老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后組織嗜酸粒細(xì)胞和腫瘤壞死因子α表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

盧大松 馮勇軍 曾春榮 王明靖

(海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，海南 海口 570311)

老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后組織嗜酸粒細(xì)胞和腫瘤壞死因子α表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

盧大松 馮勇軍 曾春榮 王明靖

(海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，海南 海口 570311)

目的探討老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后組織嗜酸粒細(xì)胞和腫瘤壞死因子(TNF)-α表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。方法回顧性分析行鼻內(nèi)鏡術(shù)切除老年鼻息肉患者40例，以手術(shù)6個月內(nèi)術(shù)腔完全上皮化和未完全上皮化的患者分為預(yù)后好組22例和預(yù)后差組18例。分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)和蘇木精-伊紅染色的方法,研究兩組鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞和IFN-α的表達(dá)，采用Logistic回歸分析法分析老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后預(yù)后與組織嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α的關(guān)系。結(jié)果預(yù)后好組鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的表達(dá)較預(yù)后差組弱(P<0.05)；兩組鼻息肉組織中TNF-α的主要細(xì)胞有固有浸潤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞，均定位于細(xì)胞質(zhì)。在預(yù)后好組鼻息肉組織中，TNF-α的表達(dá)較預(yù)后差組弱(P<0.05)；有較多的炎癥細(xì)胞浸潤于鼻息肉組織的固有層，其中預(yù)后差組的嗜酸粒細(xì)胞TNF-α表達(dá)的總陽性率顯著高于預(yù)后好組(P<0.01)，Logistic回歸分析顯示，組織中嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α是影響老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后預(yù)后的重要因素(P<0.05)。結(jié)論嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α在鼻息肉組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，且影響老年鼻息肉鼻內(nèi)鏡切除術(shù)預(yù)后效果。

鼻息肉；經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)；嗜酸粒細(xì)胞；腫瘤壞死因子-α

鼻息肉是多種因素共同作用下導(dǎo)致的結(jié)果，是鼻科常見疾病〔1〕。鼻息肉是一種以活性炎癥細(xì)胞，尤其是嗜酸粒細(xì)胞浸潤為特征的呼吸道黏膜炎性病變的鼻部表現(xiàn)，腫瘤壞死因子(TNF)-α是既能抗腫瘤活性,又能介導(dǎo)炎性反應(yīng)的一種分子量為17.35 kD的非糖基化蛋白，使炎性細(xì)胞活化，血管通透性增加，使血管內(nèi)皮細(xì)胞的表型誘變成炎癥型，炎癥反應(yīng)和組織損傷在生理和病理發(fā)揮重要作用〔1〕。本研究探討老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后組織嗜酸粒細(xì)胞和TNF-α表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2015年3月至2016年10月于海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院行鼻內(nèi)鏡術(shù)切除老年鼻息肉患者40例，以手術(shù)6個月內(nèi)術(shù)腔完全上皮化和未完全上皮化的患者分為預(yù)后好組22例和預(yù)后差組和18例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均是單純性鼻息肉患者，均>60歲；(2)患者均行鼻內(nèi)鏡切除術(shù)；(3)知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有其他方面嚴(yán)重性疾病；(2)有感染性疾病。預(yù)后好組男15例，女7例，年齡62～78〔平均(65.68±9.65)〕歲，病程1～3年，平均(2.35±1.02)年，Ⅲ型7例，Ⅱ型9例，Ⅰ型6例；預(yù)后差組男13例，女5例，年齡63～77〔平均(64.85±10.23)〕歲，病程1～3年，平均(2.10±1.11)年，Ⅲ型6例，Ⅱ型8例，Ⅰ型4例。兩組一般資料均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2手術(shù)方法 所有患者經(jīng)過一致的術(shù)前治療及術(shù)前準(zhǔn)備后均在同一組醫(yī)師行鼻內(nèi)鏡切除術(shù)，在局麻情況下，行鼻內(nèi)鏡手術(shù)，根據(jù)術(shù)前CT結(jié)果及術(shù)中所見病變情況，一般采用切前組鼻竇開放是Ⅰ型患者，開放全篩、隱窩額開放并擴(kuò)大上頜竇口是Ⅱ型患者，行全組鼻竇開放是Ⅲ型患者。Ⅲ型者或病變范圍較廣者采用哌替啶進(jìn)行全身麻醉。術(shù)后采用凡士林紗條和填充海綿填充鼻腔。術(shù)后治療方式基本一致，對出現(xiàn)并發(fā)癥者積極治療。根據(jù)病情安排患者出院，回家休養(yǎng)。患者出院后均遵醫(yī)囑服藥，術(shù)后2個月內(nèi)2次/w到醫(yī)院復(fù)查，并用鼻內(nèi)鏡下清理術(shù)腔，分離粘連。在術(shù)后3～6個月，3～4次/d復(fù)查，并進(jìn)行清理，直至滿6個月。評價其術(shù)腔黏膜恢復(fù)情況。

