5-氟尿嘧啶聚乳酸緩釋片的制備及其質(zhì)量控制研究

崔麗珺,黃 潔,李興華,康前雁

(1西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科,西安 710061;2西安市食品藥品檢驗(yàn)所;3西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科;*通訊作者,E-mail:cuilijun@mail.xjtu.edu.cn)

5-氟尿嘧啶聚乳酸緩釋片的制備及其質(zhì)量控制研究

崔麗珺1*,黃 潔2,李興華3,康前雁1

(1西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科,西安 710061;2西安市食品藥品檢驗(yàn)所;3西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科;*通訊作者,E-mail:cuilijun@mail.xjtu.edu.cn)

目的 制備不同分子量和含藥量的5-氟尿嘧啶-聚乳酸緩釋片(5-Fu-PLA-DS),并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制研究。 方法 以分子量為3 000,6 000,10 000,15 000,20 000的聚乳酸,制備含藥量分別為1.5,2.5,3.0 mg,直徑3.0 mm、厚1.0 mm的15種圓形5-Fu-PLA-DS。觀察緩釋片的表面形態(tài),測(cè)定載藥率、包封率,并進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。 結(jié)果 制得的5-FU-PLA-DS為白色的圓片,質(zhì)地均勻,表面光滑。PLA分子量越高,緩釋片硬度越大,表面越光滑致密;含藥量高的緩釋片,表面可見(jiàn)顆粒狀的微球痕跡。隨著5-FU投藥量的增加,載藥率也逐步增大,3.0 mg含量組的平均載藥率達(dá)到49.83%。15種5-FU-PLA-DS的平均包封率為(84.14±1.91)%。穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示,隨時(shí)間延長(zhǎng),緩釋片載藥量稍有降低,空氣中比密封保存的載藥量損失略多,表面出現(xiàn)微小裂紋。 結(jié)論 本法制作工藝簡(jiǎn)單,方法穩(wěn)定,緩釋片載藥量和包封率均達(dá)到要求,所用定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確可靠,可用于 5-FU-PLA-DS的質(zhì)量控制。

氟尿嘧啶; 聚乳酸; 緩釋; 質(zhì)量控制

濾過(guò)性手術(shù)(glaucoma filtration surgery, GFS)是治療青光眼最常用的術(shù)式之一,但術(shù)后 2年內(nèi)的失敗率仍達(dá)15%-25%,主要原因是成纖維細(xì)胞的增殖,細(xì)胞外間質(zhì)中的膠原和葡糖氨聚糖大量合成,導(dǎo)致濾過(guò)道瘢痕化[1，2]。5-fluorouracil (5-FU)是臨床上公認(rèn)的、能有效抑制青光眼濾過(guò)泡纖維化的抗代謝藥物[3-5],但是由于頻繁結(jié)膜下注射,且單次注射造成結(jié)膜下藥物濃度過(guò)高,易引起角膜、結(jié)膜毒性反應(yīng),引起濾過(guò)過(guò)暢。以可生物降解的生物材料為載體,包載抗代謝藥物、抑制纖維血管增生關(guān)鍵因子或抗體的緩/控釋制劑,是目前青光眼抗瘢痕治療研究的新趨勢(shì)[6,7]。就5-FU這一經(jīng)典的抗代謝藥物來(lái)說(shuō),微球制劑的發(fā)展已經(jīng)比較成熟,能夠做到粒徑均勻、緩釋效果明顯,但是總的載藥量較少,釋藥時(shí)間短[8-10]。而報(bào)道的結(jié)膜下植入型片劑、膜劑,含藥量雖然很高,但由于是采用單純物理混合或壓制而成,釋藥速度過(guò)快,釋放時(shí)間亦短,且釋放速度快造成局部藥物濃度過(guò)高,并發(fā)癥的發(fā)生率有所上升[11]。本研究以5-FU和不同分子量聚乳酸(polylactic acid,PLA)為原料,探討制備5-FU長(zhǎng)效緩釋制劑的方法,并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 材料及儀器

