Stat3和TopoⅡα在宮頸癌中的表達(dá)以及臨床意義

黃琳玲，吳娟，黎艷

--論著--

Stat3和TopoⅡα在宮頸癌中的表達(dá)以及臨床意義

黃琳玲，吳娟，黎艷

（江西省婦幼保健院婦科，江西 南昌 330006）

目的 探討Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中的表達(dá)及臨床意義。方法 選取2015年12月～2016年6月江西省婦幼保健院采集的宮頸鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本45份，設(shè)為觀察組，選取子宮肌瘤全子宮切除后的15例正常宮頸組織，設(shè)為對照組。采用免疫組織化學(xué)法檢測兩組組織中Stat3和TopoⅡα表達(dá)水平，分析Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中的表達(dá)及臨床意義。結(jié)果 觀察組組織經(jīng)免疫組織化學(xué)法測定后Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率，均高于對照組（P＜0.05）；單因素結(jié)果顯示：宮頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與年齡、腫瘤大小比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分期關(guān)系密切（P＜0.05）；相關(guān)性研究結(jié)果顯示：觀察組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分析呈正相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論 Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中均呈高表達(dá)，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，加強Stat3和TopoⅡα水平測定能為患者后續(xù)治療提供依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。

Stat3；TopoⅡα；宮頸癌；臨床意義

宮頸癌是臨床上常見宮頸癌是臨床上常見的惡性腫瘤，我國每年新增的宮頸癌患者達(dá)到13.5萬人，僅次于乳腺癌[1]。近年來，隨著人們生活方式的改變，導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生率呈上升及年輕化趨勢，嚴(yán)重影響我國女性健康[2]。目前，臨床上對于宮頸癌發(fā)病機制尚不完全知曉，普遍認(rèn)為其發(fā)病屬于是一個多因素、多病因、多階段性過程，且患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏特異性，多數(shù)患者一旦確診，已經(jīng)是中、晚期，延誤了最佳治療時機[3]。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（Stat3）屬于Stats家族成員之一，最早于1994年在肝臟中發(fā)現(xiàn)，能在啟動急性期基因時選擇性與增強子作用。研究表明[4]：Stat3在腫瘤血管的生成、免疫及腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用。TopoⅡα是一類核蛋白，廣泛存在于機體中，并且能夠通過調(diào)節(jié)核酸結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化，在DNA復(fù)制、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄、重組以及染色體分離等生命活動中發(fā)揮重要作用[5]。因此，加強宮頸癌患者Stat3和TopoⅡα表達(dá)對患者早期診斷、治療具有重要的意義。為了探討Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中的表達(dá)及臨床意義。選取2015年12月～2016年6月江西省婦幼保健院采集的宮頸鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本45份及15份正常宮頸組織作為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 取2015年12月～2016年6月江西省婦幼保健院采集的宮頸鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本45份，設(shè)為觀察組，年齡30～64歲，平均（43.50±4.12）歲。臨床分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期16例。宮頸癌類型：宮頸鱗狀細(xì)胞癌31例，宮頸腺癌14例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者13例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。浸潤情況：有脈管浸潤者21例，無脈管浸潤者24例。病理分級：G1級7例，G2級32例，G3級6例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《2015年NCCN宮頸癌指南》[6]中關(guān)于宮頸癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均經(jīng)過手術(shù)病理檢查最終得到確診；③均未經(jīng)放化療及相關(guān)生物學(xué)治療。選取子宮肌瘤全子宮切除后的15例正常宮頸組織，設(shè)為對照組，年齡30～65歲，平均（42.91±4.09）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合宮頸癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)者；②資料不全或難以配合診斷、治療者；③合并嚴(yán)重心、肝、腎功能異常者。本課題在倫理委員會批準(zhǔn)、監(jiān)督下進(jìn)行，患者對診斷方法等知情同意。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測2組組織中Stat3和TopoⅡα表達(dá)水平，宮頸癌患者手術(shù)方式為主要為廣泛或次廣泛子宮切除加盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)，部分為擴(kuò)大性全子宮切除。取術(shù)中切除的組織制備標(biāo)本，采用10.0%甲醛液固定，石蠟包埋，制備4 um厚連續(xù)切片。將切片放置在烘烤箱（60℃）下進(jìn)行1 h烘烤，脫蠟至水，采用pH為7.2～7.4 PBS緩沖液3次清洗，每次3 min，采用濃度為3%H2O2溶液放在室溫下進(jìn)行20 min孵育，將組織中內(nèi)源性過氧化物酶消除，采用PBS進(jìn)行3次沖洗，每次3 min，加入1∶10普通山羊血清進(jìn)行15 min下孵育，減少非特異性抗原抗體結(jié)合。去除組織切片上的血清，滴加1抗（抗鼠Stat3和TopoⅡα單克隆抗體），4℃下過夜，室溫下放置1 h，采用PBS進(jìn)行3次清洗，每次3 min，加入生物素標(biāo)記的二抗，孵育30 min，溫度為37℃。加入辣根過氧化物酶，孵育30 min，溫度為37℃，采用PBS進(jìn)行3次清洗，每次3 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染8～10 s，中性樹膠封片。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和染色強度進(jìn)行半定量測定，在200倍光鏡下每張切片隨機選擇5個視野，每個視野測定3次后取平均值，比較Stat3和TopoⅡα在不同組織中的表達(dá)陽性率及相關(guān)性[7-8]。

