自擬安眠方對小鼠自主活動及協同戊巴比妥鈉睡眠實驗的影響

王亞茹，于世家

（遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032）

自擬安眠方對小鼠自主活動及協同戊巴比妥鈉睡眠實驗的影響

王亞茹，于世家*

（遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032）

目的 觀察自擬安眠方對小鼠自主活動及協同戊巴比妥鈉睡眠實驗的影響。方法 （1）將69只小鼠隨機分為六組（空白對照組，西藥對照組，中藥對照組，安眠方低、中、高劑量組），空白對照組給予生理鹽水，西藥對照組給予地西泮，中藥對照組給予甜夢膠囊，安眠方低、中、高劑量組分別給予12、38.7、120 g/（kg·d），觀察 10 min內各組小鼠活動次數及站立次數；（2）將90只小鼠，隨機分為6組，空白對照組及西藥、中藥對照組同小鼠自主活動實驗，安眠方低、中、高劑量組分別給予30.1、60.2、120 g/（kg·d），觀察小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠時間。結果 與空白對照組相比，安眠方高劑量組小鼠活動次數與站立次數明顯減少（P＜0.01）；協同戊巴比妥鈉實驗中安眠方中、高劑量組小鼠睡眠潛伏期縮短及睡眠時間延長與空白對照組相比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論 安眠方具有抑制小鼠自主活動的作用，具有縮短小鼠睡眠潛伏期及延長小鼠睡眠時間的作用。

安眠方；睡眠實驗；自主活動；戊巴比妥鈉；天麻；鉤藤

失眠是指經常不能獲得正常睡眠的一種病癥。中國睡眠研究會于2003年世界睡眠日在全國范圍內發放萬份睡眠障礙調查問卷，調查結果顯示，被調查人群存在睡眠障礙的比率為38.4%[1]。近年來，隨著社會的發展，生活節奏的加快，工作學習的緊張，競爭意識的增強，失眠的發生率不斷上升。失眠癥是指睡眠的始發和睡眠維持發生障礙，致使睡眠質量不能滿足個體需要而明顯影響患者白天正常活動的一種睡眠障礙綜合征。中醫學將該病歸屬為“不寐”“不得眠”“不得臥”等范疇。目前睡眠的機制尚未完全明了，現代醫學治療失眠仍以鎮靜催眠為主。某些藥物對中樞神經系統有一定的抑制作用，同時還會使患者產生不同程度依賴性。所以，眾多醫家積極地在中醫學領域尋找和探索治療失眠癥的理論和方法。導師于世家教授通過多年來對中醫經典的潛心研究及幾十年來的臨床實踐經驗，自擬安眠方（天麻、鉤藤、黃精、酸棗仁、五味子、首烏藤6味中藥），在臨床上治療糖尿病合并失眠收到良好療效。本文采用小鼠行為學觀察的實驗方法，通過觀察安眠方對小鼠自主活動及協同戊巴比妥鈉對小鼠睡眠的影響，包括小鼠睡眠時間、睡眠潛伏期等情況，研究安眠方的鎮靜催眠作用，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 安眠方顆粒（天麻、鉤藤、黃精、酸棗仁、五味子、首烏藤6味）。本實驗受試物為安眠方處方的提取物，不含任何添加劑及輔料等。由遼寧中醫藥大學附屬醫院中醫藥實驗中心中藥制劑室提供，深褐色粉末。每克粉末相當于4.3 g生藥。西藥陽性對照藥地西泮片，北京益民藥業有限公司產品。批號：20121001。中藥陽性對照藥甜夢膠囊，榮昌制藥（淄博）有限公司產品，批號：130201061。受試藥物及中藥對照藥溶于水、地西泮研碎后溶于PMPC。戊巴比妥鈉中國醫藥（集團）上海化學試劑公司進口分裝，批號：F20030816。

