銀杏內(nèi)酯B對自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化及左心室肥厚的影響研究*

丁秀婷，劉 璠，劉建一，王 娟，劉淑萍

河北港口集團有限公司港口醫(yī)院(秦皇島 066002)

銀杏內(nèi)酯B對自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化及左心室肥厚的影響研究*

丁秀婷，劉 璠，劉建一，王 娟，劉淑萍

河北港口集團有限公司港口醫(yī)院(秦皇島 066002)

目的：探討銀杏內(nèi)酯B對高血壓大鼠(自發(fā)性)心肌纖維及左心室肥厚的影響。方法：選擇雄性SHR大鼠40只，隨機分為五組各8只，分別為大劑量組[銀杏內(nèi)酯B120mg/(kg·d)]、中劑量組[銀杏內(nèi)酯B90mg/(kg·d)]、小劑量組[銀杏內(nèi)酯B60mg/(kg·d)]、氯沙坦組[氯沙坦30mg/(kg·d)]及對照組(SHR大鼠模型)。前四組大鼠均每日灌胃給藥，1次/d；對照組用等量的CMCNa溶液代替。12周后，測量五組小鼠動脈血壓，并稱重后處死。計算左心室質(zhì)量與體質(zhì)量之比。染色后算出心肌膠原容積分數(shù)，并進行對比分析。結(jié)果：對照組治療后收縮壓明顯上升(P<0.05)；其他各組治療后與對照組比較，收縮壓均明顯降低(P<0.05)；用銀杏內(nèi)酯B的組中大劑量組收縮壓下降最明顯，但明顯低于氯沙坦組(P<0.05)；對照組、小劑量組、中劑量組、大劑量組 LVMI兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；氯沙坦組和其他各組比較，LVMI明顯降低(P<0.05)；結(jié)論： 銀杏內(nèi)酯B能改善大鼠高血壓導(dǎo)致的心肌重構(gòu)，并抑制SHR大鼠心肌纖維化。

高血壓左室重構(gòu)(Hypertensive left ventricular remodeling，LVR)的兩種主要表現(xiàn)為高血壓心肌纖維化(MF)和左心室肥厚(LVH)[1]。組織學(xué)方面表現(xiàn)為心肌纖維化和心肌細胞肥大，宏觀則表現(xiàn)心肌質(zhì)量增加和心室壁增厚。近年來，很多研究已證明，銀杏內(nèi)酯B可以改善心肌細胞的代謝，增加心臟血供，降低心血管疾病發(fā)生率，并對血管內(nèi)皮功能有保護作用[2]。目前而言，銀杏內(nèi)酯B是否對高血壓引起心肌重構(gòu)有影響的研究較少，所以，本文設(shè)計了銀杏內(nèi)酯B作用于自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的研究，分析其對高血壓大鼠MF和LVR的影響。

材料與方法

1 動物及材料

1.1 動物：選取自發(fā)性高血壓(SHR)大鼠40只，12周齡，均為雄性，體質(zhì)量208～250g，由河北大學(xué)動物實驗中心提供。

1.2 藥品：銀杏內(nèi)酯B由河北中醫(yī)研究所提供，相對分子質(zhì)量424.40，純度>95% 。氯沙坦批號：20150721。

1.3 儀器：動物血壓心率檢測儀(ML-125型)南京南分醫(yī)用儀器有限公司提供；計算機圖像分析系統(tǒng)(MD-20，德國生產(chǎn))；偏振光顯微鏡日本生產(chǎn)；透射電子顯微鏡(H-600，日本生產(chǎn))。