TU-1901型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);YKH-3型液體快速混合器(北京鴻泰順達(dá)科技有限公司);JK-DO-9240型干燥箱(上海精學(xué)科學(xué)儀器有限公司);DT5-4C型離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司);200目藥篩(上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司);外消旋聚乳酸(PDLLA,山東省醫(yī)療器械研究所),特性見(jiàn)表1;span-80(分析純,上海紀(jì)寧生物科技有限公司);5-氟尿嘧啶對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)08052897);5-氟尿嘧啶原料(上海瀚思化工有限公司,批號(hào):A106011217,純度:99%);二氯甲烷(分析純,天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司);石油醚(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠);鹽酸(分析純,西安市化學(xué)試劑廠);酸性重鉻酸鉀洗液(本院藥劑實(shí)驗(yàn)室配制);水為三蒸水(自制)。

表1PLA的一般特性

Table1GeneralcharacteristicsofPLA

粗略分子量實(shí)際分子量分子量分布特性黏度(dl/g)300031071.5-1.60.11600060951.5-1.60.1810000103221.2-1.30.2715000148651.2-1.30.3620000192101.2-1.30.45

2 方法與結(jié)果

2.1 5-氟尿嘧啶-聚乳酸緩釋片(5-FU-PLA-DS)的制備

將5-FU 原料藥充分研磨,200目篩網(wǎng)過(guò)篩后干燥備用。稱取處理過(guò)的5-FU原料藥,懸浮于含PLA及span-80的二氯甲烷3 ml中,在液體快速混合器的高速攪拌下緩慢滴加石油醚15 ml(10-15滴/min)。待過(guò)量載體使微球聚積沉淀而上液變清透后,再加入石油醚15 ml固化10 min。離心15 min(3 000 r/min),后將白色糊狀、質(zhì)地均勻的沉淀物取出,置于表面涂有少許甘油的玻璃模具中(3.0 cm×2.5 cm×1.0 mm),稍微加壓使其充滿模具。表面干燥后,以直徑3 mm的管狀模具進(jìn)行切割,50 ℃烘箱干燥。同時(shí),按照上述方法制作與5-FU緩釋片規(guī)格相同,但不含5-FU的PLA空白緩釋片(PLA-DS)。制備不同載藥量緩釋片的原、輔料物質(zhì)用量見(jiàn)表2。

表2不同5-FU載藥量緩釋片的原料物質(zhì)用量

Table2Dosageofessentialingredientsin5-FU-PLA-DSwithdifferent5-FUloading

理想載藥量(mg)5-FU(g)PLA(g)Span-80(g)1.50.190.520.042.50.310.410.023.00.390.350.02

2.2 5-FU-PLA-DS的形態(tài)學(xué)考察

2.2.1 肉眼觀察 觀察15種5-氟尿嘧啶-聚乳酸緩釋片(5-FU-PLA-DS)的顏色、質(zhì)地、硬度等。制得的5-FU-PLA-DS均為白色的圓片,質(zhì)地均勻,表面光滑,邊緣整齊。PLA分子量越高,緩釋片硬度越大。

2.2.2 光學(xué)顯微鏡觀察 尚未離心時(shí),取上層石油醚涂片,于光學(xué)顯微鏡下觀察未聚集的微球的形態(tài)、粒徑和均勻度。在上層石油醚涂片中,可見(jiàn)少許尚未聚集的5-氟尿嘧啶-聚乳酸微球(5-FU-PLA-MS),呈現(xiàn)出規(guī)則的球形,表面光滑,大小均勻,直徑約5-7 μm(見(jiàn)圖1)。

圖1 光學(xué)顯微鏡下懸浮的5-FU-PLA-MSFigure 1 5-FU-PLA-MS suspension under light microscopy

2.2.3 數(shù)碼實(shí)體顯微鏡下觀察不同分子量5-FU-PLA-DS的表面形態(tài) 蒸餾水清洗緩釋片表面,晾干,置于數(shù)碼實(shí)體顯微鏡下觀察表面形態(tài)。實(shí)體顯微鏡下,分子量小的緩釋片表面尚可見(jiàn)點(diǎn)狀、條索狀的微球聚積痕跡;分子量越大,表面越光滑致密(見(jiàn)圖2)。而相同分子量、不同含藥量的3種緩釋片,表面形態(tài)未見(jiàn)明顯差異。