1.1.2 動物 昆明種小鼠，SPF級，雌雄各半，體質量18～20 g。由遼寧長生生物有限公司提供，許可證號：SCXK（遼）2012-0001。

1.1.3 儀器 ZZ-6小鼠自主活動儀，成都泰盟科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 安眠方對小鼠自主活動實驗的影響 69只小鼠隨機分為6組，即空白對照組、西藥對照組、中藥對照組、安眠方低劑量組、安眠方中劑量組、安眠方高劑量組。三組對照組各11只小鼠，三組實驗組各12只小鼠，灌胃給藥。其中空白對照組給予生理鹽水同容量，西藥對照組給予地西泮 1 mg/（kg·d），中藥對照組給予甜夢膠囊2.725 g/(kg·d)生藥，安眠方低、中、高劑量組分別給予 12、38.7、120 g/(kg·d）生藥。各組小鼠禁食（不禁水）12 h后，按上述設計劑量給藥，連續2次，間隔1 h。第2次給藥后1 h，分別將小鼠置于自主活動儀中，記錄10 min內的各組小鼠活動次數及站立次數。

1.2.2 安眠方對小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠時間的影響 將90只小鼠，均勻隨機分為6組，即空白對照組、西藥對照組、中藥對照組、安眠方低劑量組、安眠方中劑量組、安眠方高劑量組。每組15只。灌胃給藥。空白對照組給予生理鹽水；西藥對照組給予地西泮4 mg/（kg·d）；中藥對照組給予甜夢膠囊 10.9 g/(kg·d)；安眠方低、中、高劑量組分別給予 30.1、60.2、120 g/(kg·d)生藥。 各組小鼠禁食（不禁水）12 h。按上述實驗設計劑量給藥。二次給藥間隔1 h，第二次給藥后1 h，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉 50 mg/kg（0.1 mL/kg）。立即觀察小鼠入睡潛伏期及睡眠時間。小鼠入睡標準為翻正反射消失。翻正反射消失是指背部向下保持30 s以上，并且15 s內不再出現翻正反射為止。入睡潛伏期為腹腔注射戊巴比妥鈉后至翻正反射消失的時間。睡眠時間即翻正反射消失至覺醒的時間。

1.3 統計學分析

用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析。計量資料均以“±s”表示，先經正態分布和方差齊性檢驗，再采用方差分析的組間t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 安眠方對小鼠自主活動的影響

與空白對照組相比，安眠方高劑量組小鼠自主活動顯著減少， 組間差異有統計學意義 （P＜0.01)。低、中劑量組沒有作用（P＞0.05)，而西藥對照組地西泮及中藥對照組甜夢膠囊與空白對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05），原因可能是本實驗中兩種藥物劑量選擇偏低所致。見表1。

表1 各組小鼠10 min內活動及站立次數 （±s，次）

表1 各組小鼠10 min內活動及站立次數 （±s，次）

注：與空白對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對照地西泮甜夢膠囊安眠方（低）安眠方（中）安眠方（高）劑量/g（kg·d）-1-0.001 2.725 12.0 38.7 120.4 n 11 11 11 12 12 12 F P活動次數251±66 206±78 289±61 300±31 209±68 98±55**10 080 0.000站立次數87±70 107±101 142±80 217±85 144±114 30±35*6 932 0.02

2.2 小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠時間的影響

結果顯示安眠方中、高劑量組睡眠潛伏期及睡眠時間與空白對照組差異顯著（P＜0.01），但低劑量組與空白對照組比較睡眠潛伏期無明顯差異 （P＞0.05），但睡眠時間存在明顯差異(P＜0.01)。見表 2。死亡率安眠方中劑量組與地西泮組比較組間差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 3。

表2 小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠時間 （±s，min）

表2 小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠時間 （±s，min）

注：與空白對照組比較，**P＜0.01。

組別空白對照地西泮甜夢膠囊安眠方（低）安眠方（中）安眠方（高）劑量/g(kg·d）-1-0.004 10.9 30.1 60.2 120.4 n 15 10 15 15 12 6 F P睡眠潛伏期7.00±1.60 3.70±0.48**11.0±2.48 6.40±1.55 4.08±0.29**4.14±0.69**9 762 0.01睡眠時間84.87±21.90 224.7±55.98**71.86±23.41 144.5±41.96**223.4±55.04**262.5±24.54**5 846 0.000

