胃腺癌組織趨化因子受體7和血管內皮生長因子-D的表達及臨床意義

沈利娟 王學紅 馬臻奇 馬雪芹

(青海大學附屬醫院消化科，青海 西寧 810001)

·腫瘤·

胃腺癌組織趨化因子受體7和血管內皮生長因子-D的表達及臨床意義

沈利娟 王學紅 馬臻奇 馬雪芹

(青海大學附屬醫院消化科，青海 西寧 810001)

目的檢測胃腺癌術后組織中趨化因子受體(CCR)7和血管內皮生長因子(VEGF)-D的表達，分析二者的臨床意義及相關性。方法確診為胃腺癌患者53例為觀察組，距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織29例為對照組，均留取術后蠟塊組織，應用免疫組化SP法檢測兩組CCR7和VEGF-D表達。結果觀察組CCR7和VEGF-D表達陽性率明顯高于對照組，觀察組中CCR7和VEGF-D表達陽性率均與腫瘤脈管累犯和淋巴結轉移密切相關。觀察組CCR7表達與腫瘤增殖指數密切相關。相關分析顯示觀察組CCR7和VEGF-D呈正相關。結論CCR7和VEGF-D高表達對胃腺癌形成和進展有一定促進作用，CCR7對腫瘤的作用可能與VEGF-D介導的淋巴管生長因子生成有一定關聯。

胃腺癌；趨化因子受體7；血管內皮生長因子-D；免疫組化

胃腺癌臨床進展過程較快，其與淋巴道播散密切相關〔1〕，目前認為血管內皮生長因子(VEGF)-D是淋巴管生成的促進因子，可以通過與受體VEGFR3相結合，促進腫瘤間質中D2-40陽性的淋巴管新生〔2，3〕。趨化因子受體(CCR)7是表達于免疫細胞、內皮細胞細胞膜上的蛋白，其配體分布于外周免疫器官或組織，目前認為CCR7高表達與腫瘤進展有關，尤其是對轉移的促進作用明顯〔4〕，研究認為CCR7可能對脈管生成有一定作用〔5〕。本研究關注胃腺癌術后組織中CCR7和VEGF-D的表達，分析二者表達特征、臨床病理意義及相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2013年1月至2015年12月青海大學附屬醫院確診為胃腺癌的患者53例為觀察組，留取術后石蠟包埋的組織，其中男29例，女24例，年齡42～83(平均60.2)歲。納入均符合世界衛生組織(WHO)中的診斷標準及分型(病理醫師閱片復診)。淋巴結轉移19例，無淋巴結轉移34例。上述患者距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織29例為對照組，其中男15例，女14例，年齡45～78(平均58.7)歲。兩組一般臨床資料無明顯差異，具有可比性。

1.2CCR7和VEGF-D蛋白的檢測方法 術后留取的組織均應用40%的甲醛溶液固定24 h以上，由病理醫師常規取材，脫水后進行石蠟包埋，切片。應用免疫組化方法檢測CCR7和VEGF-D的表達，嚴格按實驗步驟進行操作，采用二胺基聯苯胺(DAB)顯色，做好質量控制工作，減少人為誤差。

1.3CCR7和VEGF-D表達的判讀 CCR7和VEGF-D陽性表達的部位均是細胞質和(或)細胞膜，以呈現淡黃到棕黃色顆粒為陽性。觀察組選擇腫瘤細胞的分布密集區，對照組選擇黏膜上皮的分布區進行觀察，先在低倍鏡下選擇染色明顯且典型的區域，然后在400倍下選擇3個視野，計算陽性率，取平均值，以陽性率<10%定為陰性，≥10%定為陽性。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組CCR7和VEGF-D陽性率比較 觀察組CCR7和VEGF-D陽性表達率明顯高于對照組(P<0.001)。見表1。

表1 兩組CCR7和VEGF-D表達陽性率比較〔n(%)〕

2.2CCR7和VEGF-D在觀察組不同臨床病理特征中的表達差異 觀察組CCR7和VEGF-D表達陽性率與腫瘤脈管累犯、淋巴結轉移密切相關；CCR7陽性表達與腫瘤增殖指數密切相關(P<0.05)。見表2。

