■ 王維 (廈門科環海洋生物科技有限公司)
10月了解弧菌很重要!多事之秋謹防弧菌感染,一文教你如何處理防控
■ 王維 (廈門科環海洋生物科技有限公司)
6~10月是水產養殖的發病高峰期,水產人基本都應該知道。同樣的,10月也是對蝦養殖的又一個關鍵時期。此時的晝夜溫差更大,更容易影響水生微生物的活動繁殖和種群更替,水質更不容易穩定和調理,污染物更易積聚也更難處理,而且水溫已經降到適合細菌繁殖的范圍內,更容易感染養殖動物使其發病。這些對于剛剛從白露那里劫后余生的池塘而言,又是一個多事之秋。
這個時期無論是南方的秋綿雨,長江區域突如其來的寒流,還是10月底華中、華東區域的霜后暖,亦或是冬棚養殖的初期階段都容易出現一個問題,就是弧菌感染。說起弧菌,這個概念一開始是從細菌病里分支出來的。其實直到2008年、2009年時對蝦養殖還基本都只是在提細菌病而已,后來慢慢才有弧菌一說,當然那時開始就有了各種處理方案,其實大家都還是用常規細菌病的通用方法來處理的。而效果確實也差不了多少。很多時候都可以得到很好的解決,所以一直有好幾年都沒人刻意的留意弧菌會有多厲害。直到2012年之后,弧菌病越來越厲害,漸漸成為對蝦養殖界一個主流的發病原因之一,人們這才開始去針對性的檢測、研究以及防控。當然,回顧以前,也有一種可能是以往發病厲害的那些病原很可能也是弧菌,只是當時的檢測手段研究方向不對而已,這些現在我們就不得而知了,我們只需要知道的是,現在有這個條件,而且是非常簡易便捷廉價的手段能檢測常規的一些高致病性弧菌,從而給我們的處理防控提供及時的參考。

