不同樣本和方法對測定大鼠血液生化指標(biāo)的影響

李 迎，崔曉霞，尚世臣，趙 權(quán)，李桂軍，王冬平*，陳振文

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，北京 100071； 2.首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物科學(xué)部，北京 100069； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長春 130118)

研究報告

不同樣本和方法對測定大鼠血液生化指標(biāo)的影響

李 迎1,3，崔曉霞1，尚世臣1，趙 權(quán)3，李桂軍1，王冬平1*，陳振文2*

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，北京 100071； 2.首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物科學(xué)部，北京 100069； 3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長春 130118)

目的比較血清和血漿兩種不同樣本和不同測試方法對大鼠血液生化指標(biāo)測定值、血糖測定值的影響。方法用血糖儀測定來源相同大鼠的全血血糖值，然后對其血清和血漿樣本進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)檢測。結(jié)果在血清與血漿樣本進(jìn)行19個常規(guī)生化項目檢測中，ALB、TP、ALP、CHOL、URIC、GLU、Mg、LD、Ca差異有顯著性(P< 0.05),在其余10項血清與血漿檢測值比較中，差異無顯著性(P> 0.05)。不同樣本和不同方法對血糖的檢測結(jié)果分析差異有顯著性(P< 0.05)。結(jié)論不同樣本和方法對血清與血漿中部分生化項目檢測時存在差異，不同方法和樣本檢測血糖結(jié)果也存在差異。

生化指標(biāo)；血清；血漿；大鼠

實驗動物血液生化參考值的建立是判斷動物健康狀況和選擇合格動物的標(biāo)準(zhǔn)，是臨床醫(yī)療和生物醫(yī)學(xué)研究中的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù)[1]。隨著科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，實驗動物的血液生理生化指標(biāo)的檢測方法和儀器發(fā)生了很大的變化，檢測數(shù)據(jù)與傳統(tǒng)的方法有一定的差異。為確定檢測數(shù)據(jù)的可比性，本實驗采用全自動生化儀和血糖儀對同一來源成年大鼠的血清和血漿進(jìn)行常規(guī)生化指標(biāo)測定，探討血清和血漿對常規(guī)生化指標(biāo)檢測結(jié)果的影響以及不同的檢測方法和樣本對血糖檢測指標(biāo)的影響。

1 材料和方法

1.1實驗動物

清潔級Wistar雌性大鼠29只，8周齡，體重180～220 g。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供[SCXK(軍)2012—0004]，動物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境內(nèi)，日常飼喂以60Co照射消毒飼料及飲用消毒用水，實驗于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心實驗室進(jìn)行[SYXK(軍)2012—0021]。本實驗通過首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物和動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)(No.AEEI-2017-032)。

1.2主要試劑與儀器

Beckman公司提供的原裝配套試劑；乙二胺四乙酸二甲(EDTA-K2)作為抗凝劑；羅康全活力型血糖試紙、羅康全活力型血糖儀(型號：Accu-Chek Active、廠家：德國羅氏診斷有限公司)；Beckman全自動生化分析儀(型號：CX5PRO、廠家：美國貝克曼庫爾特公司)；低溫離心機(jī)(型號：CF16RX、廠家：HITACHI)。

1.3實驗方法

1.3.1 血液標(biāo)本的采集和處理

Wistar大鼠空腹12～24 h后，眼眶靜脈取血，靜止30 min，5000 r/min離心10 min制備血清，同時在抗凝管加入血液顛倒混勻(抗凝劑枸櫞酸鈉和血液的比例為1∶9)，離心(離心條件同上)后所得的上清液即為血漿。

1.3.2 血糖儀的檢測

采血即時應(yīng)用血糖儀測定血糖值。

1.3.3 樣品檢測指標(biāo)

應(yīng)用Beckman全自動生化分析儀CX5的血清和血漿兩種檢測模式檢測，檢測項目包括：鎂(Mg)、鈣(Ca)、磷(PO4)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG-B)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLD)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LD)、肌酸激酶(CK)、淀粉酶(AMY7)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR-S)、尿酸(URIC)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1檢測結(jié)果及統(tǒng)計分析

19項指標(biāo)檢測的結(jié)果：ALB、CHOL、URIC、GLU差異有顯著性(P< 0.05)，TP、ALP、Mg、LD、Ca差異有顯著性(P< 0.01)，其它指標(biāo)差異無顯著性。(見表1)。

2.2不同的檢測方法和介質(zhì)對血糖檢測的影響

血糖儀直接測定的血糖值與生化儀測定的血清和血漿中葡萄糖值(見圖1)。不同介質(zhì)對常規(guī)生化指標(biāo)檢測結(jié)果的比較使用ANOVA單因素方差分析，同時進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊時使用LSD統(tǒng)計方法進(jìn)行組間兩兩比較，P< 0.05為差異有顯著性(見表2)。

表1 血清與血漿19項生化指標(biāo)檢測結(jié)果比較

注：與血清比，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05，**P<0.01，vs. the serum.

