中南大學實驗動物屏障環境運行初期總結

丁燕霞，李 琳，朱莉莉，王姍妮，支文玲，王梅梅，俞遠京，周智君，高常青

(中南大學湘雅醫學院實驗動物學部，長沙 410013)

教學管理

中南大學實驗動物屏障環境運行初期總結

丁燕霞，李 琳，朱莉莉，王姍妮，支文玲，王梅梅，俞遠京，周智君，高常青*

(中南大學湘雅醫學院實驗動物學部，長沙 410013)

目的對中南大學實驗動物屏障設施的初期運行管理進行總結。方法在實踐的基礎上，制訂了一系列的管理措施，分別對屏障設施運行中人員、動物和物品的管理、規章制度的完善和設施的消毒凈化進行了修改完善。結果通過嚴格執行各項管理措施，保證了實驗動物的質量，建立科學、優質、高效的實驗動物服務平臺，更好的服務于本校的教學科研。結論只有通過嚴格的管理，才能保證實驗動物屏障設施的正常運行。

屏障設施；管理；規章制度；實驗動物

在高等醫學院校，研究生進行畢業課題設計和各教研室承擔的科研課題大部分要涉及到嚙齒類動物，不僅需要清潔級以上標準的實驗動物，還需要相應要求的標準動物的實驗環境。只有保證了實驗動物質量，才能保證以實驗動物為實驗材料的生命科學研究結果的穩定性，科學性和可靠性[1]。中南大學嚴格按照國家標準進行設計并施工新建了實驗動物大樓，包括一樓的普通環境和二、三、四樓的屏障環境。四樓屏障環境設施自2016年3月投入使用以來，為學校的教學、科研提供了優質高效服務，現將設施運行八個月來遇到的問題及解決辦法總結如下：

1 實驗動物屏障設施現狀

2015年新建一座4500 m2，獨棟四層樓的動物實驗大樓，其中二、三、四層為雙屏障凈化面積2400 m2，屏障設施采取三走廊最佳方式，污物走廊兩端設有雙緩沖間，人員、污物、動物流線，有效避免了交叉污染。將污物走廊作為潔凈區進行控制。設置一更、二更、風淋系統。輔助面積1500 m2，包括洗涮消毒室、實驗室、儀器室、辦公室、機房、水凈化房。平面布局見圖1。在洗消間和清潔物品儲藏間之間，設有兩臺脈動真空滅菌器一用一備，低溫紫外傳遞間、傳遞窗。

注：① 配電間；② 女一更；③ 女二更；④ 紫外滅菌間；⑤ 風淋室；⑥ 代乳室；⑦ 動物凈化間；⑧ 男一更；⑨ 男二更。圖1 屏障環境設施平面布局圖Note. ① Power distribution room; ② Women’s locker room I; ③ Women’s locker room II; ④ UV sterilization room; ⑤ Air shower room; ⑥ Milk room; ⑦ Animal purification room; ⑧ Men’s locker room I； ⑨ Men’s locker room II.Fig.1 Schematic plan view of the barrier housing facilities

2 運行半年來遇到的問題

2.1學生對屏障設施的認識不足與屏障設施的管理要求相矛盾

進出學部的主要人員是醫學和生命科學院的碩士、博士研究生及大學生創新實驗團隊和其他科研人員，動物實驗需要由他們自己完成。在完成動物實驗過程中，這些學生幾乎每天都要進屏障進行實驗，甚至一天要進去多次，由于屏障系統有其嚴格、規范的操作要求，實驗者對屏障設施缺乏足夠的了解，如果管理員稍有疏忽就使屏障環境實驗室淪為普通意義的實驗操作場所，失去屏障系統具有的生物凈化的意義，從而無法滿足其操作本身所需要的條件[2]。

2.2學生實驗時間的不固定性與設施的有效管理相矛盾

其一，學生科研具有流動性和時間不確定性，他們進入屏障環境的時間一般是在課余時間，而此時可能是屏障設施管理者的休息時間。其二，研究生人員時間的不固定性。醫學院的研究生在讀期間，不僅要完成科研任務，還要安排臨床實習，而很多醫院的安排與學生做實驗的時間相沖突，因此很多學生會選擇中午或晚上做實驗，這對屏障設施的有效管理是個考驗。其三，學?？蒲腥藛T在做科研的同時需要承擔一定的教學任務，許多實驗的進行只能選擇在非上班時間[3]。鑒于上述原因，使得屏障系統管理人員對其進行有效的管理和監督遇到了困難。

2.3人員流動性大，造成傳遞窗使用不規范

每天來設施做實驗的人數眾多，最多可達120人次/天?？蒲蟹N類的繁多使得設施內實驗物品無法配備齊全，實驗必須品需要由學生自己帶入設施。但是由于每天人員流動繁多，而傳遞窗只有一個，有些學生著急做實驗，只是象征性地把實驗物品放入傳遞窗，等穿好隔離服進入屏障系統后就把物品取出，無法保證實驗物品消毒的可靠性。這對屏障設施的潔凈度要求帶來了巨大的挑戰。

