中蜂蜂王人工授精效果分析

楊 娟 苗春輝 宋文菲 胡宗文 羅衛(wèi)庭 王艷輝 張學文

（云南省農業(yè)科學院蠶桑蜜蜂研究所，蒙自 661101）

中蜂蜂王人工授精效果分析

楊 娟 苗春輝 宋文菲 胡宗文 羅衛(wèi)庭 王艷輝 張學文

（云南省農業(yè)科學院蠶桑蜜蜂研究所，蒙自 661101）

中蜂蜂王人工授精是中蜂育種工作的重要部分。為了更好地進行中蜂的育種工作，本文就中蜂蜂王人工授精工作的相關因素進行了研究與探討。研究結果表明，蜂王的授精日齡、授精后蜂王的置放方法、放王的過程與時間及后期管理是中蜂蜂王人工授精成功的關鍵。

中蜂；人工授精；蜂王；授精效果

蜜蜂人工授精是近40年發(fā)展起來的一門新技術，為蜜蜂育種和蜜蜂遺傳研究提供了可靠、有效的實驗手段。人工授精（instrumental insemination）也稱器械授精，即通過器械裝置把1只或多只雄蜂的精液注射入蜂王輸卵管內使其受精[1]。

該項技術真正發(fā)展于1926~1947年，美國科學家R.L.沃森被世界公認為現(xiàn)代蜜蜂人工授精技術的創(chuàng)始人。而中國開展這項技術的研究始于1959年，20世紀80年代后，開始在中蜂上進行試驗，目前已達到國際先進水平，利用該技術取得了單雄授精、單雄多雌授精和自體授精的新突破，在育種及保種工作中占有重要的地位。

蜜蜂人工授精技術在西方蜜蜂育種工作應用比較廣泛，在中蜂育種方面應用較少，起步較晚。1983年廣州昆蟲所研究指出中蜂蜂王所需精液遠高于西蜂，對成熟雄蜂需求量大，并且即使人工受精后蜂王也會再次婚飛。

1984年姜妧姣指出通過小核群的組織、管理可以提高蜂王授精及誘入成功率[2]。1985年福建農學院研究表明參與授精的雄蜂約為10~14日齡，蜂王為5~7日齡最佳，授精量為6 μl[3]。

與西方蜜蜂蜂王人工授精相比，中蜂蜂王人工授精的難度較大，精液采集、授精后對蜂王的管理等都有一定難度，易導致授精失敗

本文就中蜂蜂王人工授精工作成功的主要因素進行研究與探討，為更好地進行中蜂的育種工作提供前期基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗蜂種為中華蜜蜂（Apis cerana cerana）；試驗蜂群共4群，每群初始群勢為0.5~1.5脾成蜂。

1.2 試驗時間與地點

2015年4月21日中蜂處女王出房，4月27日進行人工授精，5月1日先后將蜂王介紹入無王群中；地點為云南省紅河州蒙自市草壩鎮(zhèn)云南省農科院蠶蜂所內的中蜂試驗蜂場。

1.3 試驗器材

20ml一次性注射器2支，100 μl采精器（改裝過的進樣器）2支，500 ml 75%醫(yī)用酒精1瓶，長方形毛巾3條，自制捕雄蜂籠4~5個，滅菌培養(yǎng)皿1個，醫(yī)用酒精棉1包，滅菌鑷子1把，250 ml生理鹽水1~2瓶，醫(yī)用氧氣瓶1個（內部充滿二氧化碳），針式王籠4個。

1.4 試驗方法與步驟

首先，對試驗操作間及人工授精儀進行15 min的紫外滅菌消毒，滅菌的同時，捕捉巢脾邊緣及蜂箱邊緣的雄蜂（這些雄蜂接近性成熟，易于采集精液）；放置15 min后進入操作間，用75%醫(yī)用酒精浸濕毛巾，將儀器和操作臺擦拭干凈，用75%醫(yī)用酒精清洗所有器材；將生理鹽水與抗生素以30%的比例配比混勻，用混勻液清洗采精器4~5遍，然后注入整管的混勻液，管內不允許留有氣泡，將采精器擺放在儀器上。

開始采集精液，先將采精器吸入一小段空氣（即兩個空格，4 μl），取雄蜂，用大拇指、食指揉捏胸部進行刺激，另一食指從后面向前推，取成熟雄蜂的精液，不能吸到粘液，精液與混勻液間留有一點空隙，不能混合在一起[4]，中蜂性成熟雄蜂精液顏色較西蜂的略深些，且量少，與粘液緊密粘合在一起，取時要格外小心。待精液采集完，用75%醫(yī)用酒精擦拭背腹鉤，將儀器擺正調節(jié)好，將蜂王放入麻醉室內，用背腹鉤將其蜇針腔拉開，找到陰道口，用探針輔助著將裝有精液的注射管伸入進去，注射5 μl左右，然后將蜂王翅膀剪掉三分之一并放回扣王籠里。

