化學發光法與POCT檢測降鈣素原的方法比較及臨床應用

李結周

(澄邁縣人民醫院檢驗科，澄邁571900)

化學發光法與POCT檢測降鈣素原的方法比較及臨床應用

李結周

(澄邁縣人民醫院檢驗科，澄邁571900)

1975年，Moya等[1]應用放射性氨基酸在雞后腮腺發現降鈣素(Calcitonin,CT)的合成來自于分子量為13 000(CT分子量為:3 500)的前體物質(降鈣素原)，鼠研究中發現CT位于PCT(Procalcitonin)編碼序列的60～91，且PCT兩側有N端和羧端[2]，人類PCT作為一種無激素活性的糖蛋白由11號染色體降鈣素Ⅰ基因(CALC-Ⅰ)編碼(1～57為N殘端，60～91為降鈣素，96～116為降鈣蛋白)，通過選擇性剪接(編碼1～4外顯子)生成mRNA，轉錄后在甲狀腺濾泡旁細胞粗面內質網翻譯成降鈣素原前體，繼而在高爾基復合體及分泌囊中經一系列水解酶作用裂解形成[3，4]，其在人體內的半衰期約20～24 h，穩定性好，人血清PCT含量極低，約2.5 pg/ml(運用高效液相色譜分析)，在一些非甲狀腺損傷如由細菌感染引起的全身炎癥反應、敗血癥或膿毒性休克、慢性腎衰竭等患者血清PCT及其組分均顯著升高。

目前我科考慮將原有的POCT(Point of care testing)熒光免疫分析法替換為更先進，更準確的化學發光法。故進行兩種方法臨床結果比對試驗，以確認試劑性能是否滿足實驗室要求。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1比對試驗樣本來源 收集2016年10月8日至2016年11月30日，本院降鈣素原標本共376例，同時收集臨床標本以及臨床信息，按照樣本的臨床情況將已經確診為中度炎癥反應或者膿毒癥的患者分為陽性組(>0.5 ng/ml)，有輕度炎癥反應或者局部感染的患者劃分為可疑組(0.1～0.5 ng/ml)，將無炎癥反應的患者劃分為陰性組(<0.1 ng/ml)，進行兩種不同方法的研究比對。

1.1.2日間重現性試驗標本來源 收集1.1.1中的陽性組(>0.5 ng/ml)、可疑組(0.5～0.1 ng/ml)、陰性組(<0.1 ng/ml)的標本各1例分別分裝成5管，每管分裝200 μl，置于-20℃冰箱中保存。連續5 d進行日間重現性檢測。

1.1.3試劑與儀器 深圳市新產業MAGLUMI 4000以及配套的PCT試劑，方法為化學發光免疫分析法。另外比對的廠家為，瑞萊生物公司ReLIA SSJ-2以及配套的PCT試劑。

1.2方法

1.2.1準確性檢測 收集臨床標本以及臨床信息，根據1.1.1的分組，采用兩種不同的方法學進行檢測，并記錄結果。

1.2.2日間重現性 取1.2.1中的陽性組、可疑組、陰性組標本各1例，連續檢測5 d，每天連續檢測5次，計算相對標準偏差(RSD%)，并做記錄，計算。

2 結果

兩種方法的準確性比較結果見表1。新產業檢測陽性組、可疑組、陰性組樣本的RSD%分別為0.11%、0.16%、0.21%,瑞萊生物檢測陽性組、可疑組、陰性組樣本的RSD%分別為0.18%、0.27%、0.57%。在準確度以及日間重現性方面進行方法的研究比較，結果顯示，化學發光法比POCT方法更加準確，重現性更好。但是從使用的領域方面來說，POCT法有著儀器小巧，便攜，操作簡單，非專業人士能夠快速上手等優勢。

3 討論

降鈣素原(PCT)目前已經成為臨床上全身性細菌感染診斷過程中必不可少的檢測指標之一，在美國、德國等發達國家中，已經將PCT檢測列入膿毒癥以及ICU發熱患者的臨床診斷指南中。

