哈薩克族和漢族孕婦晚期妊娠可溶性血管內皮生長因子受體l與子癇前期的關系研究

張麗宏，王志梅，謝文娟，朱啟英

830054 新疆烏魯木齊市，新疆醫科大學第一附屬醫院產科

·論著·

哈薩克族和漢族孕婦晚期妊娠可溶性血管內皮生長因子受體l與子癇前期的關系研究

張麗宏，王志梅，謝文娟，朱啟英*

830054 新疆烏魯木齊市，新疆醫科大學第一附屬醫院產科

目的探討哈薩克族和漢族孕婦晚期妊娠可溶性血管內皮生長因子受體1(sFlt-1)與子癇前期(PE)的關系。方法選取2015年12月—2016年4月在新疆醫科大學第一附屬醫院產科住院并分娩的孕婦110例，其中哈薩克族PE孕婦25例(哈薩克族PE組)、漢族PE孕婦25例(漢族PE組)、哈薩克族正常妊娠孕婦30例(哈薩克族正常妊娠組)、漢族正常妊娠孕婦30例(漢族正常妊娠組)。收集4組孕婦的臨床資料，采用定量反轉錄聚合酶聯反應(qRT-PCR)測定胎盤組織中的sFlt-1表達水平。結果哈薩克族PE組孕婦體質量高于漢族正常妊娠組，差異有統計學意義(P<0.05)；哈薩克族PE組、漢族PE組孕婦收縮壓、舒張壓高于哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組，孕周短于哈薩克族正常妊娠期、漢族正常妊娠期，新生兒體質量低于哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組，差異有統計學意義(P<0.05)。漢族PE組、漢族正常妊娠組孕婦血紅蛋白高于哈薩克族PE組、哈薩克族正常妊娠組，哈薩克族PE組、漢族PE組孕婦肌酐高于哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組，差異有統計學意義(P<0.05)。漢族PE組孕婦sFlt-1表達水平高于哈薩克族PE組、哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組，哈薩克族PE組孕婦sFlt-1表達水平高于哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組，差異有統計學意義(P<0.05)；而哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組孕婦sFlt-1表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。哈薩克族重度PE、漢族重度PE、哈薩克族輕度PE、漢族輕度PE孕婦sFlt-1表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論晚期妊娠sFlt-1可能參與了PE的發生、發展，可作為預測 PE發生、發展的血液學指標，但不能作為預測PE患者病情嚴重程度的指標。

子癇；血管內皮生長因子受體1；妊娠末期；哈薩克族；漢族

張麗宏，王志梅，謝文娟，等.哈薩克族和漢族孕婦晚期妊娠可溶性血管內皮生長因子受體l與子癇前期的關系研究[J].中國全科醫學，2017，20(28)：3527-3531.[www.chinagp.net]

ZHANG L H,WANG Z M,XIE W J,et al.sFlt-1 and preeclampsia in Chinese Kazak and Han pregnant women during the third trimester of pregnancy[J].Chinese General Practice，2017，20(28)：3527-3531.