副溶血弧菌的綠色菌落

感染副溶血弧菌后紅肝紅腸

黑鰓

紅腿

弧菌感染導致的紅肝

弧菌感染紅腳紅腿

弧菌感染引發急性細菌性腸炎

黃色菌落

黃腿
弧菌,是一類尾有鞭毛弧形菌體的革蘭氏陰性細菌的統稱。大多數為好氧菌(這一點是經過筆者公司實驗研究證實的。至于很多報道有說是厭氧菌這是常識性錯誤,雖然一些種類是兼性厭氧的,但基本都可以在有氧條件下繁殖),部分種類有嗜鹽性。大多數弧菌代時不超過10min,所以其繁殖快(感染到發病相隔時間短)變異快(易產生耐藥性)。
對蝦養殖常見的弧菌有:副溶血弧菌、溶藻弧菌、霍亂弧菌、鰻弧菌、哈維氏弧菌等。有報道說坎貝氏弧菌、河弧菌和創傷弧菌也能感染對蝦,但未經研究考證一般說得很少。
適溫范圍5~47℃,最適30~37℃;pH值適應范圍7.4~8.5;嗜鹽性,適鹽范圍20‰~30‰,5‰以下影響生長;嚴格好氧。在TCBS(瓊脂弧菌培養基)上能形成直徑2~3mm的綠色粘滑菌落(接種環輕觸似口香糖質感)。
染病對蝦呈現體表暗紅色(紅體、紅腿、紅尾、紅腸、紅肝);肝臟腫大發黃,嚴重的出現萎縮(一般是慢性感染或小蝦);慢性感染的出現空腸空胃,爬邊,趴坑,瀕死的蝦出現離群水面漫游;不到5cm的小蝦會出現肝臟萎縮,體色有發白(也有發紅,但不會紅得太明顯),甲殼發軟,拖便甚至白便。慢性感染的會在放苗60d甚至40d之內出現白便癥狀,即使處理好轉也會很長時間吃不起料來,大大影響生長速度。感染時間稍長的也很難發現前期癥狀(因為都是個別蝦爬邊,即使有漫游的也很快會下沉死亡,并被其它蝦分食),一旦看到死亡,往往已經進入發病中后期,并且常伴隨肝臟萎縮、停食等嚴重癥狀,即使用藥對癥,也要相當長一段時間才能處理好,這個漫長的時間,非常考驗養殖者或技術員的耐心和經驗,所以大多數的養殖者最終都是以處理失敗或放棄治療而告終。而急性感染的池塘從出現發病到整塘嚴重死亡只有2~3d時間,若要處理,必須在一看到發病就開始用藥,稍一拖延或用藥不對,就會加重病情,還不如不搞直接賣蝦。另外,副溶血弧菌常會繼發或并發一些病毒病(尤其是弱毒型的慢性病毒病),從而導致大批量的死亡(死亡很大程度是因為副溶血弧菌的毒力影響)。
適溫范圍17~42℃,最適25~32℃;pH值適應范圍6~8.5;嗜鹽性,適鹽范圍5‰~50‰,淡水不生長;兼性厭氧,在有氧條件下也能生長;在TCBS上形成直徑2~3mm以上的黃色粘稠、光滑濕潤、邊緣整齊、圓形凸起的菌落,且接種環不易挑取。
溶藻弧菌最早是從藻類里分離發現的,可與大多數藻類共生,對于環境而言,其少量存在時算是一種有益的微生物,有穩定藻相水質的作用,只有過多繁殖才會出現致病性,所以是海水養殖動物常見的條件致病菌之一。此病夏季多發,對蝦從幼體(幼體菌血病)到大蝦(褐斑、細菌性爛鰓黑鰓、細菌性紅體、細菌性白斑)都能感染。感染對蝦呈現爛鰓、紅體、空腸空胃、肝臟腫大、甲殼潰爛等癥狀。此病是蝦苗幼體階段的主要疾病之一,對對蝦幼苗的存活率影響非常大。而到了養殖期間尤其是養殖中后期此病的發病幾率也非常高,尤其是海水養殖區域對蝦爛黑鰓、對蝦紅腿病、細菌性白斑、褐斑病等都是常見高發疾病。既然是條件致病菌,在處理這個弧菌時就不能簡單的殺菌消毒,而是必須同時調理環境,若是忽視了環境的改善,即使短時間殺滅控制住弧菌的感染和蔓延,隨后也會很快復發。另外,有經驗的養殖者應該都知道,溶藻弧菌引發的如爛鰓、黑鰓、白斑、褐斑都是復發率非常高的富貴病。這些無論是環境改良、營養調理還是弧菌防控都必須方方面面做到位,否則不但病癥很難治愈,而且即使暫時搞好疾病也會很快就卷土重來。
適溫范圍20~45℃,最適37℃左右;pH值適應范圍6.0~9.0;廣鹽性,適鹽范圍0‰~45‰;兼性厭氧(有氧條件一樣可以感染);在TCBS上形成直徑2~3mm以上的黃色菌落;霍亂弧菌的一些種類可以發光。