1.3檢測方法 (1)TNF-α：用10%的中性甲醛固定標(biāo)本24 h，按石蠟切片常規(guī)操作后用一抗采用鼠抗TNF-α單克隆抗體(TNF-α單克隆抗體及鏈霉菌抗生素物蛋白-過氧化物酶轉(zhuǎn)結(jié)法(SP)試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司)試劑行SP免疫組織化學(xué)染色，每次染色均設(shè)陽性喉癌組織切片,用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗的陰性對照。(2)嗜酸粒細(xì)胞：將組織石蠟切片脫蠟、沖洗，PBS浸泡,3%H2O2去離子水及孵育后二氨基聯(lián)苯胺(DAB)劑顯色沖洗及蘇木精復(fù)染、脫水、透明并樹膠封片。采用蘇木精-伊紅染色方法，在顯微鏡下觀察炎性細(xì)胞浸潤狀況,并在高倍視野Eos細(xì)胞計數(shù)。

1.4TNF-α和嗜酸粒細(xì)胞陽性標(biāo)準(zhǔn) 以出現(xiàn)棕黃染色顆粒的細(xì)胞質(zhì)為陽性細(xì)胞。在5×5 mm2和6× 6 mm2條線的目鏡上配計數(shù)格上計數(shù)10個陽性區(qū)域(400倍視野平均值)，10個高倍視野未見或偶見1個陽性細(xì)胞為陰性，每計數(shù)格內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)<5個為弱陽性，6～10個為中度陽性，>10個為強(qiáng)陽性。而根據(jù)腺體及血管陽性計數(shù)：10個高倍視野未見腺體及血管為陰性，陽性個數(shù)所占百分比<30%為弱陽性，30%～60%為中度陽性，>60%為強(qiáng)陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α鼻息肉組織的表達(dá) 預(yù)后好組鼻息肉組織中嗜酸粒細(xì)胞的表達(dá)較預(yù)后差組弱(P<0.05)；兩組鼻息肉組織中TNF-α的主要細(xì)胞有固有浸潤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞，均定位于細(xì)胞質(zhì)。在預(yù)后好組鼻息肉組織中，TNF-α的表達(dá)較預(yù)后差組弱(P<0.05)。見圖1。

A：預(yù)后差組嗜酸粒細(xì)胞；B：預(yù)后好組嗜酸粒細(xì)胞；C：預(yù)后差組TNF-α;D：預(yù)后好組TNF-α圖1 兩組嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α表達(dá)(DAB，×400)

2.2兩組嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α表達(dá)的差異 有較多的炎癥細(xì)胞浸潤于鼻息肉組織的固有層，其中預(yù)后差組嗜酸粒細(xì)胞表達(dá)總陽性率為83.33%(陰性3例，弱陽性5例，中度陽性7例，強(qiáng)陽性3例)，顯著高于預(yù)后好組的50.00%(陰性11例，弱陽性7例，中度陽性3例，強(qiáng)陽性1例)(P<0.01)，預(yù)后差組TNF-α表達(dá)總陽性率為77.78%(陰性4例，弱陽性7例，中度陽性5例，強(qiáng)陽性21例)，顯著高于預(yù)后好組的40.91%(陰性13例，弱陽性6例，中度陽性2例，強(qiáng)陽性1例)(P<0.01)。

2.3Logistic回歸分析 組織中嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α是影響老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后預(yù)后的重要因素(P<0.05)。見表1。