第二天，將第一天人工授精的蜂王進行二次麻醉，每只持續(xù)40 s左右。

1.5 授精后的管理

第二次麻醉后，將蜂王放入準備好的裝有隔王柵的無王群內，用針式王籠將蜂王扣于巢蜜較集中的位置，待工蜂不圍王并接受后放出，定期對蜂群進行查看，確保無新王臺出現(xiàn)及不發(fā)生圍王現(xiàn)象。

2 結果與分析

2.1 蜂王存活情況

試驗的4只蜂王，在第二次麻醉后，在蜂場內進行扣王時，1只蘇醒并飛逃，不明原因死亡1只，剩下2只蜂王，存活率為50%。

2.2 蜂王產卵情況

表1 中蜂蜂王人工授精后產卵情況

2.3 蜂王存活時間

從2015年5月1日，將王放出，并產卵封蓋，到6月30日因群勢發(fā)展及其他因素，將王換掉。授精后蜂王存活了兩個月。

3 討論

動物的性行為是對一系列刺激做出具有種屬特性的反應，這種反應是通過前完成行為、主行為、后完成行為而動態(tài)表現(xiàn)出來的。這種順序出現(xiàn)的行為組分是自發(fā)的，是動物生存所必需的[1]。

蜜蜂人工授精是一種非自然交配行為，蜂王自然也就沒有達到完成自然交配所需的承前啟后的一系列行為要求。這種蜂王在生理狀態(tài)方面會存在一些與自然交尾蜂王不同的反應，因此，授精后的蜂王及蜂群管理就至關重要，尤其是中蜂。

本文在西蜂蜂王人工授精的基礎上進行的中蜂蜂王人工授精實驗，蜂王存活率及產卵情況與之前研究的西蜂相近[4]。研究結果顯示，適宜的蜂王授精日齡、授精后的蜂王關放方式及時間是中蜂蜂王人工授精成功的關鍵因素。

本文實驗結果為今后中蜂人工授精工作提供了一些參考經驗，中蜂蜂王人工授精的成功取決于以下四點：

一是蜂王授精的日齡。中蜂蜂王授精的日齡相對于西蜂要小一些，一般為5~6日齡為最佳[3]；

二是授精后蜂王的置放方法。用針式扣王籠將蜂王扣于蜜脾上，有利于扣王籠內工蜂飼喂蜂王；

三是放王過程及時間，中蜂蜂王要在第二次麻醉后，馬上用針式王籠扣于蜜脾上，于3日后放出；

四是每隔3日查看1次蜂群，在外界蜜粉源不足時，還要進行補助飼喂。同時，針對圍王情況要反復誘王，直至不圍上。總之，抓住以上幾點，基本可以保證中蜂蜂王人工授精的成功，保證中蜂育種工作順利開展。

非自然交配的蜂王仍有交尾沖動，如果管理不善，既會影響授精效果，又會出現(xiàn)授精王丟失或過早被替代的現(xiàn)象，必須十分重視授精后至開始產卵這段時間的管理。

有兩點細節(jié)還需研究與探討，即蜂王剪翅與否、剪翅的長短對中蜂蜂王人工授精工作的影響程度。本文中飛逃的蜂王就是由于翅膀留的稍長而跑掉，同時，在相對密閉的空間進行放王操作是必要的。

[1]陳國宏,王麗華.蜜蜂遺傳育種學[M].北京:中國農業(yè)出版社, 2010.

[2]姜妧姣.人工授精蜂王的飼養(yǎng)管理技術[J].中國蜂業(yè)，1984,(2):14.

[3]福建農學院養(yǎng)蜂系研究室.中華蜜蜂人工授精技術研究的進展[J].中國蜂業(yè),1985,（1）:8～9.

[4]宋文菲,楊娟,余玉生,等.蜂螨防治對西方蜜蜂人工授精蜂群的影響[J].中國蜂業(yè),2016,（1）:36～37.

國家蜂產業(yè)技術體系專項資助CARS-45-SYZ17)；云南省科技廳“云南蜂王漿高產蜂種應用示范項目”（2015BB010）

楊 娟(1989-)，女，研究實習員，主要從事蜜蜂生物學研究。

張學文(1965-)，男，副研究員，主要從事蜜蜂資源、飼養(yǎng)及授粉研究。