ECT2和P21蛋白在乳腺癌中的表達及意義

王宏坤，鄭繪霞，梁建芳，肖 虹

(山西醫科大學第一醫院病理科,太原 030001;*通訊作者,E-mail:huixiazheng62@126.com)

ECT2和P21蛋白在乳腺癌中的表達及意義

王宏坤，鄭繪霞*，梁建芳，肖 虹

(山西醫科大學第一醫院病理科,太原 030001;*通訊作者,E-mail:huixiazheng62@126.com)

目的 探討乳腺癌中ECT2和P21蛋白的表達及其臨床意義。 方法 選取133例乳腺癌和80例正常乳腺組織,采用免疫組織化學EnVision的方法檢測ECT2和P21蛋白在上述組織中的表達情況,分析二者在乳腺癌中的表達關系。 結果 ECT2蛋白在乳腺癌和正常組織中的陽性表達率分別為55.6%和8.8%,二者比較差異有統計學意義(P<0.05);ECT2與P21蛋白表達在患者不同年齡、不同腫瘤大小及不同腫瘤類型間比較差異無統計學意義(P>0.05),而在不同腫瘤分級、淋巴結轉移與否及不同TNM分期間比較差異有統計學意義(P<0.05)。ECT2和P21蛋白在乳腺癌中的表達呈顯著負相關(r=-0.242,P<0.05)。 結論 ECT2和P21蛋白表達在乳腺癌的發生發展過程中均存在一定的作用,而且二者可能存在相互抑制作用。

乳腺癌; ECT2; P21

ECT2(epithelial cell transforming sequence 2)即上皮細胞轉化序列2,是一種Rho家族中GTP酶的鳥嘌呤核苷酸交換因子,已經證實它與人類多種腫瘤的惡性表型有關[1]。P21蛋白為RAS抑癌基因編碼的蛋白,P21擁有高度保守的結合域,能與GTP和GDP結合,當結合GTP時,P21處于活性狀態,能夠激活RAS下游的信號轉導過程,從而調節細胞分化、增殖和凋亡過程[2]。有研究顯示,通過下調ECT2的表達能夠顯著增強P21蛋白的表達,從而使細胞增殖停滯在G1期[3,4]。本研究應用免疫組化方法檢測乳腺癌中ECT2和P21蛋白的表達情況,初步分析二者的表達關系,希望能夠為乳腺癌的發生機制提供一定的依據。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2012-2016年在山西醫科大學第一醫院病理科存檔的乳腺癌根治標本133例及80例癌旁相應正常乳腺組織(標本均為相對應乳腺癌根治標本中遠離癌組織的正常乳腺組織)。所有病例術前均未行放化療,并已將資料不完整者排除(包括患者年齡、其他病史、放化療史等不詳的資料)。所有病例均進行復查,由2名資深的高級職稱病理醫師診斷,保證資料的準確性。

1.2 試劑與方法

免疫組化按EnVision二步法,實驗步驟按試劑說明書進行。ECT2抗體購自Sigma公司,P21單克隆抗體、免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。ECT2濃度配比1 ∶100,P21為工作液。PBS液代替一抗作陰性對照,用已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結果判斷

ECT2蛋白在腫瘤細胞核中表達,部分胞質有微弱表達,P21以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性。評分標準:以染色強度和陽性細胞百分比判斷,高倍鏡(×400)下隨機選取5個腫瘤細胞區域,每個視野計數50個細胞,計算平均值作為陽性百分率(陰性為0,1%-10%為1分,11%-50%為2分,51%-80%為3分,81%-100%為4分),染色強度按不顯色、弱陽、中等陽及強陽分別記為0-3分,兩者積分相乘:≤4分為低表達/不表達,>4分為高表達。

1.4 統計學分析

所有統計分析采用SPSS16.0統計軟件實現,采用χ2檢驗及Pearson相關分析,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ECT2和P21蛋白在乳腺癌和正常乳腺組織中的表達

ECT2和P21蛋白在乳腺癌中均高表達(見圖1,2)。由表1可見,133例乳腺癌中ECT2陽性率為55.6%(74/133),與正常乳腺組織中陽性率8.8%(7/80)相比,差異有統計學意義(P<0.05);P21蛋白在乳腺癌中的陽性表達89例,陽性率為66.9%(89/133),正常乳腺組織10例,陽性率為12.5%,二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。

