滇重樓莖稈軟腐病病原鑒定

馬維思,楊 斌，嚴世武，王 馨，董志淵，李林玉，張新華，楊麗英*

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所，云南 昆明 650205；2.大理州農(nóng)業(yè)科學推廣研究院，云南 大理 671005)

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滇重樓莖稈軟腐病病原鑒定

馬維思1,楊 斌1，嚴世武1，王 馨1，董志淵1，李林玉1，張新華2，楊麗英1*

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所，云南 昆明 650205；2.大理州農(nóng)業(yè)科學推廣研究院，云南 大理 671005)

【目的】明確滇重樓莖稈軟腐病的病原，以期為該病的防治提供依據(jù)。【方法】通過田間調(diào)查采樣，初步掌握滇重樓莖稈軟腐病的發(fā)生規(guī)律，通過稀釋分離、柯赫氏法則驗證獲得病原菌，基于形態(tài)特征和16S rDNA、gyrB、rpoB基因序列特征對病原菌進行鑒定。【結果】從發(fā)病植株上分離出1株細菌，經(jīng)柯赫氏法則驗證為滇重樓莖稈軟腐病病原菌，基于形態(tài)和分子生物學特征將其鑒定為胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種Pectobacteriumcarotovorumsubsp.carotovorum。【結論】胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種P.carotovorumsubsp.carotovorum是滇重樓莖稈軟腐病的病原菌。

滇重樓；莖稈軟腐病；病原鑒定；胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種

【研究意義】滇重樓ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz是百合科重樓屬多年生草本植物，主要分布在中國的云南、四川、貴州以及緬甸北部等地[1]，是2015年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的2種重樓基源植物之一，主要用于疔瘡癰腫，咽喉腫痛，蛇蟲咬傷，跌撲傷痛，驚風抽搐[2]，是“云南白藥”、“宮血寧”、“季德勝蛇藥”等藥品的主要成分之一[3]。【前人研究進展】由于野生資源稀缺，近年來以云南省為主開展了大量有關滇重樓人工栽培技術的研究推廣，據(jù)李恒等2015年報道，云南境內(nèi)人工種植的滇重樓面積已達1333.33 hm2[4]。【本研究切入點】目前，一種未見報道的莖稈軟腐病在云南麗江、大理、楚雄、昆明、紅河等滇重樓主要產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)，局部地塊發(fā)病嚴重，造成生育期的滇重樓植株莖稈腐爛、植株倒伏，由于對該病還缺乏了解，尚無有效的防治方法，該病已對滇重樓種植形成較大威脅。【擬解決的關鍵問題】本研究對滇重樓莖稈軟腐病的發(fā)生特點進行調(diào)查，并對病原菌進行分離鑒定，以期為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

滇重樓莖稈軟腐病病株于2014年7月采自云南大理云龍，經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所楊斌副研究員鑒定為滇重樓ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz。

肉汁凍培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，葡萄糖10 g，瓊脂粉17 g，水1000 mL[5]。

主要試劑：Omega D3350細菌DNA小量提取試劑盒購自廣州飛揚生物工程有限公司；2 X PCR Master(Taq，染料)即用PCR擴增試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司；引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，分別是細菌16S rDNA通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)、1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)[6]，rpoB基因引物rpoBup(5′-GACATCGACCACYTSGGCAACC-3′)、rpoBlow(5′-ACGGCCTGACGYWKCATGTTCG-3′)，革蘭氏陰性菌gyrB基因通用引物Up-1G-(5′-YGCSGGCGGYAAGTTCGA-3′)、UP-2G-(5′-CCRTCGACGTCVGCRTCGGT-3′)[7]。

1.2 方法

1.2.1 田間病害調(diào)查 2013-2015年，對云南西部、西北部、中部、東南部等多個滇重樓種植基地進行調(diào)查，了解滇重樓莖稈軟腐病的發(fā)生情況和發(fā)病特點。