1.3 判定方法 普通顯微鏡下觀察組織的顯色反應(yīng)，Stat3和TopoⅡα表示細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒，評定時從細(xì)胞陽性數(shù)（1～4分）及染色強度（0～12分）進(jìn)行評定，得分越高，陽性率越高，每個病理組織隨機取3個血管最多的切片，在200倍光鏡下取5個視野，取平均值[9-10]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件處理，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率比較觀察組組織經(jīng)免疫組織化學(xué)法測定后Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率，均高于對照組（P＜0.05）。見表1和圖1。

表1 觀察組與對照組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率比較[n（%）]Table 1 The positive rates of Stat3 and TopoⅡα expression in observation group and control group were compared[n(%)]

圖1 觀察組與對照組免疫組織化學(xué)法測定（×40）Figure 1 Observation group and control group by immunohistochemical method(×40)注：A圖為對照組組織免疫組織化學(xué)法圖片；B圖為觀察組組織免疫組織化學(xué)法圖片。

2.2 觀察組不同臨床病理下Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性單因素結(jié)果顯示：宮頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與年齡、腫瘤大小無統(tǒng)計學(xué)意義；頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分期關(guān)系密切（P＜0.05）。見表2。2.3 觀察組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性與病理相關(guān)性 相關(guān)性研究結(jié)果顯示：觀察組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分析呈正相關(guān)性（P＜0.05）。見表3。

表2 觀察組不同臨床病理下Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性[n（%）]Table 2 Stat3 and TopoⅡαwere positive in different clinical pathologies[n(%)]

表3 觀察組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性與病理相關(guān)性（r，P）Table 3 The positive correlation between Stat3 and TopoⅡα expression in the observation group was correlated with pathology(r，P)

3 討論

宮頸癌是臨床上常見的疾病，其死亡率占女性惡性腫瘤的第二位，嚴(yán)重影響我國女性健康和生命[11]。目前，臨床上對于宮頸癌以手術(shù)治療、放射治療為主，該方法雖然能改善患者預(yù)后，但是部分患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏特異性，導(dǎo)致患者治療預(yù)后較差，嚴(yán)重影響我國居民健康及生命。目前，臨床上對于宮頸癌發(fā)病機制尚不完全知曉，普遍認(rèn)為是一個多因素過程，其發(fā)生、發(fā)展涉及因素較多，均能促進(jìn)疾病的發(fā)生、發(fā)展[12]。

文獻(xiàn)報道顯示[13]：Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中發(fā)揮了重要的作用，能評估患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療，但是該結(jié)論有待驗證。本研究中，觀察組組織經(jīng)免疫組織化學(xué)法測定后Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率，均高于對照組（P＜0.05）。提示：Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中均呈高表達(dá)水平。Stat3最早于1994年在肝臟組織中發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是急性期反應(yīng)因子之一，屬于Stats家族成員，能在機體各種生物酶的作用下發(fā)揮選擇性作用。國內(nèi)學(xué)者研究顯示，Stat3在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，其高表達(dá)能直接促進(jìn)腫瘤血管的生成，并且其表達(dá)水平還受到機體免疫抑制、腫瘤的臨床分析、侵襲、轉(zhuǎn)移等有關(guān)，可以通過多方式、多途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。從基因?qū)W角度來說，Stat3在老鼠中主要定位11號染色體，而在人體中定位17號染色體，并且具有三種異構(gòu)體。從大的角度來說，Stat3可以分為SH2區(qū)、SH3區(qū)、Y7O5、DNA結(jié)合區(qū)、羧基端、絲氨酸磷酸化位點及氨基酸序列等七個不同的序列[14]。研究表明：在機體生物酶作用下Stat3在人體中能將不同氨酸進(jìn)行有效的結(jié)合，能生成同源性二聚體，并且能識別特異的DNA序列，促進(jìn)靶基因激活。由此看出：宮頸癌患者發(fā)生、發(fā)展后IL-6可激活Stat3基因，刺激細(xì)胞生長，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究中，單因素結(jié)果顯示：宮頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與年齡、腫瘤大小比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；頸癌組織Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性率與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分期關(guān)系密切（P＜0.05）。由此看出：Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中表達(dá)時受到的影響因素相對較多，能評估患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療。