子癇前期(pre-eclampsia，PE)是一種嚴重影響孕產婦及圍生兒結局的產科重癥[1]，主要以高血壓、多器官功能障礙為特征，全球發病率為3%～5%[2]，我國的發病率為9%～10%[3]。PE嚴重時可出現昏迷、抽搐 (子癇)、心腦血管事件、胎盤早剝等，是產科重癥之一，也是孕產婦和新生兒死亡的重要原因。對于重度PE患者，無論孕周大小，如積極治療后病情仍無明顯好轉且惡化者，以終止妊娠為主要治療方案。因此，探討PE的發病原因、預防PE的發生成為近年來的研究重點。但目前PE的發病機制和病因尚未被闡明，近期研究發現血管內皮生長因子(VEGF)及其受體可能參與了PE的發生發展[4]。其中，可溶性血管內皮生長因子受體l(solublefms-like yrosinekinase receptor 1，sFlt-1)是血管內皮生長因子的強有力拮抗受體，具有強烈的抗血管生成作用，與血管內皮生長因子結合后可抑制血管內皮生長因子的表達，使血管生成障礙，導致抗血管生成與血管生成失去平衡，進而導致PE發生。新疆是一個多民族聚居的地方，其高血壓發病率高于我國的平均水平[5]，以哈薩克族發病居多。本研究分別檢測了本院哈薩克族和漢族PE、正常孕婦孕晚期分娩后胎盤組織中的sFlt-1表達水平，旨在探討兩民族孕婦晚期妊娠sFlt-1水平與PE的關系，從而為兩民族PE的診斷及預測提供依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2015年12月—2016年4月在新疆醫科大學第一附屬醫院產科住院并分娩的孕婦110例，其中哈薩克族PE孕婦25例(哈薩克族PE組)、漢族PE孕婦25例(漢族PE組)、哈薩克族正常妊娠孕婦30例(哈薩克族正常妊娠組)、漢族正常妊娠孕婦30例(漢族正常妊娠組)。納入標準：(1)孕周≥28周；(2)單胎自然受孕；(3)PE孕婦血小板計數<100×109/L，存在持續頭痛、視覺障礙、上腹部不適癥狀之一。排除標準：(1)既往有高血壓、糖尿病、心血管疾病、肝腎功能不全、甲狀腺功能亢進癥及其他內分泌和自身免疫性疾病者；(2)有胎膜早破、先兆早產、生殖道感染跡象者；(3)妊娠期間服用藥物治療者；(4)伴妊娠期糖尿病。本研究經新疆醫科大學第一附屬醫院倫理委員會批準，納入者均知情同意。

1.2 診斷標準 PE的診斷標準為：妊娠滿20周后首次出現收縮壓≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和/或舒張壓≥90 mm Hg，尿蛋白≥0.3 g/24 h或尿蛋白定性(+)以上。以上述癥狀伴或不伴上腹部不適、頭痛等為輕度PE；以血壓和尿蛋白持續升高，收縮壓≥160 mm Hg和/或舒張壓≥110 mm Hg，或尿蛋白≥5 g/24 h，發生母體臟器功能不全或胎兒并發癥為重度PE。正常妊娠孕婦的血壓<140/90 mm Hg[6]。

1.3 研究方法

1.3.1 一般資料收集 通過查閱病例的方法，收集4組孕婦一般資料，包括年齡、體質量、血壓、孕周、既往史、臨床癥狀及新生兒體質量等。

1.3.2 實驗室指標檢測 根據研究需要，抽取孕婦晨起空腹肘靜脈血4 ml，放置自凝。在4 ℃下，以2 000 r/min離心10 min，取上層血清，-80 ℃凍存待檢。采用雙抗體酶聯免疫吸附試驗法檢測血紅蛋白、血小板計數、肌酐、尿素氮，試劑盒購自美國K&D System 公司，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.3 sFlt-1測定 (1)標本采集：于胎盤娩出后10 min內收集胎盤標本，取臍帶附著處胎兒母體面的胎盤組織2.0 cm×2.0 cm×2.0 cm，置于-70 ℃液氮中保存。選取胎盤組織時，應避開血管區、鈣化灶及壞死區。(2)sFlt-1檢測：用研缽研磨組織樣本，采用Trizol提取組織樣本中總RNA并進行反轉錄；采用定量反轉錄聚合酶聯反應(qRT-PCR)測定組織樣本中的sFlt-1表達水平。反應體系(20 μl)包含2×SuperReal PreMix Plus(10 μl)、上游引物(10 uM)(0.6 μl)、下游引物(10 uM)(0.6 μl)、互補脫氧核糖核酸(cDNA)(100 mg)、50×ROX Reference Dye(0.4 μl)、Rnase-Free ddh20(至20 μl)；反應程序為95 ℃ 15 min，95 ℃ 10 s、58 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s循環40次。分別用目的基因引物和內參基因引物進行擴增，同時在60～95 ℃進行溶解曲線分析，以2-ΔΔCt計算目的基因相對定量。(3)RNA完整性檢測：將分別提取的總RNA行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射光下觀察并拍照?？梢妰蓷l清晰的RNA條帶(18S和28S)，表明RNA提取成功，RNA完整性好，無降解。下方可能會觀察到1個更小稍微擴散帶，由低分子量RNA〔轉運RNA(tRNA)和5S核糖體RNA等〕組成。采用核酸分析儀，檢測在波長260 nm和280 nm處的吸光度比值(A260/A280)均為1.9～2.1，表明RNA純度較高；提取的RNA濃度為200～600 ng/ml，滿足后續試驗要求(見圖1)。