表3 小鼠戊巴比妥鈉睡眠實驗死亡情況 （n，%）

3 討論

鎮靜催眠藥的實驗動物行為學觀察，現代藥理實驗方法一般通過觀察受試藥對巴比妥類藥物誘導睡眠的影響[2]，觀察實驗藥物是否能延長睡眠時間，是否能縮短睡眠潛伏期。以上實驗證明，安眠方高劑量具有顯著的抑制小鼠自主活動的作用，提示安眠方有一定的中樞抑制作用。協同戊巴比妥實驗中安眠方中、高劑量組小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間與對照組相比較均有統計學意義，但安眠方中、高劑量組以及地西泮組均有部分小鼠死亡。究其原因可能是2個中樞抑制藥協同作用，高度抑制的結果，這也恰恰證明安眠方的中樞抑制作用，但兩者比較安全性存在差異（P＜0.05）。

不寐的病因與飲食、勞倦、情志密切相關，病位以心、肝、腎為主，心主神志，肝主疏泄，腎藏精，肝體陰而用陽，肝藏血，主疏泄從而調暢氣機，并且肝氣有升發之性，肝以調達為順，因此肝陽上亢為不寐的常見病機。心主血脈，藏神，心與情志活動，精神，思想，意識等密切相關；腎主水，藏精，腎水上濟于心，心腎相交，則陰陽平衡，心腎不交常誘發不寐。不寐的病理因素以陰虛、陽亢最為多見，其次還包括血虛、氣滯、痰、熱、氣虛、濕、陽虛、氣陷、食積等。陳少玫等[3]總結了仲景治療不寐有七法：陽虛不寐，溫陽安神；心腎不交，交通心腎；陰血不足，滋養陰血；郁熱擾神，清宣郁熱；濕熱擾神，化濕和胃；陰虛內熱，滋陰清熱；水熱互結，滋陰利水。寇東升[4]通過對不寐病治療的臨床觀察，認為引起不寐多以痰熱內攏神明為常見，運用溫膽湯加減治療不寐病患者100例，總有效率達到96%。鄭炎紅等[5]根據種體質學理論（即陽虛、陰虛、氣虛、氣郁、血瘀體質），以調整病人的體質偏頗，進而達到陰陽平衡；各醫家治療不寐的方法不外虛、熱、痰、濕、瘀、郁六宗。于世家教授認為不寐的主要病機為陰虛陽亢，陰陽失衡，陽不入陰，陰不斂陽。病位不外乎心、肝、腦。故而以滋陰潛陽，鎮靜安神為原則治療不寐。自擬安眠方治療失眠臨床收到良好療效。選用黃精、五味子、夜交藤養陰安神。天麻、鉤藤平肝鎮靜。酸棗仁養心除煩安神。方中天麻是一味較為常用的中藥，具平肝潛陽之功，《本經》：“天麻久服益氣力，長陰，肥健，輕身，增年”。近幾年對天麻的藥理及成份研究發現，天麻能通過抑制大鼠初級感覺神經元中的酸敏感離子通道的活力從而起到鎮痛作用，同時天麻提取物天麻素具有增強免疫力，改善腦血流量及血管順應性，促進心肌細胞能力代謝的功能[6]。通過實驗推斷天麻粉通過對神經細胞凋亡的抑制作用，起到保護神經細胞，改善睡眠的作用[7]。鉤藤含有鉤藤堿，小鼠腹腔注射具有鎮靜作用，但無明顯催眠作用；有研究證明天麻與鉤藤配伍應用對戊巴比妥鈉催眠劑量具有一定的協同作用，可延長小鼠睡眠時間，延長藥物致小鼠驚厥潛伏期[8]；酸棗仁其味酸性平，補肝，寧心，斂汗，生津。主要治療虛勞虛煩不眠、體虛多汗、津傷口渴等癥。趙啟鐸等[9]用酸棗仁總黃酮不同劑量給小鼠灌胃，結果都可以使小鼠自主活動次數明顯減少，充分證明酸棗仁有很好的鎮靜催眠作用。五味子養陰斂汗，《得配本草》謂：棗仁得五味子斂自汗，兩者配伍適用于心肝陰血不足，心神失養或虛陽上擾所致之不寐。并且有研究證明五味子木脂素及酸棗仁皂苷是兩類鎮靜催眠藥效成分[10]；夜交藤又名首烏藤，性平無毒、味甘微苦，具有養心安神之功。夜交藤中主要含有蒽醌類成分、二苯乙烯苷類成分，含量較高的代表性化合物分別為大黃素及葡萄糖苷[11]，而這兩種物質經研究證明具有明顯的改善小鼠睡眠作用[12]；黃精性味甘、平，入脾、腎、肺經，具有補氣健脾、潤肺、益腎等功能，《本草正義》稱黃精“味甘而厚膩，頗類熟地……補血補陰而養脾胃是其專長”。《神仙芝草經》亦稱黃精“寬中益氣，使五臟調良，肌肉充盛，骨髓堅強，其力增倍，多年不老，顏色鮮明，發白更黑，齒落更生”。6味經典藥物的組合，通過實驗證明具有縮短睡眠潛伏期及延長睡眠時間的作用，具有明顯的中樞抑制作用，相對于西藥的中樞抑制藥物具有更高的安全性，安眠方在有效的同時安全性更高，在臨床中更具有應用價值。

