不同產(chǎn)地何首烏及制何首烏藥材活性成分含量與性狀分析

王 焱，侯連莉

（1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663；2.珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司中山分公司，廣東 珠海 528467）

不同產(chǎn)地何首烏及制何首烏藥材活性成分含量與性狀分析

王 焱1，侯連莉2

（1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663；2.珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司中山分公司，廣東 珠海 528467）

目的 以生、制藥材為切入點(diǎn)，對(duì)不同產(chǎn)地何首烏及制何首烏藥材活性成分含量進(jìn)行比較，并分析藥材外觀性狀與活性成分含量的相關(guān)性。方法 采用前期已經(jīng)建立的高效液相色譜檢測(cè)方法，以4批不同產(chǎn)地、性狀的生、制何首烏藥材為樣品，同時(shí)測(cè)定二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚3種活性成分，并觀察記錄藥材外觀性狀與活性成分含量的相關(guān)性。結(jié)果生何首烏與制何首烏中二苯乙烯苷及蒽醌類成分含量明顯不同。生何首烏中的二苯乙烯苷含量明顯高于制何首烏，但是游離蒽醌類成分難以檢測(cè)出，而制何首烏中可檢出大黃素及大黃素甲醚等游離蒽醌。制何首烏性狀特征與活性成分含量具有相關(guān)性。結(jié)論 制何首烏外觀顏色淺，絲絡(luò)明顯，其中含有的二苯乙烯苷較多，但大黃素含量較低；若顏色深，絲絡(luò)不明顯，則二苯乙烯苷含量較低，游離蒽醌類成分含量較高。

生何首烏；制何首烏；藥材；質(zhì)量評(píng)價(jià)；二苯乙烯苷；大黃素

自古以來(lái)，何首烏被認(rèn)為具有延年益壽、延緩衰老之功效，是著名的滋補(bǔ)中藥。現(xiàn)代研究表明，何首烏主要活性成分有蒽醌類、二苯乙烯類、磷脂類、黃酮類和酚類，可用于降血脂、抗衰老、提高免疫力、益智等[1]。為了尋找質(zhì)量?jī)?yōu)良的何首烏藥材，前期研究已經(jīng)建立了高效液相色譜法對(duì)何首烏藥材中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚3種活性成分同時(shí)進(jìn)行測(cè)定[2]。本研究在前期已經(jīng)建立的高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)方法基礎(chǔ)上，以4批不同產(chǎn)地、性狀的生、制何首烏藥材為樣品，通過(guò)測(cè)定二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚3種活性成分，對(duì)不同產(chǎn)地何首烏及制何首烏藥材活性成分含量進(jìn)行比較，并建立藥材外觀性狀與活性成分含量的相關(guān)性，旨在為何首烏藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)、炮制工藝、綜合利用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Waters 600E高效液相色譜系統(tǒng)（手動(dòng)進(jìn)樣器、Waters 2487紫外檢測(cè)器、Empower色譜工作站），美國(guó)Waters公司；JA5003A分析天平（可準(zhǔn)確稱量到1 mg），上海精密科學(xué)儀器有限公司；AX205分析天平（可準(zhǔn)確稱量到0.01 mg），瑞士METTLER TOLEDO公司；XW-80A微型旋渦混合儀，上海滬西分析儀器廠；KQ-250E型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 藥材

何首烏及制何首烏藥材（購(gòu)于天津、遼寧、內(nèi)蒙古、山西），制何首烏樣品經(jīng)鑒定均為蓼科植物何首烏Polygonum nultiflorum Thunb.干燥塊根的炮制品。

標(biāo)準(zhǔn)品：二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚，純度均＞98%。

1.3 試劑

乙腈、甲醇為色譜純（美國(guó)Fisher公司），水為超純水（Millipore超純水凈化系統(tǒng)）。

2 測(cè)定方法[2]

2.1 方法學(xué)考察

采用高效液相色譜法測(cè)定何首烏中主要有效成分二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、精密度和加樣回收率。

2.2 供試品溶液制備

取不同產(chǎn)地何首烏及制何首烏藥材各0.1 g，標(biāo)明編號(hào)，置10 m l容量瓶中，精密加入色譜甲醇10 m l，置于超聲儀中超聲3小時(shí)后，冷卻至室溫，取1 m l置于離心管中，以14 000 rpm速率離心10min，取上清液用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，即得。精密吸取上述各種供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定。