注：A為哈族克族PE組，B為漢族PE組，C為哈薩克族正常妊娠組；D為漢族正常妊娠組；PE=子癇前期

圖1 4組孕婦胎盤組織中RNA 的完整性檢測

Figure1 Integrity detection of RNA in the placental tissues from the 4 groups of pregnant women

2 結果

2.1 4組孕婦一般情況比較 4組孕婦年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)；4組孕婦體質量、收縮壓、舒張壓、孕周及新生兒體質量比較，差異有統計學意義(P<0.05)。其中，漢族正常妊娠組孕婦體質量與哈薩克族PE組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組孕婦收縮壓、舒張壓、孕周及新生兒體質量與哈薩克族PE組、漢族PE組比較，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 4組孕婦實驗室檢測指標比較 4組孕婦血紅蛋白、肌酐比較，差異有統計學意義(P<0.05)；4組孕婦血小板計數、尿素氮比較，差異無統計學意義(P>0.05)。其中，漢族PE組、漢族正常妊娠組孕婦血紅蛋白與哈薩克族PE組、哈薩克族正常妊娠組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組孕婦肌酐與哈薩克族PE組、漢族PE組比較，差異有統計學意義(P<0.05，見表2)。

2.3 4組孕婦sFlt-1表達水平比較 4組孕婦sFlt-1表達水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。其中，漢族PE組孕婦sFlt-1表達水平與哈薩克族PE組、哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；哈薩克族PE組孕婦sFlt-1表達水平與哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；而哈薩克族正常妊娠組、漢族正常妊娠組孕婦sFlt-1表達水平比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表3)。

Table2 Levels of serum hemoglobin,platelet count,creatinine and urea nitrogen in 4 groups of pregnant women

組別例數血紅蛋白(g/L)血小板計數(×109/L)肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)哈薩克族PE組25 102±18 248±8360±18 5.2±2.2漢族PE組25116±16a216±7758±16 6.5±9.9哈薩克族正常妊娠組30102±12b267±8347±9ab3.2±1.0漢族正常妊娠組30116±13ac235±4748±8ab3.8±1.1F值8.3982.4977.1672.472P值<0.0010.063<0.0010.065

注：與哈薩克族PE組比較，aP<0.05；與漢族PE組比較，bP<0.05；與哈薩克族正常妊娠組比較，cP<0.05

表1 4組孕婦一般情況比較

注：PE=子癇前期；與哈薩克族PE組比較，aP<0.05；與漢族PE組比較，bP<0.05;1 mm Hg=0.133 kPa

2.4 哈薩克族和漢族不同嚴重程度PE孕婦sFlt-1表達水平比較 根據PE嚴重程度，將PE孕婦分為哈薩克族重度PE組、漢族重度PE組、哈薩克族輕度PE組、漢族輕度PE組4組。4組孕婦sFlt-1表達水平比較，差異無統計學意義(χ2=1.555，P=0.248，見表4)。

表3 4組孕婦sFlt-1表達水平比較

注：與哈薩克族PE組比較，aP<0.05；與漢族PE組比較，bP<0.05；sFlt-1=可溶性血管內皮生長因子受體1

Table4 Expression levels of sflt-1 in Kazak severe and mild PE subgroups,Han severe and mild PE subgroups

組別例數sFlt-1哈薩克族重度PE組102.27±1.92漢族重度PE組112.89±0.84哈薩克族輕度PE組151.46±0.65漢族輕度PE組143.06±0.34

