自擬消氮顆粒對腎衰竭大鼠腎組織影響的病理學分析

董淑榮，宋艷麗，王英萍，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江

基礎醫學

自擬消氮顆粒對腎衰竭大鼠腎組織影響的病理學分析

董淑榮，宋艷麗，王英萍，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江＊

目的通過病理形態學分析，探討自擬消氮顆粒對腎衰竭大鼠腎組織的影響。方法用腺嘌呤（200mg/ kg）30 d灌胃法，誘導制備大鼠慢性腎衰竭模型。將模型大鼠隨機分為模型組，消氮顆粒高、低劑量（3．956 g/kg、0．989 g/kg）組和陽性對照組（給予尿毒清顆粒2．088 g/kg）每組10只；正常空白組（10只）和模型組給予相同劑量的純化水，灌胃消氮顆粒治療28 d，觀察其對各組大鼠24 h尿液常規分析、大鼠腎體比及腎衰竭大鼠模型腎病理形態的影響。結果與模型組比較陽性對照組，消氮顆粒高和低劑量組均能改善腎衰竭大鼠尿常規指標，消氮顆粒高、低劑量組與模型組比較，大鼠腎體比差別有統計學意義且非常顯著（P＜0．01），腎組織的病理形態有顯著改善。結論

消氮顆粒對慢性腎衰竭可有明顯的治療作用。

消氮顆粒；慢性腎衰竭；尿常規檢驗；腎體比；病理形態學活檢

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是由多種因素導致的慢性進行性腎實質性損害，是一種進行性惡化且難于治療的臨床綜合征，其病死率較高。雖然目前的醫療水平很高，但因經濟狀況、腎源不足等多種原因，大部分患者仍然無法接受腎移植及維持性透析的治療［1］。目前非透析療法依舊是一種最普遍的治療方式。消氮顆粒是原濟南軍區總醫院藥劑科與腎內科專家根據多年臨床治療腎衰竭的經驗進行研究，以中醫基礎理論為依據，以現代藥理學為指導，由大黃、丹參、附子等藥物經一定的工藝提取制成的復方制劑。該研究以腺嘌呤制作的CRF大鼠模型［2，3］為對象，觀察消氮顆粒對CRF的影響，為臨床應用提供理論指導和依據。

1 資料與方法

1.1 實驗動物Wistar大鼠60只，SPF級，雄性，體質量（200±20）g［購自山東大學實驗動物中心，動物使用許可證號：SCXK（魯）20090001］。飼養條件：原濟南軍區總醫院實驗動物中心清潔級動物房內，全價營養顆粒飼料（購自山東大學實驗動物中心）飼養，自由飲水。

1.2 藥品腺嘌呤（規格：每瓶100 g，批號：AA13，上海笛柏化學品技術有限公司，使用前加純化水配成2．5%的混懸液）。無糖型尿毒清顆粒（規格：每袋5 g，批號：20111018，內蒙古康臣藥業有限責任公司）。消氮顆粒（規格：每袋6 g，批號：20110612，原濟南軍區總醫院制劑室自制）。

1.3 儀器B600A型醫用低速離心機（河北省安新縣白洋離心機廠產品）；URISYS－2400型全自動尿液分析儀（德國西門子產品）；C－3020 ZOOM型光學顯微鏡（日本奧林巴斯產品）。

1.4 方法

1.4.1 造模及分組方法［4］購入Wistar大鼠60只，適應性喂養1w，隨機選取10只大鼠作為正常空白對照組，按體質量200mg/kg·d純化水灌胃，其他大鼠按體質量200mg/kg·d腺嘌呤灌胃。將造模成功的大鼠隨機分為模型組、陽性對照組（無糖型尿毒清顆粒），消氮顆粒高、低劑量組，每組10只大鼠。剩余10只大鼠留作補備。

1.4.2 給藥方法于末次造模24 h后開始，正常對照組與模型組按體質量灌胃純化水10m l/kg·d，陽性對照組與消氮顆粒高、低劑量組則根據人鼠用藥劑量換算公式［5］計算給藥劑量為3．956 g/kg·d、0．989 g／kg·d，其中陽性對照組給予無糖型尿毒清顆粒2．088 g/kg·d。使用前加純化水配制成適宜濃度的溶液進行灌胃，給藥1次/d，共28 d。