A. PLA分子量3 000;B. PLA分子量6 000;C. PLA分子量10 000;D. PLA分子量15 000; E. PLA分子量20 000圖2 數(shù)碼實(shí)體顯微鏡下含藥量2.5 mg的不同分子量的5-FU-PLA-DS的表面形態(tài)Figure 2 The surface morphology of 5-FU-PLA-DS with different molecular weights and 2.5 mg 5-FU under digital solid microscope

2.2.4 掃描電子顯微鏡觀察 將干燥后的5-FU-PLA-DS于氬氣環(huán)境下噴金,觀察微觀形態(tài)。小分子量的5-FU-PLA-DS表面較粗糙,且含藥量不同,表面形態(tài)亦不盡相同:含藥量低的,表面呈現(xiàn)條索狀,為聚乳酸析出凝結(jié)的痕跡;而含藥量高的緩釋片,表面可見(jiàn)顆粒狀的微球痕跡,還可見(jiàn)許多微小的孔洞分布(見(jiàn)圖3A,B)。隨著分子量增大,表面逐漸光滑致密,含藥量不同引起的形態(tài)差異也越來(lái)越小。在分子量20 000,含藥量分別為1.5 mg和3.0 mg的兩種5-FU-PLA-DS上,已看不出明顯差異(見(jiàn)圖3C,D)。

2.3 載藥率和包封率測(cè)定的方法學(xué)研究

2.3.1 對(duì)照品溶液的配制 所有實(shí)驗(yàn)器皿經(jīng)酸性重鉻酸鉀洗液浸泡、超聲震蕩洗滌、蒸餾水充分灌洗后干燥備用。精密移取4.2 ml的鹽酸置于500 ml容量瓶中,搖勻,加蒸餾水稀釋至刻度,配制成0.1 mol/ml的鹽酸密封備用。精密稱取干燥至恒重的5-FU對(duì)照品2.4 mg,置于12 ml容量瓶中,加0.1 mol/ml HCL適量使溶解并稀釋至刻度,配制成濃度為0.2 mg/ml的5-FU對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取儲(chǔ)備液0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8,1 ml,分別置于5 ml容量瓶中,加0.1 mol/ml HCl稀釋至刻度,搖勻,配制成濃度分別為0.004,0.008,0.012,0.016,0.024,0.032,0.040 mg/ml的5-FU對(duì)照品溶液。

2.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的測(cè)定 取1片5-FU-PLA-DS,加入二氯甲烷,振搖使5-FU充分溶解,用0.1 mol/ml HCL溶液萃取,取鹽酸層,在200-400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外吸收波長(zhǎng)掃描,結(jié)果見(jiàn)圖4。5-FU在203 nm和265.5 nm處有最大吸收,與藥典一致[12],考慮到HCl溶液本身的截止波長(zhǎng),選擇265.5 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。空白緩釋片處理后的上清液在265.5 nm幾乎沒(méi)有紫外吸收,不對(duì)測(cè)定造成干擾。

2.3.3 線性關(guān)系 以0.1 mol/L HCL為空白,在265.5 nm處依次測(cè)定對(duì)照品溶液的吸光度,并以濃度(X)對(duì)吸光度(Y)進(jìn)行線性回歸,回歸方程為:Y=53.213X+0.086 1,r=0.999 9。說(shuō)明5-FU在0.004-0.040 mg/ml范圍內(nèi),其濃度與吸光度之間有良好的線性關(guān)系。文中計(jì)量資料的描述性統(tǒng)計(jì)及線性回歸均使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行。

