女貞子中齊墩果酸的提取工藝及其抗氧化活性

王瑩　陳圓　聶倩倩

摘要：以女貞子為原料，乙醇溶液為溶劑，超聲輔助提取女貞子中的齊墩果酸；通過單因素試驗對影響女貞子中齊墩果酸得率的料液比、提取時間、提取溫度以及乙醇濃度進行探討，在此基礎上以正交試驗優化工藝條件。結果表明，當料液比為1 ∶8、提取時間為30 min、提取溫度為30 ℃、乙醇濃度為85%時，齊墩果酸的得率達到258%；女貞子中齊墩果酸對1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH自由基）具有一定的清除能力，當齊墩果酸濃度達到 10 mg/mL 時，齊墩果酸對DPPH自由基的清除率高達8580%。

關鍵詞：女貞子；齊墩果酸；超聲；提取；抗氧化活性

中圖分類號： R2842文獻標志碼：

文章編號：1002-1302（2017）16-0174-03

收稿日期：2016-04-14

基金項目：江蘇省大學生實踐創新訓練計劃（編號：201512806013Y）。

作者簡介：王瑩（1983—），女，碩士，講師，主要從事藥物分析研究。Tel：（0523）86158186；E-mail：wonderful899@126com。

中藥材女貞子是木樨科女貞、大葉女貞的干燥成熟果實，主要分布在浙江省、江蘇省、湖南省等地。女貞子中含有齊墩果酸、多糖、熊果酸、氨基酸、揮發油等成分，其中重要的生物活性成分齊墩果酸具有護肝腎、抗病毒、抗炎、強心、利尿、抗腫瘤、降血糖以及鎮靜等作用，廣泛應用于食品、醫藥、化妝品等領域[1-5]。本研究以女貞子為原料，以乙醇溶液為溶劑，采用單因素和正交試驗對女貞子中齊墩果酸的提取工藝進行了優化，并研究了齊墩果酸的抗氧化活性。

1材料與方法

11材料

111原料處理

本試驗采用來自浙江省溫州市經炮制過的女貞子原料。在60 ℃條件下真空干燥，采用多功能粉碎機粉碎，過20目篩，密封貯藏，備用。

112試劑與儀器

齊墩果酸標準品（色譜純HPLC≥98%，成都艾科達化學試劑有限公司），其余試劑均為市售分析純。

HK-02A多功能粉碎機（上海燁昌食品機械有限公司）、BSA124S電子天平（賽多利斯）、KH-400KDV數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）、UV754N紫外-可見分光光度計（上海精科儀器有限公司）、RE-52旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）、HH-1數顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）、M100 10 ～100 μL移液槍（寧波市群安實驗室儀器有限公司）

12方法

121標準曲線的繪制

根據邸金明等對齊墩果酸含量測定方法的研究，本試驗選擇紫外分光光度法測定齊墩果酸的含量，選定的檢測波長為215 nm。

準確稱取齊墩果酸標準品0060 0 g至100 mL容量瓶中，用甲醇溶解后定容，搖勻，作為標準品溶液（濃度為 060 mg/mL）。分別移取齊墩果酸標準品溶液050、100、150、200、250 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻。在215 nm處分別測定其吸光度。以齊墩果酸標準品濃度（mg/L）對吸光度繪制標準曲線，進行線性回歸得標準曲線方程，D215 nm=0005 6C+0021 6，r2=0995。結果表明，當齊墩果酸濃度在30～150 mg/L范圍內時與吸光度具備良好的線性關系。

122超聲波輔助提取

準確稱取50 g干燥的女貞子粉末于250 mL具塞錐形瓶中，加入一定量的乙醇，按照設定的溫度、時間進行超聲輔助提取，提取結束后，減壓抽濾，旋蒸，除去乙醇，得浸膏，將浸膏分散于10 mL蒸餾水中，用適量水飽和的正丁醇分3次進行萃取，收集萃取液，再次用旋轉蒸發儀除去正丁醇直至無醇味，用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中。準確移取050 mL提取液稀釋定容至10 mL，按“121”法進行測定。