1.2.2 病原菌分離 采集剛發(fā)生軟腐病的新鮮滇重樓莖稈，自來水沖洗去除表面泥土，75 %酒精擦拭表面，接種針挑取少量內(nèi)部軟腐組織于1.5 mL滅菌離心管中，加1 mL無菌水混勻獲得病菌母液，用無菌水梯度稀釋5次，每次稀釋10倍，分別取每個濃度梯度的菌液50 μl，涂布于肉汁凍培養(yǎng)皿上，25 ℃培養(yǎng)，待長出單個菌落后，劃線轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)皿中。

1.2.3 致病性測定 2015年5月滇重樓出苗期，取16株長勢一致的7年生滇重樓，自來水沖洗去除表面泥土，在每株的莖稈和根狀莖的結合處用解剖針刺10次，深度約3 mm，取其中8株浸泡在分離到的細菌菌液中，15 min后取出種植于花盆中、澆透水(每盆2株，栽培土為經(jīng)121 ℃濕熱滅菌30 min的紅壤土)，另外8株作為對照用無菌水浸泡15 min，其他操作同細菌接種組。將栽好的全部植株置于蔭棚中，觀察發(fā)病情況。

1.2.4 病原菌鑒定 經(jīng)致病性測定確認病原細菌后，掃描電鏡觀察菌體特征。

利用肉汁凍培養(yǎng)液(不加瓊脂粉的肉汁凍培養(yǎng)基)，25 ℃、140 r/min搖床培養(yǎng)病原菌48 h，10 000 r/min離心10 min，取沉淀，根據(jù)Omega D3350細菌DNA小量提取試劑盒說明書進行DNA提取。用2 X PCR Master(Taq，染料)即用PCR擴增試劑盒，對病原菌的16S rDNA、gyrB和rpoB基因進行擴增。16S rDNA引物為27F、1492R，PCR擴增程序：94 ℃預變性3 min，94 ℃變性45 s，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，30個循環(huán)，72 ℃補平7 min，4 ℃終止反應[6]。除退火溫度不同外，gyrB、rpoB基因的PCR擴增程序同16S rDNA，gyrB基因引物為Up-1G-、UP-2G-，退火溫度為60 ℃，rpoB基因引物為rpoBup、rpoBlow，退火溫度為62 ℃[7]。PCR產(chǎn)物經(jīng)1 %瓊脂糖凝膠電泳檢測后送生工生物工程(上海)股份有限公司進行雙向測序。

測序結果在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對，選擇部分與待鑒定菌株序列同源性較高的序列，經(jīng)過CLASTALX 1.83序列比對，利用MEGA6.06軟件，采用NJ (鄰接法 )法分別構建16S rDNA、gyrB基因和rpoB基因的系統(tǒng)發(fā)育樹，系統(tǒng)樹各分支的置信度用bootstrap test (自舉檢驗法)檢驗，共進行1000次循環(huán)，根據(jù)Kimura-2參數(shù)計算各株遺傳距離值，基于系統(tǒng)發(fā)育樹對病原菌進行鑒定。

2 結果與分析

2.1 滇重樓莖稈軟腐病的特點及危害

滇重樓為草本宿根植物，一年出苗一次長出地上莖稈，發(fā)生莖稈軟腐病的都為5年生以上能開花繁殖的植株，發(fā)病時間為植株出苗至葉展平時期，即每年的4-7月(不同區(qū)域的滇重樓由于氣候差異導致出苗時間不同，即使同一地塊中的不同植株出苗時間也會有較大差異)，當葉展平、莖稈停止長高后發(fā)病很少。發(fā)病起始位置為近地面莖稈基部與根狀莖的結合處，首先在莖稈基部形成水浸狀病斑，后軟化，莖內(nèi)部開始腐爛，產(chǎn)生刺激性臭味，發(fā)病部位沿著維管束向上蔓延造成整個莖稈稀軟腐爛，葉片萎蔫、植株倒伏(圖1)。