1.4.3 觀察指標第29天禁食不禁水，大鼠置于代謝籠內，在糞尿分離器的側面連接集尿容器，收集24 h尿液。將收集的尿液進行分離，取上清液進行常規指標檢測。第30天處死，取下腎，剔除筋膜和脂肪，擠盡血液，用吸水紙吸干腎表面的液體，稱重并計算大鼠腎體比系數：［臟器系數（%）=臟器重量（g）/體重（g）×100%］。取出的腎部分組織放入生理鹽水中清洗，固定于10%的中性甲醛溶液中，常規脫水包埋，切片，常規脫蠟至水，HE染色，進行組織病理形態學觀察。

2 結果

2.1 尿常規檢測各組大鼠尿液清晰度均為清晰，尿膽原（URO）均為3．2μmol/L，葡萄糖（GLU）、膽紅素（BIL）、酮體（KET）及亞硝酸鹽（NIT）均為陰性，各組大鼠之間無差別。其中正常對照組大鼠尿液蛋白質（PRO）、潛血（BLD）及中性粒細胞（LEU）均為陰性；與正常對照組比較，模型組大鼠尿液PRO為陽性（平均2+），BLD為陽性（平均2+），LEU為陽性（平均2+），且模型組大鼠尿液比重（SG）降低，提示可能出現腎損傷。給藥后的陽性對照組和消氮顆粒高、低劑量組大鼠尿液PRO均為陰性，但仍有個別大鼠有微量BLD，LEU為陽性（平均1+）。結果見表1。

表1 24小時尿液常規檢測

2.2 各組大鼠腎體比計算各組大鼠腎體比。腺嘌呤可造成大鼠腎功能損傷，致使腎體比增大。模型組與正常對照組比較，大鼠腎體比差別有統計學意義且非常顯著（P＜0．01），說明造模可產生明顯的腎損傷；陽性對照組和消氮顆粒高、低劑量組與模型組比較，大鼠腎體比差別有統計學意義且非常顯著（P＜0．01），說明陽性對照組和消氮顆粒各組在用藥后腎的損傷程度有所緩解；消氮顆粒高、低劑量組與陽性對照組比較，大鼠腎體比差別無統計學意義（P＞0．05）。結果見表2。

2.3 腎病理形態學觀察結果對腎組織進行病理學形態觀察，結果見表3。

正常對照組腎大小正常、顏色暗紅，組織學未見顯著改變，HE染色觀察發現系膜區正常，系膜基質正常，小管間質無炎細胞浸潤、無纖維化，腎小管正常，無萎縮，腎血管無異常，腎小球無變化。見圖1、2。

表2 各組大鼠腎體比水平對比（x±s，n=10）

模型組腎體積明顯縮小，顏色蒼白。HE染色與正常對照組比較，系膜增寬，系膜基質明顯增多，腎小管萎縮，小管間質可見大量炎細胞浸潤，血管壁增厚，即已造成慢性腎衰。見圖3、4。

陽性對照組與正常對照組比較，系膜區增寬，系膜細胞增多，腎組織有所改善。與模型組比較，小管間質明顯改善，炎細胞減少，腎小管輕度萎縮，腎小球無太大變化，血管壁未見明顯改善。見圖5、6。

表3 消氮顆粒對CRF的大鼠腎臟組織的影響

高劑量組與正常對照組比較，系膜區輕度增寬，系膜基質增多不明顯，系膜細胞微有增多；與模型組比較，小管間質明顯改善，炎細胞減少，腎小管輕度萎縮，腎小球無太大變化，血管壁明顯改善。見圖7、8。

圖1 正常對照組（HE，100×）

圖2 正常對照組（HE，100×）

圖3 模型組（HE，100×）

圖4 模型組（HE，100×）

圖5 陽性對照組（HE，100×）

圖6 陽性對照組（HE，100×）

圖7 高劑量組（HE，100×）

圖8 高劑量組（HE，100×）

低劑量組與正常對照組比較，系膜區中度增寬，系膜基質中度增多，系膜細胞中度增多；與模型組比較，小管間質有所改善，有炎細胞浸潤，血管壁變薄，但不如高劑量組顯著。見圖9、10。

