及其他惡性腫瘤的臨床診斷與治療具有潛在的價(jià)值。

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Expression of EGFR and PCNA in Papillary Thyroid Carcinoma Tissuesand Their Clinical Significances

LUYuyuan，WANGXin*
（DepartmentofSurgicalOncology，The FirstAffiliated Hospitalof JiamusiUniversity，Jiamusi 154007，China）

Objective：To detect the expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues and to explore their clinical significances.M ethods：From Sep 2010 to Dec 2015，80 cases of papillary thyroid carcinoma tissues diagnosed by pathology and 80 cases of corresponding para-cancerous tissueswere enrolled.The clinical data of patientswith thyroid carcinoma were collected.Immunohistochemicalmethod was used to detect the expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues and para-cancerous tissues.The correlations between clinical pathological characteristics and the expression of EGFR and PCNA were analyzed.Results：The positive expression rates of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissueswere 78.75% and 88.75%respectively，35.00%and 38.75%in para-cancerous tissues，there were statistically significant differences（P＜0.05）.The positive expression rates of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues with lymph node metastasis were significantly higher than those in papillary thyroid carcinoma tissueswithout lymph nodemetastasis（P＜0.05）.The difference of the expression of EGFR and PCNA had no relatiorship with the patients'age，gender，clinical stage and family history of disease（P＞0.05）.There was positive correlation between EGFR and PCNA expression in papillary thyroid carcinoma tissues（r＝1，P＜0.01）.Conclusion：EGFR and PCNA are likely asmeaningful indicator of differential diagnosis of benign and malignant thyroid lesions.The expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues are correlated with lymph nodemetastasis.The expression of EGFR and PCNA in papillary thyroid carcinoma tissues is positively correlated.

papillary thyroid carcinoma；EGFR；PCNA

R736.1

A

1008-2344（2017）03-0201-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.03.005

2016-11-23

（文敏編輯）

王新（1963—），男（漢），主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師.研究方向：腫瘤學(xué).E-mail：278389575@qq.com