西維來司鈉對大鼠腦出血保護(hù)作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

商明紅 何龍其

江蘇正大豐海制藥有限公司 江蘇省南京市 210046

西維來司鈉對大鼠腦出血保護(hù)作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

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江蘇正大豐海制藥有限公司 江蘇省南京市 210046

目的：通過實(shí)驗(yàn)的方法來研究和探討西維來司鈉對大鼠腦出血的保護(hù)作用。方法：隨機(jī)將Wistar大鼠分成五組，將此五組大鼠在動(dòng)物造模24h按標(biāo)準(zhǔn)對各組進(jìn)行神經(jīng)缺損評分，測定腦含水量并進(jìn)行病理學(xué)的觀察。結(jié)果：神經(jīng)病學(xué)評分方面以model組評分為最高，sham組評分為0但是也均高于高、中、低劑量組。腦含水量方面，model組腦含水量升高很明顯，明顯高于sham組和高、中劑量組，與低劑量組差別不大。病理形態(tài)方面，sham組沒有明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，model組和ICH組明顯出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論：西維來司鈉對大鼠腦組織有明顯的保護(hù)作用，可在一定程度上減輕大鼠腦損傷。

西維來司鈉；腦出血；大鼠

腦出血（ICH）是心腦血管病中最為高發(fā)的一種疾病，在腦卒中，腦出血卒中占較大的比例，且又以腦出血造成的死亡率最高，在心腦血管病死亡率中占據(jù)首位。病情的急劇惡化多是由于腦出血后繼發(fā)炎癥反應(yīng)、水腫、氧自由基損傷而導(dǎo)致的[1]。

西維來司鈉(Sivelestat sodium)是一種小分子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑，對彈性蛋白酶有良好的抑制性作用，主要應(yīng)用于治療急性肺損傷[2]。近年來，隨著對腦出血保護(hù)研究的深入，有研究資料認(rèn)為西維來司鈉對于腦出血具有一定的保護(hù)作用[3]，本文實(shí)驗(yàn)研究選用膠原酶誘導(dǎo)造成的腦出血的模型，以大鼠為研究對象，觀察西維來司鈉對ICH大鼠腦出血激發(fā)的炎癥浸潤、腦含水量以及病理性狀態(tài)變化的影響，以此來評價(jià)西維來司鈉是否能夠?qū)Υ笫竽X出血產(chǎn)生保護(hù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象與組別劃分

從南京醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心購進(jìn)30只實(shí)驗(yàn)用Wistar大鼠，全部為健康狀態(tài)合格的雄性鼠，個(gè)體質(zhì)量在220～250g之間。30只大鼠在術(shù)前12h內(nèi)禁食，只提供飲水。隨機(jī)將30只大鼠平均分為假手術(shù)組（sham組）、ICH+生理鹽水組（model組 ）、ICH+Sivelestat（30mg/ kg） 組、ICH+Sivelestat（80mg/kg） 組、ICH+Sivelestat（200mg/kg）組總共五組。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在建模30min前，將生理鹽水、Sivelestat按組別劑量經(jīng)大鼠尾部進(jìn)行靜脈緩慢注射給藥。每組6只大鼠進(jìn)行3d的適應(yīng)性喂養(yǎng)，然后開始建模。對大鼠進(jìn)行腹腔麻醉后，取俯臥位在大鼠腦立體定位儀上固定，保持大鼠的前囟與后囟處于同一個(gè)平面。消毒處理后，與頭皮正中做切口是前囟暴露出來，于前囟后1mm、中線向左旁開3mm的位置采取五號(hào)針頭鉆透大鼠顱骨，用微量注射器向腦組織中緩慢且勻速的注入按比例配置好的膠原酶，退針后將切口做縫合處理。假手術(shù)組注射同樣劑量的生理鹽水，其余操作與其它組別相同。術(shù)后將大鼠按組別在各自的籠中飼養(yǎng)，恢復(fù)正常飲食。

1.3 神經(jīng)病學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)

建模后24小時(shí)，對五組大鼠的神經(jīng)功能缺損情況進(jìn)行評級和評分，標(biāo)準(zhǔn)如下：0級，評分為0分，標(biāo)準(zhǔn)為不存在任何的癥狀表現(xiàn)；Ⅰ級，評分為1分，標(biāo)準(zhǔn)為提尾狀態(tài)下對策肢體呈現(xiàn)出屈曲內(nèi)收；Ⅱ級，評分為2分，標(biāo)準(zhǔn)為存在Ⅰ級癥狀且并行抗側(cè)方推力降低；Ⅲ級，評分為3分，標(biāo)準(zhǔn)為存在Ⅱ級癥狀且爬行時(shí)肢體向?qū)?cè)畫圈；Ⅳ級，評分為4分，標(biāo)準(zhǔn)為喪失意識(shí)，失去行走能力。