圖1 ECT2在乳腺癌中高表達 (EnVision法，×100)Figure 1 High expression of ECT2 in breast cancer (EnVision，×100)

圖2 P21在乳腺癌中高表達 (EnVision，×100)Figure 2 High expression of P21 in breast cancer (EnVision，×100)

表1ECT2和P21蛋白在乳腺癌和正常乳腺組織中的表達

Table1TheexpressionofECT2andP21proteininbreastcancerandnormalbreasttissues

分組ECT2+-χ2PP21+-χ2P乳腺癌 745946.6020.000894459.4640.000正常乳腺7731070

2.2 ECT2和P21蛋白在乳腺癌中的表達與臨床病理參數之間的關系

ECT2和P21蛋白表達在患者不同年齡、不同腫瘤大小及不同腫瘤類型間分別比較,差異均無統計學意義(P>0.05),在腫瘤不同分級、淋巴結轉移與否及不同TNM分期間比較,差異有統計學意義(P<0.05，見表2)。

2.3 乳腺癌中ECT2和P21蛋白之間的表達關系

133例乳腺癌中ECT2與P21蛋白共同陽性表達42例,二者表達差異有統計學意義(P<0.05,見表3),Pearson相關性分析顯示,二者呈顯著負相關(r=-0.242,P=0.005)。

3 討論

乳腺癌診斷及治療已經得到了較大的提高,但是有些乳腺癌卻不能得到有效的治療,尤其現在研究較為廣泛的三陰乳腺癌,目前尚未發現有效的治療措施。其最根本的原因是乳腺癌的發生發展機制尚未完全明了。上皮細胞轉化序列2即ECT2在人類多種癌癥中均有表達,它作為一種原癌基因,在多種癌癥中頻繁地表達上調,在肝細胞癌的研究中顯示,ECT2表達明顯上調,當應用siRNA敲除ECT2后,Rho GTP酶的活動受到了抑制,細胞凋亡增加,并且顯著降低了肝癌細胞的轉移能力,而ECT2高表達的病例細胞增殖活性強,患者生存期明顯較低[5]。在結直腸癌中,ECT2表達顯著高于正常組織,并且與腫瘤大小、CEA水平及TNM分期有關,生存分析顯示ECT2高表達的患者生存期顯著縮短,ECT2高表達是結直腸癌患者的獨立預后因素[6]。在骨肉瘤的研究中顯示,ECT2 mRNA的表達顯著上調,并且與腫瘤高分級、復發轉移及化療反應差密切相關,而且ECT2的表達是患者總生存期和無病生存期獨立的預后因素,ECT2表達上調是骨肉瘤患者預后不良的標志[7]。可見,ECT2不但在上皮性腫瘤中發揮作用而且在間葉源性腫瘤中同樣有促進腫瘤生長的作用。我們的研究結果顯示,ECT2在乳腺癌中的表達顯著高于正常組織,而且與腫瘤分級、淋巴結轉移及TNM分期密切相關,表明ECT2在乳腺癌的發生發展過程中均有一定的促進作用。

表2乳腺癌中ECT2和P21蛋白表達與臨床指標之間的關系

Table2TherelationshipbetweenexpressionofECT2andP21proteinandclinicalparametersinbreastcancer

臨床病理參數nECT2+-χ2PP21+-χ2P 年齡13374590.5150.49089441.3590.272 ≤49歲6333303924 >49歲7041295020 腫瘤大小0.1380.7292.3910.141 ≤2cm6135264516 >2cm7239334428 腫瘤類型0.2640.7081.5160.239 浸潤性導管癌9152396427 浸潤性小葉癌4222202517 分級7.1770.02813.9080.001 G15121304110 G24530153213 G33723141621 淋巴結轉移34.4500.00013.0320.000 是423931923 否9135567021 TNM分期13.0010.00520.3700.000 Ⅰ期301218264 Ⅱ期342014295 Ⅲ期4533112322 Ⅳ期249151113