2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為0.008，0.016，0.032 mg/ml(低、中、高)3個(gè)濃度的5-FU對(duì)照品溶液,在265.5 nm處測(cè)定吸光度。第1天內(nèi)測(cè)定5次,之后每天測(cè)定一次,連續(xù)測(cè)5 d,根據(jù)測(cè)定值之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD,%),計(jì)算日內(nèi)精密度和日間精密度。高、中、低3個(gè)濃度的日內(nèi)精密度分別為0.76%,0.70%,0.88%,日間精密度分別為1.3%,1.4%,1.4%,滿足測(cè)定要求。

A.PLA分子量3 000,5-Fu含藥量1.5 mg,表面可見(jiàn)條索狀聚乳酸析出凝結(jié)的痕跡;B. PLA分子量3 000,5-Fu含藥量3.0 mg,表面可見(jiàn)顆粒狀的微球痕跡;C. PLA分子量20 000,5-Fu含藥量1.5 mg; D. PLA分子量20 000,5-Fu含藥量3.0 mg,表面均光滑致密,未見(jiàn)明顯形態(tài)差異圖3 掃描電鏡下5-FU-PLA-DS的表面形態(tài)Figure 3 Surface morphology of 5-FU-PLA-DS under scanning electron microscope

圖4 5-FU HCL溶液的紫外吸收?qǐng)D譜Figure 4 UV absorption spectra of 5-FU HCL solutions

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取3份PLA,每份6.0 mg,置于具塞試管中,加入2.0 ml 二氯甲烷溶解。分別加入濃度為0.008，0.016，0.032 mg/ml的5-FU對(duì)照品溶液5 ml,充分振搖、靜置,取鹽酸層測(cè)定紫外光吸光度。各分子量組分別進(jìn)行檢測(cè),重復(fù)5次,計(jì)算回收率、平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD,%),結(jié)果見(jiàn)表3。平均回收率為(99.01±1.05)%,RSD均小于2%,說(shuō)明5-FU的含量測(cè)定方法回收率良好,方法準(zhǔn)確。

2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液,在0，1，2，4，6，12 h測(cè)定吸光度,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。供試品溶液在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度值RSD為1.3%(n=6),表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表315種5-FU-PLA-DS的回收率測(cè)定結(jié)果(n=5)

Table3Recoveryrateof15speciesof5-FU-PLA-DS(n=5)

加入量(μg/ml)PLA(Da)測(cè)得量(μg/ml)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)8.0030007.79±0.1197.499.001.160007.87±0.1098.4100007.93±0.0899.1150008.05±0.06100.6200007.96±0.0799.516.00300015.94±0.1899.698.921.3600015.84±0.1799.01000015.60±0.2597.51500015.95±0.2099.72000015.81±0.2298.832.00300031.79±0.4399.399.121.5600031.17±0.5097.41000031.95±0.4899.81500032.18±0.45100.62000031.50±0.4898.4

2.4 載藥率和包封率測(cè)定

取1片干燥后的5-FU-PLA-DS準(zhǔn)確稱重,溶于二氯甲烷 2 ml中,振搖使5-FU充分溶解,用0.1 mol/ml HCl 5 ml溶液萃取3次,每次萃取前離心15 min(3 000 r/min),再取鹽酸層。將三次萃取所得的5-FU HCl溶液置于20 ml容量瓶中,加0.1 mol/ml HCl定容至刻度,搖勻。用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定在265.5 nm處的吸光度。同時(shí)以不含5-FU的空白PLA-DS所得的萃取液作為空白。將吸光度值代入5-FU HCL溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(Y=53.213X+0.086 1,Y為吸光度,X為濃度)中,按照下列公式計(jì)算5-FU-PLA-DS的載藥率和包封率。15種5-FU-PLA-DS中,隨機(jī)選取同批次樣品6片,重復(fù)測(cè)定后取平均值。

載藥率=緩釋片中5-FU含量/緩釋片質(zhì)量×100%。

包封率=緩釋片中5-FU含量/5-FU投藥量×100%(5-FU投藥量根據(jù)每片緩釋片占全片的質(zhì)量百分比及總投藥量計(jì)算而得)。

不同分子量、不同含藥量5-FU-PLA-DS的載藥率和包封率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表415種5-FU-PLA-DS的載藥率和包封率(n=6)