表 2 不同的檢測方法和介質(zhì)對血糖檢測的結(jié)果

注：括號內(nèi)的數(shù)據(jù)為動物數(shù)。與血糖儀值比較，*P< 0.05。

Note.The data in parentheses are number of animals. Compared with the results detected with blood gluometer showing a significant difference(P<0.05).

圖1 三者血糖值比較圖Fig.1 Comparison of the serum and plasma glucose levels detected with a glucometer

3 討論

國內(nèi)外關(guān)于血漿與血清檢測結(jié)果比較分析的報道較多，但說法各不相同[2]。血漿標(biāo)本具有無需等待血液凝固，縮短檢驗時間和提高檢驗效率等優(yōu)點，因此成為血常規(guī)生化檢驗的理想研究標(biāo)本，但血漿和血清兩者自身成分差異決定了檢查結(jié)果存在必然差異[3]。我們通過對血清和血漿19項生化指標(biāo)檢測結(jié)果進(jìn)行比較，在常規(guī)生化指標(biāo)檢測中ALB、TP、ALP、CHOL、URIC、GLU、Mg、LD、Ca差異均有顯著性(P< 0.05)。在血糖儀和生化儀中血清血漿三者的方差分析中，P值為0.000(P<0.05),差異有顯著性。因此在動物實驗研究中，血液生化指標(biāo)檢測有必要進(jìn)行方法的一致性檢測并加以標(biāo)注，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

實驗表明，不同介質(zhì)對常規(guī)生化指標(biāo)檢測結(jié)果有影響，而且不同的檢測方法和介質(zhì)對血糖檢測影響較大。在檢查特定生化項目時，張正云等[4]報道血漿標(biāo)本檢測中Ca、TP、ALT、AST存在顯著差異，本實驗結(jié)果ALT、AST差異不顯著。

羅氏血糖試紙說明書標(biāo)明血糖儀測定值是應(yīng)用血漿進(jìn)行測試，但在本實驗結(jié)果中，雖然血糖的不同介質(zhì)和方法測試結(jié)果差異顯著，但是血糖儀測定值卻與血清測定的葡萄糖值相近。

綜上所述，各實驗室在采集標(biāo)本的過程中應(yīng)根據(jù)測定的項目來選擇合適的標(biāo)本和適當(dāng)?shù)姆椒ǎ@樣才不會影響檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。本實驗結(jié)果提示，不同的檢測方法和檢測標(biāo)本所獲得的生化和血糖指標(biāo)存在較大差異。

[1] 王冬平,隋麗華,尚世臣,等.清潔級SD大鼠血液生理生化指標(biāo)的測定[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2009,19(9):44-46.

[2] 梁吉平,孫振濤.在生化項目檢測中不同血液樣本的檢測結(jié)果比較[J].中國保健營養(yǎng),2012,22(9):3538.

[3] 姚維菊.不同血液樣本在常規(guī)生化項目檢測中的結(jié)果比較[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(4):468-469.

[4] 張正云,何清.急診患者三種血液標(biāo)本檢測電解質(zhì)的可比性[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(6):734-735.

Effectsofdifferentsamplesandmethodsonthedeterminationofbloodbiochemicalindexesinrats

LI Ying1,3， CUI Xiao-xia1， SHANG Shi-chen1， ZHAO Quan3， LI Gui-jun1， WANG Dong-ping1*， CHEN Zhen-wen2*

(1.Military Academy of Medical Sciences Laboratory Animal Center，Beijing 100071,China； 2.Capital University of Medical Sciences Laboratory Animal Department，Beijing 100069； 3.Jilin Agricultural University College of Animal Science and Technology，Changchun 130118)

ObjectiveTo compare the effects of two different samples and different test methods on blood biochemical indexes and blood glucose values in rats.MethodsGlucose levels in the serum and plasma samples were detected with a blood glucometer, and the biochemical parameters in the serum and plasma were determined by routine blood biochemistry.The data were statistically compared and analyzed to determine if there are some significant differences.ResultsAmong the 19 biochemical indexes of serum and plasma specimens, nine parameters, i.e., ALB,TP,ALP,CHOL,URIC,GLU,Mg,LD,Ca showed significant differences(P< 0.05),while the other 10 indexes showed no significant difference (P> 0.05).Different samples and different methods had significant differences in the detection of blood glucose (P< 0.05).ConclusionsDifferent method and samples impact on the detection of blood glucose and some other serum and plasma biochemical indexes.

Routine biochemical test; Serum; Plasma; Rat

R-33

A

1671-7856(2017) 10-0007-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.10.002

2016-12-05

國家科技支撐計劃課題(2015BA109B01-04)；國家自然科學(xué)基金項目(3137227)。

李迎(1993-)，女，碩士，研究方向：實驗動物生物學(xué)特性研究。E-mail: 651998038@qq.com

王冬平(1964-)，女，副研究員，研究方向：實驗動物生物學(xué)特性研究。E-mail: Wangdp6493@126.com。

陳振文(1959-)，男，教授，研究方向：實驗動物遺傳學(xué)。E-mail: czwen@ccmu.edu.cn。*共同通訊