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（本文編輯 楊 瑛）

Effects of Anmian Decoction on Automatic Activity and Pentobarbital Sleep Test of Mice

WANG Yaru,YU Shijia*
(Liaoning University of Chinese Medicine,Shenyang,Liaoning 110032,China)

Objective To investigate effects of Anmian decoction on automatic activity and pentobarbital sleep test of mice.Methods (1)69 mice were divided into six groups (the control group,the Western medicine group,the traditional Chinese medicine group,Anmian Decoction low dosage group,Anmian Decoction medium dosage group and Anmian Decoction high dosage group)forautomatic activity test.The controlgroup was given with normalsaline,the Western medicine group was treated with diazepam,the traditional Chinese medicine group was treated with Tianmeng capsule,the low dosage,the medium dosage and the high dosage of Anmian decoction groups were separately taken Anmian decoction with 12,38.7,120.4 g/(kg·d)daily.Numbers of activity and stand of mice were observed in 10 minutes.(2)Another 90 mice were randomly divided into six groups in order to be tested by pentobarbital sleep test.All methods were same as automatic activity test except the low dosage,the medium dosage and the high dosage Anmian decoction groups which were administra-ted with 30.1,60.2,120.4 g/(kg·d)Anmian decoction every day,respectively.Results Numbers of activity and stand of mice in blank control group were significantly inhibited compared with the blank group (P＜0.01).The medium and high dosages of Anmian decoction in pentobarbital sodium experiment could significantly shorten the latency of sleep and prolong the time of sleep in mice comparing with the control group (P＜0.05).Conclusion Anmian decoction could inhibit the automatic activity of mice,decrease latency of sleep and prolong the time of sleep in mice.

Anmian Decoction;sleeping test;automatic activity;pentobarbital sodium； Gastrodiae Rhizoma;Uncariae Ramulus Cum Uncis

R285.5；R338.63

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.09.004

本文引用：王亞茹，于世家.自擬安眠方對小鼠自主活動及協同戊巴比妥鈉睡眠實驗的影響[J].湖南中醫藥大學學報，2017，37（9）：935-938.

2016-12-27

遼寧省教育廳重點實驗室基礎研究項目（LZ2014043）。

王亞茹，女，在讀博士研究生，研究方向：中醫藥治療糖尿病及其慢性并發癥。

* 于世家，男，教授，主任醫師，博士研究生導師，E-mail：86291222@163.com。