2.3 色譜條件

色譜柱Symmetry ShieldTMC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸梯度洗脫（見(jiàn)表1）；流速：1.0m l/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：35℃，進(jìn)樣量為10μl。理論板數(shù)（n）按二苯乙烯苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 000。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫

3 樣品測(cè)定

3.1 生何首烏樣品含量測(cè)定

按上述測(cè)定方法，測(cè)定4種不同產(chǎn)地生何首烏藥材中活性成分的含量，細(xì)粉編號(hào)：生NO.1、生NO.2、生NO.3、生NO.4，結(jié)果見(jiàn)圖1、表2。

3.2 制何首烏樣品含量測(cè)定

先對(duì)4種不同產(chǎn)地制何首烏藥材進(jìn)行性狀比較，結(jié)果見(jiàn)表3。再按上述測(cè)定方法，測(cè)定4種不同產(chǎn)地制何首烏藥材中活性成分的含量，細(xì)粉編號(hào)：制NO.1、制NO.2、制NO.3、制NO.4，結(jié)果見(jiàn)圖2，表3、4。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的制何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分含量各不相同。

4 結(jié)論

（1）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，生何首烏中二苯乙烯苷及蒽醌類成分與制何首烏明顯不同。生何首烏中的二苯乙烯苷含量明顯高于制何首烏，但游離蒽醌類成分難以檢測(cè)出，而制何首烏中可檢出大黃素及大黃素甲醚等游離蒽醌。這可能是因?yàn)楹问诪醯呐谥贫嗖捎煤诙怪逯蠓ǎ诩逯筮^(guò)程中二苯乙烯苷在高溫下降解而致使含量降低，在生何首烏中以結(jié)合形式存在的蒽醌則會(huì)轉(zhuǎn)化為游離蒽醌，從而在制何首烏中得以檢出。有研究也比較了何首烏生品和炮制品成分的含量變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)炮制后降低了二苯乙烯苷的含量，升高了大黃素和大黃素甲醚的含量[3]；隨炮制時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)二苯乙烯苷含量也有影響[4]。

圖1 生何首烏HPLC譜圖（1.二苯乙烯苷）

表2 4種不同產(chǎn)地生何首烏藥材含量測(cè)定

圖2 制何首烏HPLC譜圖（1.二苯乙烯苷；2.大黃素；3.大黃素甲醚）

表3 4種不同產(chǎn)地制何首烏藥材性狀比較結(jié)果

表4 4種不同產(chǎn)地制何首烏藥材含量測(cè)定

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，制NO.1樣品（色淺，片狀）大黃素含量明顯少于其他樣品；制NO.2樣品（色深，塊狀）大黃素偏高；制NO.3樣品二苯乙烯苷含量偏高；制NO.4樣品（烏黑色，塊狀）二苯乙烯苷含量偏低，但其他成分都偏高。因此，制何首烏外觀性狀與其所含的活性成分含量有一定相關(guān)性：若制何首烏外觀顏色淺，絲絡(luò)明顯，其中含有的二苯乙烯苷較高，但大黃素含量較低；若制何首烏外觀顏色深，絲絡(luò)不明顯，則二苯乙烯苷含量較低且游離蒽醌類含量較高。

（3）本研究以生、制藥材為切入點(diǎn)，通過(guò)對(duì)生、制何首烏藥材中多種活性成分含量進(jìn)行比較，并分析藥材外觀性狀與活性成分含量的相關(guān)性，為何首烏藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)；同時(shí)，也提示我們需加強(qiáng)何首烏藥材炮制工藝的控制，為何首烏藥材的合理使用建立標(biāo)準(zhǔn)。

[1]龔彥勝，張亞囡，黃偉，等.與功效、毒性相關(guān)的何首烏化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物警戒，2012，9（8）：472-475.

[2]王焱.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定制何首烏中多種活性成分[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2016，12（167）：45-47.

[3]陳慶堂，卓麗紅，徐文，等.何首烏炮制過(guò)程中5種化學(xué)成分的含量變化[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，8（5）：66-71.

[4]劉世琪，王磊，越亮.高壓炮制對(duì)何首烏中有效成分含量的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）：37-40.

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