2 方 法

2.1 分組與用藥：將雄性SHR大鼠40只,隨機分為5組各8只,分別為大劑量組[銀杏內(nèi)酯B 120mg/(kg·d)]、中劑量組[銀杏內(nèi)酯B 90mg/(kg·d)]、小劑量組[銀杏內(nèi)酯B 60mg/(kg·d)]、氯沙坦組[氯沙坦30mg/(kg·d)]及對照組(SHR大鼠模型)。分別給予配制好的銀杏內(nèi)酯B溶液(溶劑：3%CMCNa溶液,濃度：0.5mg/ml)和氯沙坦溶液(以3%CMCNa溶液作為溶劑,濃度：1ml/100g)灌胃,對照組用等體積CMCNa溶液代替,1次/d。連續(xù)用藥12周。分別在給藥前和用藥12周后測量動脈血壓(用尾袖法),并稱重后處死。所有動物在同一動物房飼養(yǎng)，恒溫25℃左右，恒濕50%左右,人工光照明12h、暗12h。

2.2 觀察指標：① 血壓測量： 在大鼠安靜清醒的狀態(tài)下，使用尾袖法間接測量小鼠血壓,以收縮壓(SBP)作為觀察指標(單位：mmHg)。②心肌肥厚情況：用左心室質(zhì)量指數(shù)( LVMI)表示。 LVMI等于左心室肌質(zhì)量與體質(zhì)量之比(LVM/BW)。③ 組織學(xué)觀察： 大鼠麻醉用水合氯醛(10%)腹腔注射，并仰臥、手術(shù)臺上固定，腹部正中切口，將腹部主動脈暴露、放血至動脈死亡。開腹腔，選取左心室心肌組織(最好是心室中段橫截面取)，固定(用10%甲醛溶液)，包埋(用石蠟)、切片(厚度約6μm)。然后進行膠原特殊染色(用苦味酸-天狼星紅染色法)，使膠原呈紅色，心肌細胞則為黃色，計算機圖像分析，利用灰度調(diào)節(jié)來區(qū)分非膠原與膠原成分，并對左心室心肌切面(主要指外膜與內(nèi)膜、小動脈周圍等)膠原容積分數(shù)(CVF)進行測定。CVF等于心肌膠原面積與所測視野面積比。隨機取視野4個，算出CVF的平均值。

結(jié) 果

1 大鼠收縮壓情況 治療后對照組收縮壓明顯上升(P<0.05)；其他各組治療后與對照組比較，收縮壓均明顯降低(P<0.05)；用銀杏內(nèi)酯B的中大劑量組收縮壓下降最明顯，但明顯低于氯沙坦組(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠收縮壓情況分析±s)

注：與對照組比較，*P<0.05；與小劑量、中劑量組比較，#P<0.05；與大劑量組比較，▲P<0.05

2 大鼠給藥后左心室肥厚情況 對照組、小劑量組、中劑量組、大劑量組 LVMI兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；氯沙坦組和其他各組比較，LVMI明顯降低(P<0.05)(圖1)。

圖1 各組SHR大鼠治療后左心室質(zhì)量指數(shù)( LVMI)情況

3 各組大鼠給藥后左心室心肌膠原容積分數(shù) 其他各組左心室心肌CVF與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠給藥后左心室心肌膠原容積分數(shù)對比分析(分)

注：與對照組比較，*P<0.05

討 論

臨床研究證實[3-4]，高血壓能夠引起左心室肥厚(LVH)和心肌細胞的纖維化。其中LVH為心血管病常見的危險因子，其可使左心室厚度增加，使心肌間質(zhì)的結(jié)構(gòu)和成分也發(fā)生變化，導(dǎo)致間質(zhì)細胞增生和心肌細胞體積增大，膠原纖維的合成也明顯增加，最終導(dǎo)致心肌活動僵硬，左心室的順應(yīng)性降低，心肌收縮力下降[5-6]。同時心腔擴張，使心室舒張功能也明顯下降，出現(xiàn)心室充盈壓和左心房壓力均明顯升高等癥。心肌細胞纖維化也屬于高血壓病情發(fā)展的產(chǎn)物，其表現(xiàn)主要有膠原沉淀增加，不同類型的膠原纖維比例失去平衡，導(dǎo)致心肌僵硬、舒張充盈下降、順應(yīng)性降低等。王振宇[7]研究顯示，心肌小動脈外周的膠原纖維增多，導(dǎo)致心肌間質(zhì)纖維化，導(dǎo)致心臟收縮、舒張功能降低。所以，在高血壓的治療中，一個關(guān)鍵問題就是抑制心肌細胞的纖維化和左心室肥大。目前已成為治療效果判定的依據(jù)。