2.4實驗動物的飼養要求不同與設施服務的高效性相矛盾

屏障系統內多項實驗同時進行時，如糖尿病造模、外科手術、腫瘤模型建立及轉基因動物飼育等，由于不同實驗對實驗動物護理的要求不同，且實驗人員與飼養管理人員缺少溝通，偶爾導致加錯飼料、漏加飲水造成死亡等現象，這與設施為學校科研提供優質服務的高效性相矛盾。

3 屏障系統的規范化管理

3.1建立標準完善的屏障環境操作規程

根據實驗動物管理的統一要求和實驗動物平臺管理的需要，學部特制定了各項規章制度和操作規程，使每個工作人員有章可循，以高標準、嚴要求來規范和衡量工作，為屏障環境質量管理提供了可靠的保證。包括人員、動物進出屏障系統標準操作程序；物品消毒、進出屏障系統標準操作規程；屏障系統實驗動物接收、檢疫操作規程；傳遞窗使用操作規程；高溫高壓滅菌器使用操作規程；大、小鼠飼養管理操作規程；設施內環境清潔、消毒滅菌操作規程。各項操作規程一旦建立必須嚴格地執行。

3.2規范實驗人員的管理

我們要求所有申請進入屏障環境實驗室的實驗人員均須持有實驗動物從業人員資格證書且在實驗前必須經過學部的培訓，了解屏障設施的特點和要求，尤其是人員進入屏障設施的流程，加強對于實驗動物屏障系統環境的認識[4]。培訓過程中實驗人員會在培訓老師的帶領下進入學部三樓未投入使用的屏障環境，熟悉屏障系統環境內的各個功能區的分布，以減少實驗過程中在屏障環境內的不必要走動。經過培訓且只有培訓合格后才能申請錄指紋進入設施實驗。同時，科研人員進學部做實驗之前，需要提交《中南大學實驗動物福利倫理審查申請表》和《實驗動物委托飼養服務協議》寫明課題所需動物種類，數量，進行哪些操作以及實驗人員等，明確雙方的權利和義務，經學部倫理審查委員會審核通過后由導師簽字方可進入設施實驗[5]。為避免無指紋實驗人員進入設施，屏障設施門禁處有老師專門對進出設施人員進行監督檢查，有效的杜絕了實驗不相關人員進入屏障設施。

在屏障設施里，學部工作人員會對進入屏障設施的實驗人員進行監督指導，以減少實驗人員的不當操作。同時學部在工作日運行的8:00～19:00中均有工作人員在屏障實驗設施內，以確保同學在有需要時可以及時得到解決。要求實驗人員在工作時間進行實驗，如果確實需要在非工作時間進行實驗，則必須提前申請，學部會安排工作人員對其進行監督管理。在一個工作日內能完成的工作決不允許拖到第二天，這樣使實驗人員合理的安排時間，減少進去屏障設施的次數，大大降低了環境污染的機會[6]。

3.3加強工作人員的管理

每一位工作人員在進入工作崗位前必須參加學部組織的進入屏障設施的培訓，養成無菌觀念和衛生習慣[7]，同時學部定期對屏障設施內的管理人員進行培訓考核，考核成績直接與當月的工資掛鉤。制訂了實驗室工作人員職責，明確和規范屏障環境動物實驗室各類人員職責，責任到人，規范了動物實驗室的管理，讓工作人員熟悉學部的各項規章制度。對于屏障設施管理人員，除了熟練掌握各項操作規程之外，還要學習有關動物設施和動物實驗的相關文件，不斷提高對屏障環境實驗室的認識水平和實驗操作技能，從而指導學生實驗；要建立合理的培訓計劃，不斷加強業務學習，學習國內外先進技術和管理經驗，不斷提高實驗室工作人員的管理水平和業務素質，使之成為一個稱職的管理人員和專業技術人員[8]；明確分工，加強管理，定期檢查個人分管工作，與崗位責任和績效考核掛鉤[9]；另外平時要讓工作人員全面輪崗培訓，使相互之間能夠互為替代互為備用，這樣可以確保屏障環境內各個崗位不至于空缺無人。

3.4規范實驗動物的管理

學部的實驗動物是由動物生產公司統一運送。動物到達學部后，有老師專門負責檢查動物的外包裝是否完好，如發現包裝盒破損等情況，拒絕此類動物傳入屏障內，以免對屏障設施造成污染。如未發現包裝盒破損，則對包裝盒進行消毒，然后傳入屏障。外購實驗動物必須來自于具有相應生產許可證的正規單位。公司需先提交電子版的質量合格證和檢疫合格證，審核通過后方可發貨。運輸過程必須符合國標規定。動物到達學部后，需提交紙質版的質量合格證明。動物進入屏障后，經檢疫合格后方可放入IVC籠具中飼養，對于檢疫不合格的動物，退回廠家處理。