Table4Drugloadingrateandencapsulationefficiencyof15speciesof5-FU-PLA-DS(n=6)

代稱組成5-FU(mg)PLA(Da)含藥量(mg)單片質(zhì)量(mg)投藥量(mg)載藥率(%)包封率(%)1.5P31.530001.503±0.0395.983±0.1171.803±0.02425.1283.361.5P61.560001.497±0.0156.083±0.0751.790±0.01824.6183.631.5P101.5100001.507±0.0226.050±0.1051.781±0.02524.9184.611.5P151.5150001.502±0.0106.167±0.0831.782±0.02124.3684.291.5P201.5200001.513±0.0076.117±0.0751.778±0.01824.7385.012.5P32.530002.500±0.0135.933±0.1212.933±0.03042.1985.242.5P62.560002.505±0.0186.000±0.1102.931±0.02741.7585.472.5P102.5100002.512±0.0136.083±0.1172.922±0.02941.3986.172.5P152.5150002.502±0.0156.183±0.0752.920±0.01840.4785.682.5P202.5200002.510±0.0116.200±0.0892.915±0.02340.6586.113.0P33.030003.016±0.1236.033±0.1973.688±0.04951.1581.783.0P63.060003.036±0.1286.000±0.0893.685±0.02250.6082.393.0P103.0100003.029±0.1206.017±0.1833.680±0.04650.3482.313.0P153.0150003.036±0.0806.183±0.0753.678±0.01848.6282.543.0P203.0200003.066±0.0776.267±0.0823.672±0.02148.4483.50

由表4可以看出,隨著5-FU投藥量的增加,載藥率也逐步增大。3.0 mg含量組的平均載藥率達(dá)到49.83%。15種5-FU-PLA-DS的平均包封率為84.14%±1.91%。

2.5 緩釋片穩(wěn)定性試驗(yàn)

將制備好的分子量分別為3 000,10 000,20 000 Da,含藥量3.0 mg的5-FU-PLA-DS存放于不同條件6個(gè)月,分別于第1，3，6個(gè)月按照2.4中描述的方法測(cè)定載藥量,進(jìn)行外觀觀察,并與同批次制品進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果示,分子量大的緩釋片載藥量損失較少,存放更加穩(wěn)定。放置6個(gè)月時(shí),密閉存放和空氣存放的緩釋片顏色、質(zhì)地均沒(méi)有改變,表面形態(tài)在肉眼下也未見(jiàn)明顯改變,但掃描電鏡結(jié)果出現(xiàn)差別(見(jiàn)圖5),提示緩釋片最好密封保存。三種5-FU-PLA-DS貯存于不同條件,特定時(shí)間測(cè)定載藥量的變化見(jiàn)表5。

表5結(jié)果顯示,載藥量隨時(shí)間延長(zhǎng)稍有降低,空氣中比密封保存的載藥量損失稍多。

表55-FU-PLA-DS在不同條件下貯存后載藥量的變化(%，n=3)

Table5Drugloadingchangesof5-FU-PLA-DSunderdifferentstorageconditions(%，n=3)

存放時(shí)間室溫、密封室溫、空氣3000Da10000Da20000Da3000Da10000Da20000Da0月51.1550.3448.4451.1550.3448.441月50.9350.2448.3050.8150.0948.113月50.7450.0148.1250.1249.5747.806月50.6149.6948.0349.5448.8247.51