圖9 低劑量組（HE，100×）

圖10 低劑量組（HE，100×）

3 討論

消氮顆粒為筆者所在醫院制劑，含有大黃、丹參、制附子和活性炭等7味藥，具有驅邪扶正、攻補兼施之效。其中主要藥物大黃味苦，性寒，有通腑泄濁，攻下瀉毒導滯，推陳致新的功效。現代藥理學研究表明，丹參提取物具有修復血管的損傷，減少細胞的凋亡和改善循環的作用。對損傷的腎組織功能，能夠有效地改善［6］。附子味辛、甘，性熱，具有氣雄行散，可升可降，走而不守；常用于腎陽不足，或陽虛水泛，尿少水腫。藥用活性炭比表面積大，內孔隙結構發達，能有效地吸附消化道內有害物質、氣體和細菌，促進毒素排除。通過腎組織病理學分析，消氮顆粒對于CRF模型大鼠，能夠減少炎細胞浸潤，抑制系膜細胞增殖，對系膜區、系膜基質及小管間質造成的損傷有顯著的修復和保護作用，可有效地延緩慢性腎功能衰竭。

［1］仲思，張東成，蘇彥，等.腎康注射液治療慢性腎衰竭的臨床分析［J］.中國現代藥物應用，2016，10（1）：174-175.

［2］Yokozawa T，Zheng PD，Oura H，et al.Animal model of adenineinduced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44（3）：230-234.

［3］杜卉蓮，傅曉晴.慢性腎衰動物的模型制備及臨床應用［J］.中醫研究，2005，18（12）：53-57.

［4］梁靚靚，史業東，陳蘇寧.扶正排毒湯對腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭模型的影響［J］.天津中醫藥，2010，27（5）：409-410.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.第2版.北京：人民衛生出版社，2006：31.

［6］雷偉，周江橋，王玲瓏，等.丹參與CSA對移植腎缺血再灌注損傷防治作用的對比研究［J］.臨床外科雜志，2005，13（6）：366-368.

［2017－03－18收稿，2017－04－16修回］

［本文編輯：韓仲琪］

Effect of self-developed Xiaodan granules on kidney tissue of kidney failure rats：pathological analysis

DONG Shu－rong①，SONG Yan－li，WANG Ying－ping，et al．
①Dept．of Pharmacy，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

Objective To investigate the effects of self－developed Xiaodan granules on renal tissue in rat model of kidney failure by pathological morphology analysis．M ethods The chronic renal failure rat model was induced by adenine（200mg/kg）for 30d irrigation．The model rats were randomly divided into model group，as well group of Xiandan granules high and low dose（3．96g/kg，0．99g/kg），and the positive control group（given urine poison granules 2．09g/kg），n=10 foreach．The normal group（n=10）and model groups were given the same dosage of purified water，Xiaodan granules used in irrigation treatment for 28d，the effects of Xiandan granules on the pathology of kidney，including urine routine exam．，kidney body ratio and kidney failure status in the rat model were observed．Results Compared with the model group，the positive control group，the high and low dose group of Xiandan granules could improve the urine routine exam．index of rat kidney failure，the high and low dose of Xiandan granules which had statistically significant ratio compared with the model group，and the renal body ratio in rats got very significantly improved（P＜0．01）．Wha's more among above groups pathological morphology had significant change．Conclusion Xiandan granules could have obvious therapeutic effect on chronic renal failure．

Xiaodan granules；Chronic renal failure；Urine routines examination；Renal volume ratio；Pathology biopsy

10．14172/j．issn1671－4008．2017．08．024

250031山東濟南，原濟南軍區總醫院藥劑科（董淑榮，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江）；250355山東濟南，山東中醫藥大學藥學院（宋艷麗，王英萍）

徐建江，Email：xjj8605＠163．com

R692．5：R－33

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