本研究中使用了SHR大鼠，很多研究證實，SHR大鼠在5周齡時血壓開始升高，在10周齡時就可致左心室肥厚、心肌纖維化。大量文獻顯示，SHR大鼠在服用ACEI、ARB后，使左心室重構(gòu)明顯減輕或逆轉(zhuǎn)。隨著中藥事業(yè)的發(fā)展，中藥及其提取物在心腦血管疾病的治療中越來越廣泛，很多中藥成分的作用及機理和西藥治療效果相當。銀杏內(nèi)酯B屬于二萜類化合物，是中藥銀杏葉中提取的一種銀杏內(nèi)酯成分，具有改善微循環(huán)、擴張血管、抗氧化、抗細胞凋亡、清除自由基等藥理作用。本研究結(jié)果顯示，對照組大鼠治療后血壓明顯升高，使用銀杏內(nèi)酯B的3個組中，治療后血壓均明顯降低，且隨著劑量增加，降壓效果增強。提示銀杏內(nèi)酯B降壓作用顯著，但降壓效果不及西藥氯沙坦。劉秋等[8-9]的研究中也證實了這點。研究結(jié)果顯示，銀杏內(nèi)酯B和氯沙坦對SHR大鼠心肌纖維化也有明顯的抑制作用，對心肌重構(gòu)的改善有積極作用。由于左心室肥厚還與心肌細胞凋亡、心肌細胞增殖與肥大等多種因素有關(guān)，因此在本研究中顯示，銀杏內(nèi)酯B對左心室質(zhì)量指數(shù)( LVMI)的影響不明顯。這和衛(wèi)培峰的研究一致。對左心室質(zhì)量指數(shù)的影響仍需大樣本多中心的進一步研究。

綜上所述，銀杏內(nèi)酯B能改善大鼠高血壓導(dǎo)致的心肌重構(gòu)，并抑制SHR大鼠心肌纖維化。對其作用機制有待研究。

[1] 陳 敏.益氣溫陽消痹湯對糖尿病合并冠心病患者CYSC水平的影響[J].陜西中醫(yī)，2015,36(10)：1370-1371.

[2] 劉熹昀，趙革新，鮑 利，等.銀杏內(nèi)酯B對ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化的影響[J].中國藥理學(xué)通報，2011,27(1)：84-85.

[3] 費利霞，陳 潔，田 剛.冠心病并糖代謝異常冠脈病變特點及其危險因素分析[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012,41(12)：1594-1596.

[4] 閆 琰，趙革新，陳北冬，等.銀杏內(nèi)酯B抑制血小板CD40Ligand 表達的分子機制研究[J].中國藥理學(xué)通報，2012,28(2)：254-254.

[5] Yan Y, Zhao GX,Chen BD,etal.Inhibitory effect of ginkgolide B on CD40 Ligand expression in collagen-induced platelet activation [J].Pharmacol Sci，2012,28(2)：245-254.

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[8] 劉 秋，許治良，金治全，等.銀杏二萜內(nèi)酯葡胺注射液通過下調(diào)Calpain 信號通路抑制腦缺血神經(jīng)細胞凋亡[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2015,46(6)：707-711.

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[10] 衛(wèi)培峰，王天寶，王 杰.銀杏內(nèi)酯B對自發(fā)性高血壓大鼠左室肥厚肌心肌纖維化的影響[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011,31(20)：1703-1705.

(收稿：2017-02-22)

*河北省秦皇島市科技支撐計劃項目(201401A214)

高血壓/藥物療法 心內(nèi)膜心肌纖維化癥 肥大，右心室 銀杏內(nèi)脂/治療應(yīng)用 大鼠

R392.5

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10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.002