3 討論

Gressel等[13]和Heuer等[14]于1984年首次將5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)用于獼猴新生血管性、無(wú)晶體性青光眼患者濾過(guò)術(shù)后的抗瘢痕化治療,并獲得成功。之后國(guó)內(nèi)、外許多學(xué)者開(kāi)始將5-FU作為青光眼濾過(guò)術(shù)的輔助用藥,使青光眼手術(shù)的成功率明顯提高[15-17]。目前,對(duì)人眼使用5-FU的方法[16]主要有:① 術(shù)后結(jié)膜下注射。規(guī)范用量:術(shù)后第1周,每天球結(jié)膜下注射10 mg,分1或2次注射;第2周減至每天5 mg。用藥次數(shù)共14-21次,總劑量105 mg。頻繁結(jié)膜下注射使患者痛苦,單次注射造成結(jié)膜下藥物濃度過(guò)高,易引起角膜、結(jié)膜毒性反應(yīng)[18],因此,已有不少研究者嘗試制作5-FU緩釋制劑,并進(jìn)行兔眼、猴眼等活體內(nèi)研究,包括使用多聚體、膠原植入物以及可生物降解的高分子聚合物等,使5-FU能在局部持續(xù)穩(wěn)定地釋放,長(zhǎng)時(shí)間維持有效藥物濃度,提高藥物的生物利用度并且降低毒性。Einmahl等[19]用聚酯[Poly(ortho ester),POE]制備出含1%(質(zhì)量比)5-FU的膏狀緩釋劑,對(duì)施行濾過(guò)術(shù)的兔眼結(jié)膜下注射240 mg,并以術(shù)中局部使用50 mg/ml 5-FU作為對(duì)照。結(jié)果顯示眼壓降低和濾過(guò)泡持續(xù)時(shí)間明顯延長(zhǎng),5-FU的毒性作用明顯減輕。Blandford等[20]用分子量76 000-78 000 Da的乙烯-醋酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate,EVA)和聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA),制備出含12 mg 5-FU的緩釋片,在兔眼中,以平均1 mg/d的大劑量快速釋放10 d左右。雖然這些緩釋制劑可以維持5-FU的持續(xù)釋放,降低眼壓并延長(zhǎng)濾過(guò)泡存在時(shí)間,但釋放時(shí)間過(guò)短,突釋效應(yīng)明顯。因此,制作能夠以最低有效抑制濃度長(zhǎng)期、持續(xù)釋放5-FU的緩釋劑型是青光眼抗瘢痕治療的主要目標(biāo),也是本研究的主要目的。

A.密閉室溫存放的5-FU-PLA-DS,顏色、質(zhì)地和表面形態(tài)未見(jiàn)明顯改變;B.空氣室溫存放的緩釋片,表面可見(jiàn)微小的裂紋圖5 放置6個(gè)月時(shí)5-FU-PLA-DS的表面形態(tài)Figure 5 Surface morphology of 5-FU-PLA-DS after storage for 6 months

PLA是親脂性材料,易溶于二氯甲烷、氯仿等有機(jī)溶劑;而5-FU具有較強(qiáng)的親水性,不溶于有機(jī)溶劑,僅微溶于水。所以,要將5-FU均勻分散在PLA中相當(dāng)困難。以往報(bào)道的5-FU-PLA或5-FU-PLGA膜劑、片劑,基本也都是通過(guò)簡(jiǎn)單的物理分散或高溫模壓制成,這些膜劑、片劑中的藥物分散還是不均勻,導(dǎo)致藥物不能勻速、穩(wěn)定地釋放。而5-FU與PLA截然相反的性質(zhì)又是制作微球的良好條件,所以不少學(xué)者已經(jīng)報(bào)道運(yùn)用不同的方法成功制得5-FU-PLA-MS,類似于本實(shí)驗(yàn)中的微球,表面光滑、粒徑均勻,并在體外釋放實(shí)驗(yàn)或活體實(shí)驗(yàn)中顯示出了較好的緩釋性能及治療效果。但是,由于微球的釋藥時(shí)間短,突釋效應(yīng)較明顯,通常只能維持兔眼濾過(guò)道通暢和眼壓降低至濾過(guò)術(shù)后3周左右[21]。