滇重樓出苗時莖稈肉質(zhì)，含水量高、木質(zhì)化程度低，部分植株出苗時由于生長過快、吸水過多會導致莖基部脹裂，利于病原菌的侵入，所以田間發(fā)生軟腐病的多是莖稈較粗、生長旺盛的植株。該病通常不造成滇重樓地下根狀莖的完全壞死，但植株發(fā)病會使地上部分腐爛死亡，存活的根狀莖至少要1年后才能出苗，對植株生長造成較大影響。

經(jīng)過調(diào)查，在云南西部的大理云龍縣、西北部的麗江玉龍縣、中部的昆明嵩明縣、楚雄武定縣以及東南部的紅河元陽縣、文山馬關縣等地的多個滇重樓種植基地，都有莖稈軟腐病的發(fā)生，發(fā)病較重的地塊發(fā)病率可達10 %，同一塊地連續(xù)種植滇重樓的時間越長，發(fā)病越趨嚴重。目前滇重樓種子價格昂貴、供不應求，滇重樓植株一旦發(fā)生莖稈軟腐病，地上部分完全壞死，造成當年種子絕收，后續(xù)幾年種子產(chǎn)量下降，直接影響種植收益。

左：田間發(fā)病癥狀；右：室內(nèi)人工接種致病癥狀Left: Plant naturally infected in field; Right: Plant infected by artificial inoculation圖1 滇重樓莖稈軟腐病癥狀Fig.1 Typical stem soft rot symptoms of Paris polyphylla Smith var. yunnanensis

2.2 病原菌形態(tài)特征與致病性測定

發(fā)生軟腐病的滇重樓莖稈稀軟腐爛，具刺激性臭味，顯微鏡下觀察可見大量桿狀、快速運動的細菌。經(jīng)稀釋分離獲得一種編號為yunlong-xj的細菌，該菌在肉汁凍培養(yǎng)基上菌落圓形、光滑、乳白色、半透明，菌落邊緣光滑或呈波狀，菌落中央有略帶乳黃色的瘤狀突起，使整個菌落呈荷包蛋狀(圖2左)。掃描電鏡下觀察，菌體桿狀，大小1.37～2.02(平均1.68±0.23)μm×0.46～0.54(平均0.49±0.03)μm(圖2右)。

7年生滇重樓植株接種yunlong-xj后，第2天開始出現(xiàn)典型的軟腐病癥狀(圖1右)，從病組織中再次分離獲得菌落形態(tài)與yunlong-xj一致的細菌。而無菌水接種的對照組植株能夠正常生長，說明yunlong-xj為滇重樓軟腐病的病原菌。

2.3 病原菌分子鑒定

2.3.1 基于16S rDNA的病原菌鑒定 16S rDNA編碼原核生物核糖體小亞基 rRNA(16S rRNA)，是細菌分類學研究中最常用、最有用的“分子鐘”，幾乎可以對所有的細菌進行屬水平上的鑒定[8]，一般來講，在種分類等級上，如果兩個分類單位間的 16S rDNA 序列同源性大于97.5 %，可視為與模式菌株同種[9]。

菌株yunlong-xj經(jīng)PCR擴增、測序獲得748 bp16S rDNA片段，將其在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對，比對出的同源序列均屬胡蘿卜軟腐果膠桿菌(Pectobacteriumcarotovorum)，同源性全部高達99 %以上，大部分同源菌株為胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種(P.carotovorumsubsp.carotovorum)。將菌株yunlong-xj與從GenBank中獲取的同源性較高的部分序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結果如圖3，菌株yunlong-xj屬于P.carotovorumsubsp.carotovorum分支，與胡蘿卜軟腐果膠桿菌其他亞種以及Pectobacterium屬的其他種明顯區(qū)分，說明滇重樓軟腐病病原細菌yunlong-xj最可能是P.carotovorumsubsp.carotovorum。