TopoⅡα也是人體中常見的核蛋白，能調(diào)節(jié)核酸結(jié)構(gòu)的變化，并且在DNA的復(fù)制、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮了重要的作用，在機體生命的維持中具有重要的作用。從大的角度來說，TopoⅡ主要由TopoⅡα、TopoⅡβ兩種類型，并且在所有的核仁內(nèi)均能表達(dá)，是所有核仁必須物，在核糖體RNA的轉(zhuǎn)錄、增殖中發(fā)揮了重要的作用。TopoⅡα主要位于核基質(zhì)中，能直接參與宮頸癌DNA的復(fù)制和增殖，并且其表達(dá)水平受細(xì)胞周期的影響。通常來說，TopoⅡ主要位于正常細(xì)胞的S期、G期和M期，并且在G2/M期中能達(dá)到峰值，能直接參與細(xì)胞的分裂，是臨床上細(xì)胞分裂的一個特異性指標(biāo)。因此，惡性腫瘤患者中TopoⅡ表達(dá)水平要明顯高于良性疾病或正常組織[15-17]。國外學(xué)者研究顯示：TopoⅡα含量高的細(xì)胞分化程度低。在口腔扁平苔蘚中，TopoⅡα表達(dá)與細(xì)胞的異型性，基底細(xì)胞增生等密切相關(guān)。在口腔上皮鱗癌、外陰鱗癌中TopoⅡα表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分級正相關(guān)，且有增殖依賴性。本研究中，相關(guān)性研究結(jié)果顯示：觀察組Stat3和TopoⅡα表達(dá)陽性與浸潤情況、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌類型及臨床分析呈正相關(guān)性（P＜0.05）。因此，為了提高宮頸癌患者臨床治療效果，治療時應(yīng)該完善患者相關(guān)檢查，術(shù)后及時對病理標(biāo)本進(jìn)行Stat3和TopoⅡα檢測，指導(dǎo)患者術(shù)后治療，動態(tài)了解患者病情變化情況，使得患者的治療更具針對性。此外，宮頸癌患者治療時應(yīng)密切觀察患者生命體征，對于出現(xiàn)異常患者及時采取有效的措施進(jìn)行干預(yù)治療，促進(jìn)患者早期恢復(fù)。

綜上所述，Stat3和TopoⅡα在宮頸癌患者中均呈高表達(dá)，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，加強Stat3和TopoⅡα水平測定能為患者后續(xù)治療提供依據(jù)。

[1]李珂珂，童創(chuàng)，王建國，等.TopoⅡα和Ki67在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].安徽醫(yī)學(xué)，2016，37（1）：18-21.

[2]周恬，楊海松.新輔助化療對含基底細(xì)胞樣型乳腺癌中TOPOⅡa及PS2表達(dá)的影響及臨床意義[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015，44（20）：2821-2824.

[3]Esheba GE,Hassan AA.Comparative immunohistochemicalexpressionofβ-catenin,EGFR,ErbB2,and p63 in adamantinomatous and papillary craniopharyngiomas[J].J Egyptian National Cancer Institute,2015,27(3):139-145.

[4]徐菲，錢莉莉，王慧妍，等.宮頸癌細(xì)胞中ΔNp63α對白血病抑制因子表達(dá)水平的影響及其機制[J].腫瘤防治研究，2016，43（7）：545-549.

[5]王翔宇，許晉銓，孫麗，等.Rsf-1/HBXAP基因在宮頸癌中的表達(dá)及臨床病理意義[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2017，26（2）：104-108.