我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中不斷地摸索發(fā)現(xiàn),制作5-FU-PLA-MS時(shí),如果加入過(guò)量PLA,生成的微球會(huì)逐漸聚集并沉淀。將沉淀的微球團(tuán)塊收集,制作成緩釋片,能夠通過(guò)粒徑均勻的5-FU-PLA-MS聚積,實(shí)現(xiàn)5-FU在緩釋片中的均勻分散。PLA易溶于二氯甲烷,更易溶于石油醚,Span-80的存在使5-FU能夠更好地分散于PLA-二氯甲烷溶液。在制作過(guò)程中,攪拌速度的控制以及石油醚的滴加速度也是成功制備的關(guān)鍵。利用這種方法制作出的5-FU-PLA-DS,不但藥物分散均勻,表面光滑,且載藥率、包封率都要高于單純的5-FU-PLA-MS。在實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn),當(dāng)5-FU與載體的比例大于1時(shí),投藥量增加并不能提高緩釋片的載藥率,反而使包封率下降。因此,3.0 mg是直徑3 mm、厚1 mm5-FU-PLA-DS的最大含藥量。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)提示,緩釋片存放的穩(wěn)定性較好,室溫、密封保存半年,載藥量?jī)H損失0.41%-0.65%。

當(dāng)5-FU從5-FU-PLA-DS中釋出時(shí),表層微球中藥物溶解擴(kuò)散后留下的通道使微球更容易降解,而間隔于微球之中的PLA并不含藥或含藥較少,可以起到延緩釋放的作用,使得緩釋片的降解速度明顯要慢得多,所以,整個(gè)5-FU-PLA-DS的降解過(guò)程是從外向內(nèi)逐層進(jìn)行:當(dāng)表層微球降解、脫落,下層的微球暴露于介質(zhì)后才開(kāi)始釋放藥物。后續(xù)實(shí)驗(yàn)中我們也將進(jìn)一步了解這15種緩釋片的體外釋藥特征和釋藥機(jī)制,希望這種由外向內(nèi)有步驟的降解、不同層次微球的非同步釋藥,能夠使5-FU以有效濃度緩慢、平穩(wěn)、長(zhǎng)期地釋放,為抑制青光眼濾過(guò)術(shù)后瘢痕化提供新的方法和依據(jù)。

[1] Dai Z, Yu X, Sun J,etal. Grooved glaucoma drainage devices that continuously deliver cyclosporine a decrease postsurgical scar formation in rabbit eyes[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci,2017,58(3):1692-1701.

[2] Sharma A, Anumanthan G, Reyes M,etal. Epigenetic modification prevents excessive wound healing and scar formation after glaucoma filtration surgery[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2016,57(7):3381-3389.

[3] Yamanaka O, Kitano-Izutani A, Tomoyose K,etal. Pathobiology of wound healing after glaucoma filtration surgery[J]. BMC Ophthalmol, 2015,17(15)(Suppl 1):157.

[4] Amoozgar B, Lin SC, Han Y,etal. A role for antimetabolites in glaucoma tube surgery: current evidence and future directions[J]. Curr Opin Ophthalmol, 2016, 27(2):164-169.

[5] Cabourne E, Clarke JC, Schlottmann PG,etal. Mitomycin C versus 5-Fluorouracil for wound healing in glaucoma surgery[J]. Cochrane Database Syst Rev, 2015, 6 (11):CD006259.

[6] 徐巖, 呂柳. 抗青光眼藥物緩釋的研究進(jìn)展[J].中華眼科雜志,2014,50(12):946-951.

[7] Carvalho IM, Marques CS, Oliveira RS,etal. Sustained drug release by contact lenses for glaucoma treatment-a review[J]. J Control Release, 2015,202(28):76-82.

[8] 黎靖,魏郁夢(mèng),楊紅茹,等. 氟尿嘧啶中空微球的制備、表征及釋藥性能[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,41(5):448-452.

[9] 黃慧玲,李益,王玥,等. 5-FU-PLGA復(fù)乳微球的制備及體外釋放[J].化學(xué)工業(yè)與工程,2016, 33(1):76-81.

[10] Huang Y, Wei Y, Yang H,etal. A 5-fluorouracil-loaded floating gastroretentive hollow microsphere: development, pharmacokinetic in rabbits, and biodistribution in tumor-bearing mice[J]. Drug Des Devel Ther, 2016, 3(10):997-1008.

[11] Huhtala A, R?nkk? S, Ter?svirta M,etal. The effects of 5-fluorouracil on ocular tissues in vitro and in vivo after controlled release from a multifunctional implant[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2009,50(5):2216-2223.