不同的實驗動物采取單獨飼養的方式，轉基因動物，免疫缺陷動物，大鼠，小鼠等都有其專門的飼養間[10]。對于需要不同護理方式的實驗動物，我們采取不同顏色籠卡的管理辦法。如正常飼養的動物用白色的籠卡；特殊需要的，如制作糖尿病模型的動物需要單獨飼喂高脂飼料，制作腸炎模型的需要單獨飼喂飲水，測定動物飲食飲水量等的就需要自己添加飼料飲水等情況，則用藍色的籠卡，并標明注意事項；做完手術的動物需要飼養員特殊觀察其狀態以便及時通知實驗人員做出相應的處理，那么這類動物用紅色的籠卡。動物的分類管理在一定程度上減少了工作人員的失誤，取得了很好的效果。

3.5物品的管理

進入屏障環境的一切物品都要滅菌消毒，根據進入屏障設施的各種物品的不同特性，選擇不同的消毒方法[11]。物品消毒的總原則是能高溫高壓消毒的物品不要用紫外線照射消毒，如籠具、墊料、飲水、工作服、離心管，手術器械等都可經過雙扉脈動真空高壓滅菌器經121℃，30 min高溫處理達到滅菌目的。拖鞋可經消毒液浸泡后經由紫外線照射滅菌傳入。對于不耐紫外線照射的生物制品，用酒精棉球擦拭其外表面消毒后，再用高壓滅菌過的錫箔紙包裹，放在裝有消毒液的冰水中，經傳遞窗紫外照射30 min后傳入屏障系統。為嚴格控制進入屏障內物品的消毒質量，學部派老師負責管理傳遞窗的使用，嚴格執行傳遞窗使用實名登記制度，規范進入設施內物品的消毒程序。屏障內部工作人員也會定期在傳遞窗周圍巡查，如發現有操作不當的或物品消毒方式不正確的就立即制止。

3.6屏障設施的消毒凈化

每天工作結束后，用0.5%的過氧乙酸或5%的84消毒液[12]依次對地面、實驗操作臺、工作車等用具進行擦拭；每周一次用消毒液擦拭墻壁、門、飼養籠架、天花板等，并在每天工作結束后對屏障內個房間進行空氣噴霧消毒。每季度更換一次消毒液，使微生物數量減少的同時也避免了細菌耐藥性的產生[13]。每月對設施中各區域空氣落菌數進行監測，以此來檢驗屏障環境內的消毒效果，根據檢測結果來評判飼養人員的工作態度，并且與績效掛鉤。

4 結語

屏障環境設施運行的成本高，責任重大，加強科學管理，避免因操作不規范造成屏障設施和實驗動物遭受微生物污染的事故發生，確保屏障設施的潔凈度，以便獲取較可靠的研究結果。同時屏障環境開放性實驗室的管理還涉及到很多問題，需要在實際管理運行中不斷調整、改進、完善，希望在執行過程中及時提出合理的建議，以便不斷探索，不斷磨礪，為中南大學教學、科研、醫療出成果出人才而努力奮斗。

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ApreliminarysummaryofthemanagementoflaboratoryanimalbarrierhousingfacilitiesatCentralSouthUniversity

DING Yan-xia， LI Lin， ZHU Li-li， WANG Shan-ni， ZHI Wen-ling， WANG Mei-mei， YU Yuan-jing， ZHOU Zhi-jun， GAO Chang-qing*

(Department of laboratory Animals, Xiangya School of Medicine, Central South University, Changsha 410013, China)

ObjectiveTo summarize the initial operation and management of the laboratory animal barrier housing facilities at Central South University.MethodsBased on practice, a series of measures have been worked out to improve the management of personnel, animals and items, implement of rules and regulations，and disinfection and purification of the facilities during the operation of barrier system.ResultsThrough strictly carrying out the management measures, we have ensured the quality of laboratory animals and have established a scientific, high-quality and efficient service platform of laboratory animals to serve the teaching and research at Central South University.ConclusionsOnly through strict management, we can ensure the normal operation of the laboratory animal barrier housing facilities.

Barrier housing facilities; Management; Rules and regulations; Laboratory animals

R-33

A

1671-7856(2017) 09-0083-04

10.3969.j.issn.1671-7856.2017.09.016

2016-11-10

湖南省科技廳計劃(編號：2016DK2004)；中南大學實驗室研究項目(中大資字[2015] 12號)。

丁燕霞(1991-)，女，碩士，研究方向：實驗動物。E-mail: 963305645@qq.com

高常青(1973-)，男，副研究員，博士，研究方向：實驗動物。E-mail: cgao851@126.com