表3ECT2和P21蛋白表達在乳腺癌中的關系

Table3TherelationshipbetweenexpressionofECT2andP21proteininbreastcancer

P21ECT2+-χ2P+42477.7790.005-3212

P21為重要的抑癌基因,是迄今為止最為廣泛的具有激酶活性的細胞周期抑制因子。P21在多條信號通路中發揮抑制腫瘤生長的作用,主要是負向調節細胞周期,使細胞分裂停止或處于相對靜止期,并可導致細胞凋亡,這樣腫瘤生長受到抑制,進展變緩[8]。P21在多種腫瘤中都有表達,而且其表達對腫瘤的生長都有一定的作用,如骨肉瘤中,P21蛋白的泛素化可以促進腫瘤生長,當抑制其泛素化后,細胞增殖停止,細胞被阻滯在S期[9];在大腸癌的研究中發現,激活并提高體內P21的表達,能夠顯著抑制細胞的生長[10];在鼻咽癌中,誘導P21在細胞中的表達,能夠顯著抑制細胞生長,促進凋亡[11],在這些研究均提示,P21可能是治療腫瘤的潛在靶點。

P21在乳腺癌中已有研究報道,我們的研究結果顯示P21在乳腺癌中表達增高,腫瘤分級高者陽性表達率相對低于分級低者,即G1病例陽性率高于G2、G3,呈遞減趨勢,淋巴結轉移病例陽性率低于未轉移病例,TNM分期高者陽性率同樣低于分期低的病例,與文獻報道相符[12]。而且,有研究發現P21在乳腺癌中的表達情況及對腫瘤的促凋亡作用與MAPK依賴的p21信號通路有關[13]。也有研究顯示P21-p53通路在乳腺癌的發生發展過程中起了重要的作用,并且已經發現吳茱萸堿能夠對該通路起到一定的抑制作用,從而抑制乳腺癌細胞的生長[14]。在口腔鱗狀細胞癌的研究中發現,利用短發夾RNA抑制ECT2的表達后,細胞增殖顯著受到抑制,細胞分裂停滯在G1期,并且細胞周期蛋白激酶抑制劑P21、P27顯著上調,細胞凋亡增加[4]。本研究結果顯示,ECT2與P21存在顯著負相關性,也就是說二者在乳腺癌中所起的作用可能是相反的,提示ECT2和P21在乳腺癌的生長過程中可能同樣存在一定的相互抑制作用。到目前為止,ECT2是否與P21在某些通路上發生了作用,還不是很清楚,需要在細胞水平進行研究,由于P21在多條信號通路上均有一定的作用,因此ECT2在乳腺癌中的作用,需要通過細胞周期相關分子從多條信號通路進行探索,下一步我們將從細胞角度進行研究,希望能夠找到ECT2在乳腺癌中的作用機制。

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ExpressionofECT2andP21proteininbreastcanceranditsclinicalsignificance

WANG Hongkun,ZHENG Huixia*,LIANG Jianfang,XIAO Hong

(DepartmentofPathology,FirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;*Correspondingauthor,E-mail:huixiazheng62@126.com)

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of ECT2 and P21 proteins in breast cancer.MethodsExpression of ECT2 and P21 proteins was detected in 133 cases of breast cancer tissues and 80 cases of normal breast tissues using EnVision immunohistochemistry.ResultsThe positive expression rates of ECT2 protein were 55.6% and 8.8% in breast cancer and normal breast tissues, respectively, and there was significant difference between the two groups(P<0.05). The positive expression rates of P21 proteins were 66.9% and 12.5% in breast cancer and normal breast tissues, respectively, and there was significant difference between the two groups(P<0.05).The expression of ECT2 and P21 protein was not correlated with age, tumor size, tumor type(P>0.05), but correlated with tumor grade, lymphatic metastasis and TNM staging(P<0.05). ECT2 expression was negatively correlated with P21 expression in breast cancer(r=-0.242，P<0.05).ConclusionThe expression of ECT2 and P21 protein may play a role in the development of breast cancer, and inhibit each other.

breast cancer; epithelial cell transforming sequence 2; P21

R737.9

A

1007-6611(2017)10-1057-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.10.017

王宏坤,男,1979-10生,碩士,主治醫師,E-mail:whk2005002@163.com

2017-06-30