[6]楊杰，曹毅，柯瑞盛，等.Ki-67和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα表達(dá)對原發(fā)性肝癌患者肝移植手術(shù)預(yù)后的價值[J].中華肝膽外科雜志，2016，22（10）：687-691.

[7]楊新偉，閆興州，李亮，等.轉(zhuǎn)錄信號傳導(dǎo)子及激活子3在肝內(nèi)膽管癌中的表達(dá)及意義[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2017，38（2）：149-154.

[8]殷復(fù)粉，王寧，于嘯，等.宮頸癌細(xì)胞系中HPV16E6、E7及E6/E7基因?qū)TK31基因甲基化狀態(tài)及表達(dá)的影響[J].中國癌癥雜志，2015，25（9）：641-651.

[9]馬速佳，吳成穩(wěn)，李祥波，等.蛋白激酶C-α與環(huán)氧化酶2在人肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志，2016，33（9）：2203-2205.

[10]任春霞，馬錦琪，呂祝武，等.IL-6通過活化STAT3/Notch信號促進(jìn)癌相關(guān)成纖維細(xì)胞衰老及宮頸癌上皮細(xì)胞侵襲與放療抵抗的機理研究[J].中國癌癥雜志，2016，26（12）：961-967.

[11]Lee JY,Lee C,Hahn S,et al.Prognosis of adenosquamous carcinoma compared with adenocarcinoma in uterine cervical cancer:A systematic review and meta-analysis of observational studies[J].Int J Gynecol Cancer,2014,24(2):289-294.

[12] 盧丹，錢靜，孫飛，等.PI3K、Akt、mTOR、p70S6K基因在宮頸癌變過程中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2015，25（2）：46-51.

[13]萬英明，齊玲，田晶，等.STATs蛋白家族在口腔黏膜下纖維化及其并存口腔扁平苔蘚中的表達(dá)及意義[J].重慶醫(yī)學(xué)，2016，45（16）：2254-2257.

[14]譚文福，吳緒峰.宮頸癌患者血清中hmga1和CK19蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].實用癌癥雜志，2017，32（3）：361-363.

[15]葉芬.新輔助化療前后宮頸癌組織中MK、MVD的表達(dá)變化及其臨床意義[J].實用癌癥雜志，2015，30（11）：1609-1611.

[16]趙華菊.腹腔鏡與開腹宮頸癌根治術(shù)聯(lián)合腹主動脈旁淋巴結(jié)清掃治療早期宮頸癌臨床對比研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2017，23（15）：90-92.

[17]陳明曉.順鉑同步放化療與單純放療治療中晚期宮頸癌臨床對照研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016，22（2）：118-119.

Stat3 and TopoⅡalpha in the expression and clinical significance of cervical cancer

Huang Lin-ling,Wu Juan,Li Yan
(Department of Gynecology,Jiangxi maternal and child health care hospital,Nanchang,Jiangxi,330006,China)

Objective To study the Stat3 and TopoⅡα expression and clinical significance in patients with cervical cancer.Methods Apply from December 2015 to June 2016 in jiangxi province health care of women and children's acquisition of cervical squamous cell carcinoma of the surgical specimens from 45,set as observation group,the selection of uterine fibroids all the 15 cases of normal cervical tissue after hysterectomy,set as control group.Using immune histochemical method detection in Stat3 and TopoⅡα expression levels in the organization of two groups,analyzing Stat3 and TopoⅡα expression and clinical significance in patients with cervical cancer.Results Observation group organization after immune histochemical method to determine the Stat3 and TopoⅡα expression positive rate,were higher than control group(P＜0.05);Single factor the result shows:the cervical cancer tissue Stat3 and TopoⅡα expression positive rate with age,tumor size,no statistical significance;Cervical cancer tissue Stat3 and TopoⅡα expression positive rate and infiltration,pathologic stage,lymph node metastasis,closely related to cervical cancer type and clinical stage(P＜0.05);correlation results show:the observation group Stat3 and TopoⅡα expression positive and infiltration,pathologic stage,lymph node metastasis,the types of cervical cancer and clinical analysis was a positive correlation(P＜0.05).Conclusion Stat3 and TopoⅡα were highly expressed in patients with cervical cancer,can be directly involved in the occurrence and development of diseases,strengthen Stat3 and TopoⅡα level measurement can provide basis for follow-up treatment for the patient,is worthy of popularization and application.

Stat3;TopoⅡα;Cervical cancer;Clinical significance

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.001

江西省衛(wèi)生計生委科技計劃（20165469）