表1化學發光法與POCT準確性對比

Tab.1Comparisonofaccuracybetweenchemilunninesc-enceandPOCT

GroupsAmountofsamplesNewindustryAccuracyRuilaiAccuracyPositivegroup(>0.5ng/ml)14314097.9%12587.4%Suspiciousgroup(0.1～0.5ng/ml)555294.6%4581.8%Negativegroup(<0.1ng/ml)17816793.8%12067.4%

PCT濃度和炎癥嚴重程度呈正相關，并隨著炎癥的控制和病情的緩解而降低至正常水平，因而PCT可作為判斷病情發展、療效及預后可靠指標。低濃度的PCT血清水平提示治療有效或預后良好，而高水平PCT的細菌膿毒癥患者生存率較低。PCT在感染或非感染性休克中顯著升高，且PCT與膿毒癥患者器官衰竭的嚴重性呈正相關，是檢測膿毒癥患者器官功能損傷良好的指標。PCT濃度的升高可警示醫生需對患者加強治療或考慮更換其他藥物治療。如果膿毒癥患者使用抗生素24 h PCT下降30%以上，72 h下降50%以上，提示感染得到控制或抗生素治療有效，此類患者會有更好的預后。機體受到細菌感染時，白細胞計數等傳統檢驗項目，預后的相關性差，而PCT水平可對細菌感染的預后進行評估。若PCT水平持續升高或者一直維持在比較高的水平，常常提示預后不良；若PCT水平快速降低至正常水平，常提示預后良好。

目前很多的文獻[5-8]，都表明了不同濃度間，PCT有著不同的診斷建議:當PCT質量濃度<0.1 ng/ml時，基本沒有細菌感染的可能性，強烈建議不使用抗生素；當PCT質量濃度為0.1～0.25 ng/ml時，細菌感染的可能性不大，不建議使用抗生素；當PCT質量濃度為0.25～0.5 ng/ml時，可能存在需要治療的細菌感染，建議使用抗生素；當PCT質量濃度>0.5 ng/ml時，很可能存在需要治療的細菌感染，強烈建議使用抗生素。

本研究通過對化學發光法與POCT兩種方法進行比較、驗證，以篩選出目前最為合適檢驗科的方法。從上述的準確性以及重現性結果來看，化學發光免疫分析法無論在準確性還是在重現性方面，都高于熒光免疫分析法。但是瑞萊生物公司的產品屬于POCT，具有儀器小巧、便攜、操作簡單、非專業人士能夠快速上手等優勢，而新產業的化學發光免疫分析法在結果的準確度、重現性以及成本更加優越。兩個不同方法學的設備都各具優勢。在實驗室選擇中，應根據情況進行選擇測定。

[1] Moya F,Nieto A,Jl RC.Calcitonin biosynthesis:evidence for a precursor [J].Europ J Biochem,1975,55(2):407-413.

[2] Burns DM,Birnbaum RS,Roos BA.A neuroendocrine peptide derived from the amino-terminal half of rat procalcitonin [J].Mol Endocrinol(Baltimore,Md),1989,3(1):140-147.

[3] Russwurm S,Wiederhold M,Oberhoffer M,etal.Molecular aspects and natural source of procalcitonin [J].Clin Chem Laborat Med,1999,37(8):789-797.

[4] 張代民.降鈣素原的測定與臨床應用進展 [J].實用醫藥雜志,2007,24(5):619-622.

[5] 降鈣素原急診臨床應用專家共識組.降鈣素原(PCT)急診臨床應用的專家共識 [J].中華急診醫學雜志,2012,21(9):944-951.

[6] 中華醫學會重癥醫學分會.中國嚴重膿毒癥/膿毒性休克治療指南(2014) [J].中華內科雜志,2015,54(6):365-367.

[7] 楊 濱,康 梅.降鈣素原在細菌感染性疾病診斷及治療中的應用 [J].現代預防醫學,2009,36(3):596-597.

[8] 鄭立華,魯辛辛.降鈣素原的臨床研究進展 [J].中國實驗診斷學,2007,11(1):137-139.

[收稿2017-03-10 修回2017-06-08]

(編輯 許四平 劉格格)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.017

李結周(1966年-)，男，副主任技師，檢驗科主任，主要從事檢驗科日常檢測方法的研究，E-mail：jyk67607315@163.com

R446.11

A

1000-484X(2017)09-1359-02