高效液相色譜法測定蘆丁含量

材料與方法

儀器

（1）日本島津LC-20AT高效液相色譜儀（帶紫外檢測器）。

（2）AS-A型系列超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯化器有限公司）。

（3）超純水機(jī)（臺灣艾柯儀器公司）。

試劑

（1）甲醇（色譜純）。

（2）甲醇（分析純）。

（3）磷酸（優(yōu)級純）。

（4）蘆丁（中藥化學(xué)對照品），四川省維克奇生物科技有限公司生產(chǎn)。

色譜條件

色譜柱：C18（4.6x250mm，5um）不銹鋼柱，流動相：甲醇：0.5%磷酸水溶液=85：15，流速1.0ml/min，柱壓20Mpa，柱溫40℃，檢測波長390nm，進(jìn)樣體積10ul，采集時間10min。

檢測部分

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。直接用分析純甲醇溶解20mg純度為98%的蘆丁中藥化學(xué)對照品，轉(zhuǎn)移定容于10ml容量瓶中，此標(biāo)液濃度為1.96mg/ml。用移液管分別吸取此標(biāo)準(zhǔn)溶液0.20ml、0.40ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml于10ml容量瓶中，用分析純甲醇定容至10ml，配制成濃度分別為0.0392mg/ml、0.0784mg/ml、0.196mg、ml、0.392mg/ml、0.588mg/ml五個級別的標(biāo)準(zhǔn)使用液，經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定。精確稱取0.01—0.09克蘆丁提取物于50ml比色管中，用20ml分析純甲醇溶解，放置于超聲波清洗器中超聲提取20分鐘，然后用分析純甲醇定容至50ml，靜置，取上清液經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過濾后上機(jī)檢測，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。待測樣液蘆丁濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

結(jié)果計(jì)算

計(jì)算公式：X=

式中：

X—試樣中蘆丁的含量，單位為克每百克（g/100g）；

C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣中蘆丁的濃度，單位為毫克每克（mg/g）；

V—試樣溶液的體積，單位為毫升（ml）；

m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

結(jié)果與討論

（1）稱取樣品應(yīng)根據(jù)蘆丁提取物的蘆丁含量來計(jì)算取樣量，確保試液中蘆丁濃度保持在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，若檢測后超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

（2）稱取樣品后放置于超聲波清洗器中，超聲處理時間應(yīng)根據(jù)溶解程度來確定，全部溶解就行了，若有難以溶解的雜質(zhì)可適當(dāng)延長超聲處理時間。

（3）精密度實(shí)驗(yàn)：取2份樣品，在相同條件下平行測定6次，測得RSD，結(jié)果見表1。

（4）用該方法進(jìn)行高低2個濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2.

以上文章內(nèi)容針對蘆丁防治高血壓病的輔助治療和作用，做出了詳細(xì)分析說明，著重在檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方面進(jìn)行了實(shí)例示范。結(jié)論確保試液中蘆丁濃度保持在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍。可供本專業(yè)人士參考。

作者簡介：

翟崇華（1967-），女，工學(xué)士，高級工程師，主要從事食品檢驗(yàn)工作。