左：肉汁凍培養(yǎng)基上的菌落特征；右：掃描電鏡下的菌體特征Left: Conlony characteristic of the pathogen in Nutrient Agar medium; Right: Morphological characteristics of the pathogenic bacteria under scanning electron microscope圖2 滇重樓軟腐病病原細菌形態(tài)特征Fig.2 Morphological characteristics of bacterium that causing stem soft rot of Paris polyphylla Smith var. yunnanensis

圖3 基于16S rDNA序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Neigbor-joining dendrogram depicting the estimated phylogenetic relationships based on 16S rDNA sequences

2.3.2 基于gyrB基因的病原菌鑒定gyrB基因是編碼細菌DNA解旋酶β亞單位的基因，進化速度比16S rRNA基因快，在區(qū)分和鑒定細菌近緣種方面，比非蛋白編碼基因16S rRNA 具有更高的分辨率，適用于近緣菌株的區(qū)別和鑒定[10]。

經(jīng)PCR擴增、測序獲得yunlong-xj 1034 bp的gyrB基因片段，經(jīng)BLAST比對，同源性大于90 %的菌株全部為Pectobacterium屬，同源性最高的菌株序列編號為KJ818399(P.carotovorumsubsp.carotovorum)，同源性為99.8 %。基于gyrB基因序列，將菌株yunlong-xj與從GenBank中獲取的同源性較高的部分序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結果如圖4，菌株yunlong-xj屬于P.carotovorumsubsp.carotovorum分支，能與P.carotovorum的其他亞種以及Pectobacterium屬的其他種區(qū)分，說明滇重樓軟腐病病原細菌yunlong-xj應為P.carotovorumsubsp.carotovorum，與基于16S rDNA的鑒定結果一致。

圖4 基于細菌gyrB序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Neigbor-joining dendrogram depicting the estimated phylogenetic relationships based on gyrB gene sequences

圖5 基于細菌rpoB序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Neigbor-joining dendrogram depicting the estimated phylogenetic relationships based on rpoB gene sequences

2.3.3 基于rpoB基因的病原菌鑒定rpoB基因是細菌RNA聚合酶β亞基的編碼基因，存在于所有細菌中，比16S rRNA基因的區(qū)分能力更強，因此常被用來進行細菌的系統(tǒng)進化分析與分類鑒定研究[11]。

經(jīng)PCR擴增、測序獲得yunlong-xj 666 bp的rpoB基因片段序列，將其在NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對，同源性大于95 %的序列全部為Pectobacterium屬，同源性最高的菌株序列編號為KJ818447(P.carotovorumsubsp.carotovorum)，與yunlong-xj僅有1 bp的差異。將菌株yunlong-xj與從GenBank中獲取的同源性較高的rpoB基因序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結果如圖5，菌株yunlong-xj屬于胡蘿卜軟腐果膠桿菌P.carotovorumsubsp.carotovorum分支，能與P.carotovorum的其他亞種以及Pectobacterium屬的其他種區(qū)分，該結果與基于16S rDNA、gyrB基因的鑒定結果一致。

根據(jù)病原菌的形態(tài)特征、16S rDNA、gyrB基因、rpoB基因序列，將滇重樓莖稈軟腐病的病原菌鑒定為胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種P.carotovorumsubsp.carotovorum。

3 討 論

胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種(Pectobacteriumcarotovorumsubsp.carotovorum)原名胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜亞種(Erwiniacarotovorumsubsp.carotovorum)[12]，是一種寄主廣泛的植物病原細菌，能造成胡蘿卜、土豆、大白菜、洋蔥、魔芋、人參等[13]多種作物的軟腐病，在世界范圍內(nèi)造成巨大經(jīng)濟損失[14-17]。該菌可以在植物表面附生或在土壤、水體里腐生，病原菌從植物的自然裂口、傷口等侵入后，通常潛伏在寄主植物的維管組織、薄壁組織及細胞間隙間，當環(huán)境條件適宜時大量繁殖，分泌果膠酶等胞外酶使寄主植物細胞壁和細胞間的連接分解，造成組織解體形成軟腐[14,18]。