女貞子中齊墩果酸得率=溶液中齊墩果酸的濃度×稀釋倍數×定容體積/女貞子粉末質量×100%=（D215 nm-0021 6）/0005 6×（10/050）×50×10-6/50×100%。

123女貞子中齊墩果酸的抗氧化作用試驗

準確吸取 020 mL 不同濃度的女貞子齊墩果酸提取液于比色管中，加入預先配制好的4 mL 015 mmol/L的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH自由基）甲醇溶液，搖勻后暗處放置 30 min，以樣品溶劑為對照，測定其在525 nm處的吸光度D，同時測定樣品溶液在525 nm處的吸光度D0及DPPH甲醇溶液在525 nm處的吸光度D1[7-9]。

[JZ]清除率=[1-（D-D0）/D1]×100%。

2結果與分析

21單因素試驗

211料液比對提取齊墩果酸的影響

準確稱取50 g女貞子粉末5份，分別加入30、35、40、45、50 mL 90%乙醇（即料液比分別為1 ∶6、1 ∶7、1 ∶8、1 ∶9、1 ∶10，g ∶mL），在30 ℃下超聲30 min提取，結果見圖2。

由圖2可知，隨著料液比的增大，從女貞子中提取齊墩果酸的得率逐步提高，當料液比達到1 ∶8時，齊墩果酸得率達到峰值，之后基本保持不變。這是由于料液比較小時，乙醇溶液與藥材間濃度梯度小，傳質推動力相應較小[10]，齊墩果酸沒有全部溶出，當料液比達到1 ∶8時，齊墩果酸基本溶出。

212超聲時間對提取游離齊墩果酸的影響

準確稱取 50 g 女貞子粉末5份，倒入具塞錐形瓶中，各加入40 mL 90%乙醇，在30 ℃條件下分別超聲0、15、30、45、60 min。由圖3可見，齊墩果酸的得率隨著超聲時間的增長不斷增加，超聲時間超過30 min后，齊墩果酸的得率趨于穩定。

[FK（W11][TPWY3333tif][FK）]

在傳統醇提工藝中，女貞子中齊墩果酸的回流提取時間長達2～3 h[10-11]。與傳統工藝相比，超聲縮短了提取所需時間，效率大幅度提高。這可能是由于超聲的空化作用有效地擊破了植物細胞壁，使得細胞的通透性顯著增大，加速齊墩果酸溶入乙醇溶液中[12]。

213提取溫度對提取游離齊墩果酸的影響

準確稱取 50 g 女貞子粉末5份，各加入40 mL 90%乙醇，分別在20～60 ℃條件下超聲30 min，結果見圖4。

[FK（W11][TPWY4444tif][FK）]

由圖4可知，提取溫度在20～40 ℃內，女貞子中齊墩果酸的得率隨著提取溫度的升高而略有增大，當溫度超過 40 ℃，齊墩果酸的得率基本不變。

214乙醇濃度對提取游離齊墩果酸的影響

準確稱取 50 g 女貞子粉末5份，分別加入40 mL濃度為80%、85%、90%、95%、100%的乙醇，在超聲溫度30 ℃、提取時間30 min條件下進行超聲提取，結果見圖5。

由圖5可見，在其他條件不變的情況下，隨著乙醇濃度的增大，齊墩果酸的得率先增大后減小，當乙醇濃度為85%時，齊墩果酸的得率最高。這是由于齊墩果酸在50%～85%乙醇溶液中，溶解度隨醇濃度的升高而增加，即醇濃度升高有利于齊墩果酸的溶出；但當乙醇體積分數超過85%時，高濃度的乙醇溶液具有強烈的吸水作用，影響女貞子細胞的溶脹，抑制齊墩果酸的釋放，從而導致齊墩果酸得率下降[14]。

22女貞子中齊墩果酸提取條件的優化

221正交試驗

在單因素試驗的基礎上，以料液比（A）、提取時間（B）、提取溫度（C）、乙醇濃度（D）為因素，采取 L9（34） 正交進行試驗，正交設計見表1，所得結果見表2。以齊墩果酸的得率為指標，通過直觀分析正交試驗的結果，優化女貞子中齊墩果酸的最佳提取條件。

