程序性死亡因子5在Graves病患者表達情況的初步研究

王凱悅+閆茗茗+李闖+趙杰

摘要：目的：探討程序性死亡因子5在Graves病（GD）患者外周血單個核細胞（PBMC）的表達。方法：RT-PCR法檢測50例Graves病患者外周血單個核細胞PDCD5mRNA的表達水平。結果：與正常對照比較，PDCD5mRNA在GD患者PBMC中表達升高（P<0.05），患者PDCD5mRNA表達水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關（均P<0.01），與血清T4水平及|lgTSH|呈顯著負相關（均P<0.05）。結論：PDCD5mRNA在GD患者PBMC表達升高，PDCD5參與了GD淋巴細胞凋亡平衡異常。

關鍵詞：程序性死亡因子5；PBMC；GD

中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2017）42-0044-02

Graves病（Graves disease，簡稱GD）是一種較為常見的自身免疫性甲狀腺病（AITD）。GD又稱毒性彌漫性甲狀腺腫，是甲狀腺功能亢進的最常見類型，約占全部甲亢的90%，本病為一多系統損害綜合征，一般認為細胞免疫及體液免疫參與了其發病過程。研究發現細胞凋亡參與了自身免疫性甲狀腺病的發病，甲狀腺細胞凋亡的調控異常是導致GD發病的主要原因之一[1]。

程序性死亡因子5（PDCD5）是由北京大學人類疾病基因研究中心從正常培養的白血病細胞株TF-1細胞中克隆到的凋亡相關新基因。PDCD5定位于染色體19q12- q13.1，由6個外顯子和5個內含子組成，cDNA全長為559bp[2]。研究表明，PDCD5可作為凋亡促進劑參與多種腫瘤、自身免疫性疾病的發生發展過程[3-5]。本研究旨在從mRNA水平研究Graves病患者PDCD5表達情況變化。

一、對象和方法

1.研究對象與分組：GD組：GD患者50例，男15例，女35例，平均年齡42.50±10.61歲。所有病人都接受了必要的臨床檢查，常規抽取患者空腹靜脈血，實驗室檢測甲狀腺功能指標及相關抗體參數，甲狀腺攝131I率的測定和甲狀腺ECT顯像，均為新發病未給予任何藥物治療的初診患者。

正常對照組（NC）50例，為本院健康查體人員，年齡36.10±10.38歲，男18例，女32例。

2.方法：（1）外周血單個核細胞PDCD5mRNA的表達：采集所有研究對象的空腹肘靜脈血5ml，采用異硫氰酸胍一步法提取單個核細胞，用RT-PCR方法提取單個核細胞總mRNA，逆轉錄合成cDNA第一鏈，加PDCD5及β-actinPCR引物，在Taq酶作用下進行PCR。反應條件為：預變性：94℃ 3min，94℃ 40秒，61℃ 45秒，72℃ 50秒，循環35次，72℃延伸5分鐘。8μlPCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射儀觀察，BIORAD-GD2000凝膠成像系統攝取圖像并用Quantity One軟件測量灰度，基因表達水平用PDCD5/β-actin灰度比。

（2）PDCD5上游引物5-CAA CAG GAA GCA AAG CAC-3；下游引物為5-GAT CTT AAC TTC TGT CCT AGAC-3。β-actin上游引物5-CCC AGG CAC CAG GGC GTG ATG GT-3；下游引物為5-GGA CTC CAT GCC CAG GAA GGA A-3。

（3）統計學處理：數據結果以均值±標準差表示，兩組均數間比較采用雙尾Student's t檢驗。對可能影響PDCD5表達水平的因素進行直線相關分析。變量TSH呈偏態分布，經過對數轉換后符合正態分布，并采用對數形式進行統計分析。P<0.05差異具有顯著意義，所有數據采用SPSS14.0進行統計處理。

二、結果

1.外周血單個核細胞PDCD5mRNA的表達（表1）：GD組顯著高于正常對照組（P<0.05）。

2.PDCD5mRNA表達水平與臨床參數的直線相關關系分析。運用統計學直線相關分析，患者PDCD5mRNA表達水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關（均P<0.01），與血清T4水平及|lgTSH|呈顯著負相關（均P<0.05），與患者年齡、病史、血T3、FT3、FT4和TRAb水平無顯著相關性（表2）。

三、討論

PDCD5mRNA在Graves病患者中的表達量高于正常對照組，且與正常人比較差異有顯著性（P<0.05）。PDCD5在Graves病PBMC中的過表達，提示PDCD5可能是Graves病發病的重要因素，并且這種表達量的增加在轉錄水平就已經開始了。GD患者外周血單個核細胞PDCD5的表達與甲狀腺自身抗體TM-Ab、TG-Ab滴度呈正相關，與血清T4水平及|lgTSH|呈負相關。GD時產生的自身抗體主要包括TSH受體抗體、TM-Ab、TG-Ab。TM-Ab水平常與AITD活動有關。本研究結果顯示，PDCD5表達水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關，可以認為PDCD5與GD病情進展密切相關。血清TSH及T4是反映GD的主要指標，隨著GD病情的逐漸加重，血清中TSH下降及T4數值升高。本研究結果表明GD病情越加重反而PDCD5表達越低，考慮PDCD5主要在發病初期起作用發揮其促凋亡的作用。已有的研究表明，凋亡促進基因及凋亡抑制基因的表達失衡在GD的發病中有重要作用[6]，甲狀腺細胞中抑制凋亡基因占優勢，使甲狀腺細胞凋亡減少。考慮外周血淋巴細胞可能存在類似的凋亡機制，隨著GD病情的進展凋亡抑制因素逐漸占優勢，所以PDCD5的表達反而減少。

綜上所述，PDCD5在Graves病患者外周血單個核細胞中表達增加，參與了Graves病的發病過程，研究PDCD5的表達對于探索細胞凋亡在Graves病發病過程中的影響有重要的意義。

參考文獻：

[1]白耀.甲狀腺病學基礎與臨床[M].北京：科學技術文獻出版社，2004：466-467.

[2]Chen YY，Sun RH，Han WL，et al.Nuclear translocation of TFAR19（PDCD5）：an early signal for apoptosis[J].FEBS letter，2001，509（27）：191-196.

[3]張雅菲，張連峰.原發性肝細胞癌組織中PDCD5、caspase一3蛋白的表達變化及意義[J].山東醫藥，2010，50（10）：36-37.

[4]陳占昆，呂厚山，王寧.PDCD5在類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞凋亡中表達上調[J].中國生物化學與分子生物學報，2008，24（6）：563-568.

[5]余康康，劉順愛，李文凡，等.促凋亡因子PDCD5與Fas在肝癌及其癌旁組織中的表達[J].世界華人消化雜志，2008，16（16）：1820-1824.

[6]史治宙，姬秋和，王瑞華，等.T3對外周血淋巴細胞腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體表達及細胞凋亡的影響[J].中華內分泌代謝雜志，2005，21（5）：458-459.endprint