3 討論

PE是妊娠期婦女特有的疾病，其發病機制目前尚不明確，可能與內皮損傷、炎性反應、氧化應激及腎素-血管緊張素失調有關[7]。目前比較公認的理論是胎盤淺著床和血管內皮的損傷學說，滋養細胞對子宮內膜的侵入過淺和子宮螺旋動脈重鑄障礙是PE發病的中心環節[1]。

VEGF是一種分泌糖基化多肽因子，在促進血管生成和維持血管內皮細胞的正常生理功能方面發揮著重要作用，在妊娠晚期主要參與調節血管內皮細胞的通透性。VEGF有兩個受體，分別為血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1)和血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2)，其中VEGFR-1根據分子結構的差異又可分為膜性VEGFR-1(mVEGFR-1)和sFlt-1。sFlt-1是強大的抗血管生成因子，其與VEGF結合后，可抑制VEGF的活性，引起血管生成障礙并影響血管壁的完整性和通透性，從而導致 PE發生[8]。

既往研究結果表明，PE孕婦在其臨床癥狀出現前6～11周，血清中即有明顯的sFlt-1升高，而在產后48 h，sFlt-1水平恢復至基礎水平，提示sFlt-1與PE發病密切相關[9]。還有研究結果顯示，sFlt-1表達水平上升程度與病情的嚴重程度呈正相關[10-11]，同時體內和體外試驗均證實，胎盤組織缺氧后sFlt-1表達水平上升[12]。本研究利用qRT-PCR技術檢測了正常妊娠和PE孕婦胎盤組織中的sFlt-1表達水平，發現各組孕婦胎盤組織中均存在sFlt-1表達，且PE孕婦較正常妊娠孕婦明顯升高，這與MAYNARD等[5]的研究結果一致。原因可能為哈薩克族和漢族孕婦胎盤組織中的sFlt-1參與了PE的發生，可作為預測PE發生、發展的血液學指標。

PE可嚴重影響孕婦及圍生兒的預后，10%～15%的孕婦死亡與PE直接相關[13]。在 PE中隨著病情的進展往往需提早終止妊娠來改善孕婦預后及圍生兒結局。本研究發現，PE孕婦的血壓升高、腎功能不同程度損害，致使胎兒早產、新生兒體質量明顯低下。而哈薩克族PE孕婦較漢族PE孕婦的血紅蛋白明顯低下，推測哈薩克族PE孕婦的病情較漢族更為嚴重。本研究結果還顯示，哈薩克族PE組孕婦胎盤組織中的sFlt-1表達水平較漢族明顯低下，而哈薩克族正常妊娠組孕婦sFlt-1表達水平與漢族正常妊娠組間無差異。推測兩民族孕婦胎盤組織中的sFlt-1基礎水平無差異，但哈薩克族孕婦的PE病情發展較漢族快，故而胎盤組織中sFlt-1來不及表達，導致其水平低于漢族PE孕婦。另外，本研究還根據病情嚴重程度對兩民族PE孕婦進行了分組分析。發現哈薩克族重度PE、漢族重度PE、哈薩克族輕度PE、漢族輕度PE孕婦胎盤組織中的sFlt-1表達水平無差異，提示sFlt-1表達水平不能用來評估PE的病情嚴重程度，與VERLOHREN等[4]和KIM等[10]的研究結果不一致。

這可能與哈薩克族自身生活習慣及發病特點有關，新疆哈薩克族主要以游牧業為生，常年居住在海拔較高的地區，以肉類為主食，鮮少有蔬菜及瓜果，距離市區較遠，醫療條件差、文化水平低、孕婦孕期產檢知識缺乏等，導致孕婦易出現高脂代謝障礙性疾病、貧血等癥狀。哈薩克族為高血壓高發人群，如發生PE其病情進展迅速、病情重，需提前結束妊娠來緩解病情，因其發病時間短，故而sFlt-1來不及在胎盤組織中表達，有病情重而sFlt-1的表達水平低下的可能性。