聲時間對女貞子中齊墩果酸得率的影響最大，料液比次之。由正交試驗結果可知，較優的提取條件為A3B2C1D2，即料液比為1 g ∶8 mL、超聲時間為30 min、提取溫度為30 ℃、乙醇濃度為85%。

222驗證試驗結果

采用正交試驗確定的優化條件進行提取，女貞子中齊墩果酸得率平均達258%（表3），高于表2中所有試驗組合的齊墩果酸得率。

23女貞子中游離齊墩果酸的抗氧化活性

女貞子中游離的齊墩果酸對DPPH自由基具有一定的清除能力，且清除能力與齊墩果酸濃度呈現明顯的量效關系（圖6），即隨著齊墩果酸濃度的升高，對DPPH自由基的清除能力不斷升高。當齊墩果酸濃度為02 mg/mL時，齊墩果酸對DPPH自由基的清除率最小，僅有2720%。而當齊墩果酸濃度達到10 mg/mL時，齊墩果酸對DPPH自由基的清除率高達8580%，且趨于穩定。

3結論與討論

本試驗采用超聲輔助提取女貞子中的齊墩果酸，在提取過程中，料液比、超聲時間、提取溫度以及乙醇濃度等因素均能直接影響齊墩果酸的得率。與傳統溶劑提取法相比，超聲輔助提取無需高溫，提取效率高。當料液比為1 g ∶8 mL、超聲時間為30 min、提取溫度為30 ℃、乙醇濃度為85%時，齊墩果酸得率為258%。齊墩果酸對DPPH具有較好的清除能力，清除能力隨著齊墩果酸質量濃度的增加而增強，當質量濃度為10 mg/mL時， 齊墩果酸對DPPH自由基的清除率高達8580%。

參考文獻：

呂佳飛，李文飛，馮偉，等 微波法提取紅棗中齊墩果酸的工藝條件優化研究[J] 化工技術與開發，2010，39（6）：21-24

陳秋實，吳杰，李威，等 從木瓜成葉中提取齊墩果酸及羥丙基-β-環糊精包合工藝研究[J] 中藥材，2010，3（5）：804-806

[3]劉智華 女貞子齊墩果酸的提取及其降血糖作用研究[D] 楊凌：西北林業科技大學，2007

[4]吳林蔚，蒲薔，陳曉珍，等 齊墩果酸對卵巢癌細胞IGROV1和乳腺細胞MDA-MB-231生長的抑制作用[J] 應用與環境生物學報，2010，16（2）：202-204

[5]趙龍鉉，賀興隆，金禮吉，等 齊墩果酸和甘草次酸衍生物的合成與表征及抗癌活性研究[J] 遼寧師范大學學報（自然科學版），2010，33（4）：474-476

[6]邸金明，劉彬彬，趙婧，等 齊墩果酸5種含量測定方法的比較研究[J] 西北藥學雜志，2013，28（5）：483-486

[7]王興娜，汪晶，黃午陽，等 青梅果實不同極性組分的抗氧化活性[J] 江蘇農業學報，2016，32（1）：211-215

[8]彭長連，陳少薇，林植芳，等 用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J] 生物化學與生物物理進展，2000，27（6）：658-661

[9]朱海軍，生靜雅，張普娟，等 貯藏溫度對薄殼山核桃抗氧化功能及品質的影響[J] 江蘇農業學報，2015，31（2）：449-453

[10]黃湘蘭，彭拓華 正交試驗對女貞子提取工藝的優選[J] 中藥材，2000，23（10）：644-645

[11]郭宇潔，任燁，葛爭艷，等 正交試驗法比較女貞子中齊墩果酸與特女貞苷的乙醇提取工藝[J] 中成藥，2013，35（2）：277-281

[12]楊義芳，孔德云 中藥提取分離新技術[M] 北京：化學工業出版社，2010

[13]唐鳳翔，朱忠敏，李小虎 乙醇-水體系中齊墩果酸的溶解度和反應結晶介穩區[J] 高校化學工程學報，2011，25（5）：893-896

[14]王瑩，王華，張龍，等 響應面法優化朝天椒中辣椒堿類物質的提取工藝[J] 中國調味品，2015，40（3）：37-41