滇重樓的人工種植主要集中在云南，開展規(guī)模化栽培僅有10多年的時間，經(jīng)調(diào)查，莖稈軟腐病已經(jīng)在云南主要的滇重樓種植區(qū)域出現(xiàn)，尚無有效的防治方法，其危害才初步顯現(xiàn)。田間觀察發(fā)現(xiàn)，部分生長過快的滇重樓植株莖稈基部常出現(xiàn)脹裂，植株容易倒伏，而發(fā)生莖稈軟腐的滇重樓植株通常莖稈較粗、生長較快，通常從莖稈基部開始腐爛，說明人工種植條件下，水肥過足造成的滇重樓生長過快，是誘發(fā)滇重樓莖稈軟腐病的重要原因，因此生產(chǎn)上要均衡施肥，適當控制氮肥的用量，培育壯苗。軟腐病很難依靠使用化學藥劑來防治，幾乎只能依靠田間衛(wèi)生管理和其他農(nóng)業(yè)防治方法來實現(xiàn)[19]，生產(chǎn)實踐中，應杜絕從軟腐病發(fā)生嚴重的基地調(diào)運種苗，加強田間衛(wèi)生管理，避免積水，發(fā)現(xiàn)病株應及時清除銷毀，并用生石灰對苗穴進行消毒，冬天植株倒苗后應移除遮陽網(wǎng)，利用陽光進行田間消毒。一些滇重樓采種圃，開始的幾年沒有軟腐病發(fā)生，經(jīng)過多年連作后軟腐病發(fā)生日趨嚴重，因此進行適當?shù)妮喿饕约胺N源更新對預防滇重樓莖稈軟腐病是必要的。由于P.carotovorumsubsp.carotovorum寄主廣泛，除了攜帶病原的滇重樓作為傳染源外，病原菌還可能來源于當?shù)胤N植的其他作物，因此要避免選擇發(fā)生過軟腐病的地塊種植滇重樓，栽種前要對種苗、土壤進行消毒。

4 結 論

本文首次報道滇重樓莖稈軟腐病，該病已在云南主要的滇重樓產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)，局部地塊造成嚴重危害，其病原菌是胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種(P.carotovorumsubsp.carotovorum)，該菌引起的大白菜、土豆等多種作物軟腐病已在世界范圍內(nèi)發(fā)生且難以防治，滇重樓是一種馴化時間較短的藥用植物，具有重要的藥用和經(jīng)濟價值，隨著種植面積的不斷增加，各種病害問題日漸凸顯，應加強相關研究。

致 謝：本研究在試驗過程中得到云南省農(nóng)業(yè)科學院藥用植物研究所季鵬章博士的幫助，在此表示感謝！

[1]李 恒.重樓屬植物[M].北京:科學出版社,1998:36.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:260.

[3]楊 斌,李紹平,王 馨,等.滇重樓的栽培與合理利用[J].中國野生植物資源,2008(6):70-73.

[4]李 恒,蘇 豹,張兆云,等.中國重樓資源現(xiàn)狀評價及其種植業(yè)的發(fā)展對策[J].西部林業(yè)科學,2015,44(3):1-7.

[5]方中達.植病研究方法(第三版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998:47.

[6]代曉航,魏 超,郭靈安.16SrDNA方法對新鮮番茄中細菌分布的調(diào)查[J].西南農(nóng)業(yè)學報, 2015,28(2): 797-800.

[7]Mavrodi D V, Peever T L, Mavrodi O V, et al. Diversity and evolution of the phenazine biosynthesis pathway[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2010, 76(3):866-879.

[8]Rajendhran J, Gunasekaran P. Microbial phylogeny and diversity: small subunit ribosomal RNA sequence analysis and beyond[J]. Microbiological Research, 2011, 166(2):99-110.