[12] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典:二部 [M].北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 395.

[13] Gressel MG, Parrish RK 2nd, Folberg R.5-fluorouracil and glaucoma filtering surgery. Ⅰ.An animal mode[J].Ophthalmology,1984,91(4):378-383.

[14] Heuer DK, Parrish RK 2nd, Gressel MG,etal. 5-fluorouracil and glaucoma filtration surgery.Ⅱ. A pilot study[J].Ophthalmology,1984,91(4):384-394.

[15] Lee YS, Wu SC, Tseng HJ,etal. The relationship of bleb morphology and the outcome of needle revision with 5-fluorouracil in failing filtering bleb[J]. Medicine (Baltimore),2016,95(36):e4546.

[16] Masoumpour MB, Nowroozzadeh MH, Razeghinejad MR. Current and future techniques in wound healing modulation after glaucoma filtering surgeries[J].Open Ophthalmol, 2016,29(10):68-85.

[17] 張舒心, 唐炘, 劉磊.青光眼治療學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2011: 286.

[18] Na JH, Sung KR, Shin JA,etal. Antifibrotic effects of pirfenidone on Tenon's fibroblasts in glaucomatous eyes: comparison with mitomycin C and 5-fluorouracil[J]. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol, 2015, 253(9):1537-1545.

[19] Einmahl S, Behar-Cohen F, D’Hermies F,etal. A new poly(Ortho Ester)-based drug delivery system as an adjunct treatment in filtering surgery[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2001, 42(2):695-700.

[20] Blandford DL, Smith TJ, Brown JD,etal. Subconjunctival sustained release 5-fluorouracil[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1992, 33(10):3430-3435.

[21] Chiang CH, Tung SM, Lu DW,etal.Invitroandinvivoevaluation of an ocular delivery system of 5-fluorouracil microspheres[J]. J Ocul Pharmacol Ther, 2001,17(6):545-553.

Preparationandqualitycontrolof5-fluorouracil-polylacticacidsustainedreleasetablet

CUI Lijun1*,HUANG Jie2,LI Xinghua3, KANG Qianyan1

(1DepartmentofOphthalmology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China;2InstituteforFoodandDrugcontrolofXi’an;3DepartmentofPharmacy,SecondAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:cuilijun@mail.xjtu.edu.cn)

ObjectiveTo prepare 5-fluorouracil-polylactic acid sustained-release tablet(5-FU-PLA-DSs) containing different molecular weight polylactic acid and dosage，and to explore the quality control.MethodsFifteen species of round 5-FU-PLA-DS with 3 mm in diameter and 1 mm in thickness were prepared using PLA(molecular weight of 3 000, 6 000, 10 000, 15 000, 20 000), containing 1.5, 2.5, 3.0 mg 5-FU,respectively. The surface morphology and stability of each tablet were observed. The drug-loading rate and encapsulation efficiency were also tested.ResultsThe prepared 5-FU-PLA-DS was white, uniform and smooth. The higher the molecular weight of PLA was, the greater the hardness of tablet was, and the smoother and denser the surface was. The imprint of microspheres was seen on the surface of 5-FU-PLA-DS with high drug content. The drug loading rate increased along with the raised dosage of 5-FU, and the average drug loading rate of 3.0 mg 5-FU reached 49.83%. The average encapsulation efficiency of 15 species of 5-FU-PLA-DS was (84.14±1.91)%. The stability test showed that the drug loading of 5-FU-PLA-DS was decreased slightly with the prolongation of time, and the loss of drug-loading rate was slightly less in sealed preservation than that exposed to air.ConclusionThe technique for the preparation of 5-FU-PLA-DS is simple and stable. The quantitative method is accurate and reliable, which can be used for the quality control.

5-fluorouracil; poly lactic acid; sustained release; quality control

R927.11

A

1007-6611(2017)10-1023-07

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.10.010

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81300765)

崔麗珺,女,1978-03生,博士,主治醫(yī)師,E-mail:cuilijun@mail.xjtu.edu.cn

2017-07-03