表1 Logistic回歸分析法

3 討 論

嗜酸粒細(xì)胞的浸潤和明顯的間質(zhì)水腫是鼻息肉的病理學(xué)特征〔2〕。細(xì)胞因子在鼻息肉的發(fā)病發(fā)展中起著重要的作用，TNF-α是可活化各種炎性細(xì)胞的初級炎性因子，能使血管通透性增加，也具有多種促炎生物活性〔3〕。TNF-α能延長嗜酸性粒細(xì)胞的存活時間和使其活化通過上調(diào)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)水平，還能直接損傷鼻息肉上皮在刺激嗜酸性粒細(xì)胞的細(xì)胞毒功能情況下〔4〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TNF-α在血管系統(tǒng)的廣泛作用下能導(dǎo)致鼻息肉間質(zhì)水腫、炎性浸潤和腺體增生，還能同時使部分結(jié)構(gòu)細(xì)胞受刺激而釋放細(xì)胞因子，從而使肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞聚集而分泌多種白三烯、前列腺素、嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白等炎性介質(zhì)，增加鼻上皮細(xì)胞吸收鈉離子和分泌氯離子，增加水分吸收，使組織水腫加重，最終導(dǎo)致鼻息肉的發(fā)生〔5〕。間質(zhì)中的大量炎癥細(xì)胞浸潤也是鼻息肉的特點(diǎn)，其中嗜酸粒細(xì)胞為主要炎性細(xì)胞之一〔6〕。本研究結(jié)果提示嗜酸粒細(xì)胞對鼻息肉的發(fā)生和復(fù)發(fā)可能起到重要的作用。嗜酸粒細(xì)胞在鼻息肉組織中活化狀態(tài)和浸潤較為顯著。研究顯示，嗜酸粒細(xì)胞在鼻息肉組織的浸潤程度與預(yù)后和復(fù)發(fā)顯著相關(guān)〔7〕。Eotaxin 和Eotaxin-2是嗜酸粒細(xì)胞的兩種趨化因子，能選擇性的與趨化因子受體(CCR)3受體結(jié)合而趨化和活化嗜酸粒細(xì)胞，而這兩種趨化因顯著高于正常鼻黏膜在鼻息肉上表達(dá)，提示鼻息肉的發(fā)生和發(fā)展可能與Eotaxin等趨化因子通過對磷酸性粒細(xì)胞(EOS)的趨化和活化作用有關(guān)，且鼻息肉組織中Eotaxin-2的表達(dá)顯著增加，提示鼻息肉復(fù)發(fā)可能是因?yàn)镋otaxin-2通過對EOS在鼻黏膜局部的聚集〔8〕。本研究還提示在術(shù)前重視患者血清中嗜酸粒細(xì)胞與TNF-α控制治療，可能會改善老年鼻息肉患者經(jīng)鼻內(nèi)鏡術(shù)切除后預(yù)后效果。

1陳祖堯,余 玲,梁灼萍,等.TNFα-和MMP-9在鼻息肉嗜酸粒細(xì)胞浸潤過程中的作用〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2011;25(2):54-7.

2李 康,楊 靜.鼻息肉中嗜酸性粒細(xì)胞的作用機(jī)制〔J〕.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志：綜合版,2012;35(3):70-2.

3曲 玲,張月琴,陳 靜,等.腫瘤壞死因子α、環(huán)氧合酶2與p38絲裂原活化蛋白激酶及其信號通路在鼻息肉發(fā)病中的作用〔J〕.中國眼耳鼻喉科雜志,2012;12(1):47-50.

4王 敏,馮竹玉,鄭家法,等.TNF-α及嗜酸性粒細(xì)胞在鼻息肉中的表達(dá)及在激素治療中的意義〔J〕.中國保健營養(yǎng)：下旬刊,2012;22(5):787-8.

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7隋 麗,陳 冬,馬曉峰.老年慢性鼻竇炎伴鼻息肉患者外周血嗜酸性粒細(xì)胞與肺功能的相關(guān)性〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(10):2629-31.

8馬曉峰,柴 麗,陳 冬,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-9及嗜酸性粒細(xì)胞在鼻息肉形成中的作用〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011;27(5):927-927.

〔2017-04-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

R765.25

A

1005-9202(2017)18-4634-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.097

盧大松(1984-)，男，主治醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉頭頸外科良惡性腫瘤的治療研究。