[9]Kolbert C P, Persing D H. Ribosomal DNA sequencing as a tool for identification of bacterial pathogens[J]. Current Opinion in Microbiology, 1999, 2(3):299-305.

[10]Yamamoto S, Harayama S. Phylogenetic analysis of Acinetobacter strains based on the nucleotide sequences of gyrB genes and on the amino acid sequences of their products[J]. International Journal of Systematic Bacteriology, 1996, 46(2):506-511.

[11]田 茜,張 美,胡 潔,等.植物病原細菌DNA條形碼檢測技術[J].植物檢疫,2014(0):1-7

[12]Hauben L, Moore E R B, Vauterinl L, et al. Phylogenetic Position of Phytopathogens within the Enterobacteriaceae[J]. Systematic & Applied Microbiology, 1998, 21(3): 384-397.

[13]商 雨,吳景芝,賀水蓮,等.馬蹄蓮軟腐病自然抗性機制研究[J].南方農(nóng)業(yè)學報,2015 ,46(12):2129-2134.

[14]Pérombelon M C M. Potato diseases caused by soft rot erwinias: an overview of pathogenesis[J]. Plant Pathology, 2002, 51(1): 1-12

[15]臧 威,崔崇士,孫劍秋,等.大白菜軟腐病的研究現(xiàn)狀[J].北方園藝,2005(3):59-60.

[16]修建華,姬廣海,王 敏,等.魔芋軟腐病菌分子鑒定與遺傳多樣性[J].微生物學報,2006(4):522-525.

[17]白容霖,潘麗梅,劉偉成.吉林省人參細菌性軟腐病病原[J].植物保護學報,2000(1):63-68.

[18]Perombelon M C, Kelman A. Ecology of the soft rot erwinias[J]. Annual Review of Phytopathology, 1980, 18(1):361-387.

[19]Agrios George N(沈崇堯主譯).植物病理學(第5版) [M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2009.

(責任編輯 王家銀)

Pathogen Identification ofParispolyphyllaSmith var.yunnanensisStem Soft Rot

MA Wei-si1, YANG Bin1, YAN Shi-wu1, WANG Xin1, DONG Zhi-yuan1, LI Lin-yu1,ZHANG Xin-hua2, YANG Li-ying1*

(1.Institute of Medicinal Plants, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Yunnan Kunming 650205, China; 2.Dali Institute of Agricultural Sciences and Extension, Yunnan Dali 671005, China)

【Objective】The objective of this study is to identify the pathogen of stem soft rot ofParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz, and to know how the disease occurred as well. 【Method】The pathogen was isolated from tissues of soft rot stem ofP.polyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz, tested and verified with Koch's postulates, and identified based on morphological and 16S rDNA,gyrB,rpoBgenes sequence. 【Result】the pathogen was identified asPectobacteriumcarotovorumsubsp.carotovorum. 【Conclusion】P.carotovorumsubsp.carotovorumis the pathogen of stem soft rot ofP.polyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.

ParispolyphyllaSmith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz; Stem soft rot; Pathogen Iidentification;Pectobacteriumcarotovorumsubsp.carotovorum

1001-4829(2017)7-1582-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.7.020

2015-08-05

云南省科技創(chuàng)新強省計劃項目“高山藥材優(yōu)良種源繁育、選育及野生藥材引種馴化集成創(chuàng)新研究與示范基地建設”(2014AE015)；云南省科技創(chuàng)新人才計劃(2015HB102)；云南省科技惠民計劃“濕熱區(qū)林下藥材生態(tài)復合種植及種子種苗繁育關鍵技術研究與示范”(2016RA057)

馬維思(1986-)，回族，男，云南文山人，助理研究員，碩士，主要從事藥用植物栽培與保護研究，E-mail：masilaoq@aliyun.com，Tel：0871-65033441，*為通訊作者：楊麗英，E-mail:daliyangly@163.com。

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