PE的發生與誘血管生成因子和抗血管生成因子之間的失衡有關[14-15]，sFlt-1是強大的抗血管生成因子。在本研究中，哈薩克族和漢族PE孕婦胎盤組織中sFlt-1表達水平均明顯升高，但不同病情嚴重程度兩民族PE孕婦的表達水平無差異，提示sFlt-1參與了PE的發生、發展，可作為哈薩克族和漢族預測、診斷PE的生化指標，但不能作為評估PE患者病情嚴重程度的指標。本研究的樣本量較小、研究對象選取的區域范圍較小、研究時限較短，因此所得結果尚有待大樣本進一步研究的證實。另外，本課題組開展的有關臍帶血中sFlt-1表達水平的后續研究正在進行，希望可以更好地預測和預防PE的發生，進而改善母嬰結局。

作者貢獻：張麗宏進行文章的構思與設計、結果的分析與解釋，參與數據收集與整理，負責撰寫論文；王志梅進行研究的實施與可行性分析、英文的修訂，負責文章的質量控制及審校；謝文娟參與數據收集與整理；朱啟英進行論文的修訂，對文章整體負責，監督管理。

本文無利益沖突。

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sFlt-1andPreeclampsiainChineseKazakandHanPregnantWomenDuringtheThirdTrimesterofPregnancy

ZHANGLi-hong,WANGZhi-mei,XIEWen-juan,ZHUQi-ying*

ObstetricsDepartment,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054,China

ObjectiveTo explore the relationship between the soluble vascular endothelial growth factor receptor 1(sFlt-1) and preeclampsia(PE) in Chinese Kazakh and Han pregnant women in the third trimester of pregnancy.MethodsWe enrolled 110 pregnant women who delivered in Obstetrics Department,The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University between December 2015 and April 2016 and divided them into Chinese Kazakh pregnant women with PE(Kazakh PE group,n=25),Chinese Han pregnant women with PE(Han PE group,n=25),normal Chinese Kazakh pregnant women(normal Kazakh group,n=30) and normal Chinese Han pregnant women(normal Han group,n=30).We obtained the clinical data of all the participants.The level of sFlt-1 in the placental tissues was measured by qRT-PCR.ResultsThe average weight of the Kazakh PE group was higher than that of normal Han group(P<0.05).The average levels of systolic and diastolic blood pressure were higher in the PE groups than in the normal groups(P<0.05).Both PE groups had shorter gestational weeks than the normal groups(P<0.05).The average neonates delivered by PE groups demonstrated lower birth weight compared with those delivered by the normal groups(P<0.05).The average hemoglobin levels were found to be higher in Han groups than in the Kazakh groups(P<0.05).PE groups presented higher average creatinine levels than the normal groups(P<0.05).The expression level of sFlt-1 in the Han PE group was identified to be the highest(P<0.05).Kazak PE group showed higher expression level of sFlt-1than the normal groups(P<0.05).The expression level of sFlt-1 did not differ significantly between normal Kazak group and normal Han group(P>0.05).The Kazak severe PE subgroup,Kazak mild PE subgroup,Han severe PE subgroup,and Han mild PE subgroup showed similar expressional levels of sFlt-1(P>0.05).ConclusionsFlt-1,a haematological marker,may be involved in the development of preeclampsia during the third trimester of pregnancy.PE can be identified by the expression level of sFlt-1,while the severity of PE can not.

Eclampsia;Vascular endothelial growth factor receptor-1;Pregnancy trimester,third;Kazak nationality;Han nationality

新疆維吾爾自治區自然科學基金資助項目(2014211C041)

*通信作者：朱啟英，主任醫師，博士生導師；E-mail：zhuqiyingxq@sina.com

R 714.245

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.28.015

*Correspondingauthor:ZHUQi-ying,Chiefphysician,Doctoralsupervisor;E-mail:zhuqiyingxq@sina.com

2017-04-18；

2017-09-06)

(本文編輯：王鳳微)