1.4 腦含水量（BWC）測定

建模后24小時(shí)，腹腔麻醉后將腦組織取出后進(jìn)行精密承重，全程操作要求在5min內(nèi)完成，然后對腦組織進(jìn)行烘干處理再稱重，以此為依據(jù)對腦含水量進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式為：BWC=（濕重—干重）/濕重×100%。

1.5 病理性觀察

建模24h后，從每組中隨機(jī)挑選3只大鼠，麻醉后開胸腔，將心包膜剝離后鉗夾主動(dòng)脈，在左心室匯總注入生理鹽水50ml后再緩慢注入多聚甲醛?？焖偃ゴ笫笱[的腦組織片，經(jīng)過處理后進(jìn)行病變區(qū)觀察，同時(shí)對腦組織病理改變狀態(tài)進(jìn)行觀察。

2 結(jié)果

2.1 大鼠腦出血神經(jīng)病學(xué)評分

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

神經(jīng)病學(xué)評分結(jié)果為：Sham組評分為0，Model組評分最高，治療組中低、中、高三個(gè)劑量組評分均較Sham組低，與模型組相比，低劑量組差異不大，中、高劑量組有明顯差異。

2.2 腦組織含水量測定結(jié)果

表1

表2

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

與Sham組比較，Model組大鼠腦組織含水量呈明顯增加。低劑量組與Model組比較，相差不大，中、高劑量組比Model組明顯降低。

2.3 病理形態(tài)觀察結(jié)果

病理觀察，Sham組大鼠腦組織內(nèi)并不存在出血病灶，細(xì)胞無明顯炎癥浸潤。Model組大鼠腦組織出血灶明顯，在血腫周圍腦組織疏松且呈高度水腫，液化壞死嚴(yán)重，有大量炎癥浸潤存在，神經(jīng)元遭受明顯破壞，核結(jié)構(gòu)呈模糊狀態(tài)。Sivelestat組腦組織病理改變比模型組明顯減輕，水腫、炎癥浸潤都有明顯的減輕，Sivelestat劑量越大，損傷改善效果越好，對劑量具有明顯的依賴性。

3 討論

西維來司鈉對于彈性蛋白酶具有選擇性的抑制作用，現(xiàn)今主要用于急性肺損傷的治療當(dāng)中[4]。本實(shí)驗(yàn)在動(dòng)物建模后進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)評分發(fā)現(xiàn)，腦出血對于大鼠的神經(jīng)功能具有明顯的損傷作用，神經(jīng)功能缺損是腦出血最直接也是最明顯的傷害。應(yīng)用Sivelestat后大鼠的神經(jīng)病學(xué)評分相較于假手術(shù)組明顯降低，說明Sivelestat可以劑量依賴性的對大鼠腦出血后神經(jīng)功能損傷有較好的改善和保護(hù)作用。腦出血后會(huì)迅速出現(xiàn)腦水腫，通常在腦出血二至三天后水腫達(dá)到峰值，會(huì)對腦神經(jīng)造成更嚴(yán)重的損傷，影響預(yù)后甚至造成更加嚴(yán)重不可挽回的后果。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Sivelestat能夠劑量依賴性的對腦出血大鼠腦組織的含水量產(chǎn)生控制和降低作用，減輕水腫程度，直接證明了Sivelestat對于腦出血大鼠的腦組織具有一定的保護(hù)作用。

[1]張春燕,李亞明.還元注射液對實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦組織顯微、超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國臨床康復(fù),2004,8(01):186.

[2]Aikra Shimakura.Yoshihisa Kamanaka,Yasuhiko Ikeda,eta. l Neutropil elastase inhibition reduces cerebral ische-mic damage in the middle cerebral artery occlusion[J].Brain Res,2000,858: 55.

[3]Cinquetti M,Micellli S, Voltolina C,et al.:The pattern of gastroesophageal reflux in asthmatic children. J Asthma 2002,39(02):135-142.

[4]Avidan B,Sonnenberg A,Schnell TG, et al.:Temporal associations between coughing or wheezing and acid reflux in asthmatics.Gut 2001,49(06):767-772.

商明紅（1984-），男，江蘇省南京市人。碩士研究生學(xué)歷，工程師，主要從事藥物研發(fā)工作。