表2 CCR7和VEGF-D在觀察組不同臨床病理特征中的陽性表達比較〔n(%)〕

2.3觀察組CCR7和VEGF-D相關性 CCR7和VEGF-D呈正相關(r=0.42，P=0.042 5)。

3 討 論

胃腺癌常見于中老年人，極少在30歲以下發病，但30歲以后呈迅速增長的趨勢。胃腺癌形成時細胞的分化程度低，細胞異型大，轉移率高〔6，7〕。研究顯示胃腺癌間質可見明顯的小淋巴管新生，這對腫瘤淋巴道播散提供了一個直接途徑〔8〕。VEGF-D已經確定為VEGFs家族中的淋巴內皮細胞的生長因子之一，與VEGF-C的結構非常相似，其位于染色體XP22.31，全長50 kD，由7個外顯子和6個內含子組成。VEGF-D對腫瘤間質中D2-40、淋巴管內皮透明質酸受體(LYVE)-1陽性的淋巴管生成有一定促進作用〔9，10〕。CCR7含有氨基酸378個，其基因定位于17q12-q21.2，研究顯示CCR7可以有效促進上皮細胞遷移，同時能有效促進血管內皮細胞及平滑肌細胞遷移、增殖，提高管腔形成能力〔11，12〕。梁小芹等〔13〕發現CCR7和VEGF-D在乳腺癌中表達升高，且二者具有正相關性，認為CCR7和VEGF-D的表達水平在一定程度上提示了乳腺導管非典型增生向乳腺癌的轉化潛能，其表達水平可以作為判斷乳腺癌惡性生物學行為的重要指標。

本研究結果提示CCR7和VEGF-D高表達是促進腫瘤形成的重要因素〔14，15〕，即二者具有癌基因樣的作用。本文提示二者高表達具有明顯的促進腫瘤進展的作用。CCR7可以促進腫瘤細胞的增殖過程，這是CCR7與VEGF-D在胃腺癌中作用不一樣的特征。CCR7的此種作用可能與其配體CCL19和CCL21的結合有關。胃癌是高增殖性腫瘤，因此CCR7能對腫瘤細胞繁殖有一定影響，這使腫瘤細胞增殖活躍，細胞數量增大，腫瘤體積明顯增大，腫瘤生長加速，腫瘤呈進展狀態。本文提示CCR7和VEGF-D具有明顯的正向協同作用。CCR7對脈管的作用表現為對VEGF-D的調節上，此時淋巴管內皮細胞增殖，細胞繁殖，呈實性和出芽狀增生，管腔形成明顯，腫瘤細胞易于侵襲到脈管中，能形成脈管內癌栓和淋巴轉移癌〔16，17〕。但是此種作用并不是單一作用形成的，與其受體VEGFR-3的協同作用有關，且這種作用也與VEGF-C的作用有關〔18〕。

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3Sugiura T，Inoue Y，Matsuki R，etal.VEGF-C and VEGF-D expression is correlated with lymphatic vessel density and lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma：implications for use as a prognostic marker.〔J〕.Int J Oncol，2009；34(34)：673-80.

4Wang J，Xi L，Hunt JL，etal.Expression pattern of chemokine receptor 6 (CCR6) and CCR7 in squamous cell carcinoma of the head and neck identifies a novel metastatic phenotype〔J〕.Cancer Res，2004；64(5)：1861-6.

5Wilson JL，Burchell J，Grimshaw MJ.Endothelins induce CCR7 expression by breast tumor cells via endothelin receptor A and hypoxia-inducible factor-1〔J〕.Cancer Res，2006；66(8)：4249-55.

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7趙金偉，王廣義，孫 明.趨化因子受體CCR7在胃癌及轉移淋巴結中的表達及其意義〔J〕.中國實驗診斷學，2007；11(1)：46-8.

8Hanrahan V，Currie MJ，Gunningham SP，etal.The angiogenic switch for vascular endothelial growth factor (VEGF)-A，VEGF-B，VEGF-C，and VEGF-D in the adenoma-carcinoma sequence during colorectal cancer progression〔J〕.J Pathol，2003；200(2)：183-94.

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13梁小芹，蘇勤軍.CCR7和VEGF-D蛋白在乳腺癌發生發展過程中的表達及意義〔J〕.中國普外基礎與臨床雜志，2016；36(6)：715-21.

14Al-Shareef H，Hiraoka SI，Tanaka N，etal.Use of NRP1，a novel biomarker，along with VEGF-C，VEGFR-3，CCR7 and SEMA3E，to predict lymph node metastasis in squamous cell carcinoma of the tongue〔J〕.Oncol Reports，2016；36(5)：2444-54.

15Lee J，Hwan KK，Kim H.Role of vascular endothelial growth factor-D (VEGF-D) on IL-6 expression in cerulein-stimulated pancreatic acinar cells〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2007；1095(1)：129-33.

16吳堅美，姜金波.VEGF-C和VEGF-D在胃癌及相關淋巴結組織中表達和臨床意義的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007；14(8)：590-2.

17Song YM，Wang Z，Liu XY，etal.Erratum to：CCR7 and VEGF-C：molecular indicator of lymphatic metastatic recurrence in pN0 esophageal squamous cell carcinoma after ivor-lewis esophagectomy〔J〕?Ann Surg Oncol，2013；19(3)：3606-12.

18Shibata MA，Shibata E，Morimoto J，etal.Therapy with siRNA for VEGF-C but not for VEGF-D suppresses wide-spectrum organ metastasis in an immunocompetent xenograft model of metastatic mammary cancer〔J〕.Anticancer Res，2013；33(10)：4237-47.

〔2016-07-13修回〕

(編輯 苑云杰)

沈利娟(1980-)，女，主治醫師，主要從事消化系統疾病研究。

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A

1005-9202(2017)16-3996-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.040