霍亂弧菌(水產尤其是對蝦上主要是非01型霍亂弧菌)是非常普遍的一種弧菌,處理起來也見效甚微,筆者看來這有點類似大腸桿菌,一定數量之內與對蝦屬于共生關系,只有在一定條件下,繁殖過多時才會引發病變。發病對蝦水面漫游、眼球腫脹(嚴重的直接潰爛至眼柄)。瀕死對蝦肌肉白濁。此病單獨致死的往往是很大規格的對蝦,本身死亡率并不大,往往是繼發或并發其他病菌致死。近幾年有發現一些小蝦若是感染過多霍亂弧菌會誘發嚴重的慢性腸炎,時間一長會引發拖便、水腸、細腸、甚至2個月內就會出現白便甚至肝臟萎縮,是這幾年苗期偷死、白便、慢大的主要病因之一。
適溫范圍4~37℃,最適24~35℃;pH值適應范圍5~11;嗜鹽性,適鹽范圍5‰~50‰,淡水不生長;兼性厭氧(在有氧條件下也能感染);在TCBS上形成1~2mm以上的黃色菌落。
感染對蝦癥狀與副溶血弧菌非常類似:體紅、腿紅、尾紅、紅腸等。病蝦會出現有明顯的身體消瘦,頭胸甲心臟附近常出現白濁或發紅,嚴重的或長期感染的蝦還會出現爛鰓或黃黑鰓,腸道出現黃色粘液。鰻弧菌很少單獨感染對蝦,常是對蝦先感染或攜帶病毒(如IHHNV、白斑病毒、紅體病毒等),體質下降之后環境又達到鰻弧菌繁殖的條件時才大量繁殖令對蝦致死,所以常會檢測到某種病毒和鰻弧菌同時存在,這也是鰻弧菌發病起來死亡非常嚴重的原因之一。所以想要治療,哪怕再及時也只是一句空話,因為時間上根本來不及,只能靠預防。
適溫范圍16~37℃,最適27~32℃;pH值適應范圍6.0~9.5;嗜鹽性,適鹽范圍12‰~30‰,淡水不生長;好氧性;在TCBS上形成1~2mm以上的黃色菌落。
哈維氏弧菌一般感染苗種階段的對蝦,除非池塘環境較差、水源問題較大或體質很差的小蝦(200條以內)才會感染。所以一般養殖池塘里較少遇到,而大多數都是在苗廠或淡化暫養池中出現,是蝦苗的熒光病的菌原之一。染病小蝦游動彈跳乏力,漫游于水體中下層,最終也是死于池底(也是早期偷死癥的病原之一)。哈維氏弧菌是典型的發光細菌之一,嚴重感染或瀕死的小蝦會出現身體發光(一開始是口器、鰓部和生殖腺部位發光,之后慢慢進入體內尤其是頭胸部,最后蔓延全身)的現象。要注意,哈維氏弧菌很容易對抗生素產生耐藥性,在有抗生素污染的水源區域,一旦感染就很難控制。
養殖一線一般通過TCBS(瓊脂弧菌培養基,即硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養基)來做弧菌培養檢測。其配方成份為:酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、硫代硫酸鈉10g/L、枸櫞酸鈉10g/L、牛膽粉5g/L、牛膽酸鈉3g/L、蔗糖20g/L、氯化鈉10g/L、檸檬酸鐵1g/L、麝香草酚蘭0.04g/L、瓊脂15g/L。培養基pH值為8.6±0.1,保存溫度為25℃。做弧菌培養前稱取8.9g,煮沸溶解于100mL蒸餾水中, 冷至60℃左右時,傾入無菌培養皿,自然冷卻即可得到一個弧菌培養皿。檢測時用接種環沾取樣品在TCBS上劃線,之后放入恒溫箱,設定32~35℃,培養12~36h即可得到檢測結果。
TCBS上常見有3種顏色,分別為:綠色——副溶血弧菌、河流弧菌;黃色——溶藻弧菌、霍亂弧菌、哈維弧菌、鰻弧菌;黑色——腸桿菌科(如沙門氏菌。因其能代謝產生的硫化物能和培養基里的鐵離子反應生成黑色物質)。
而TCBS上出現的菌落數量也可以定量的說明,樣品大概的弧菌的數量。
處理弧菌一直是這幾年來對蝦養殖界廣泛研究討論的話題,方法不是沒有,而是非常多,以前處理細菌感染的絕大多數方法其實都是有一定作用的。只是現在的養殖中存在幾點問題,如下文所示。
大多數傳統殺菌手法都是好壞通殺,這會導致本來就惡化的環境(絕大多數的弧菌都是在環境很差時才爆發的)進一步變差,往往是弧菌還沒完全殺滅,魚蝦就已經頂不住環境壓力。
很多時候即使暫時可把多數弧菌給殺滅,依然會因為惡劣的環境導致有益菌群很難正常繁殖起來,占據優勢,而缺乏有益菌群的水體環境,時間一長又會被弧菌慢慢繁殖起來占據優勢。所以弧菌的復發率是相當高。
由于很多弧菌代時很短,繁殖速度極快,很容易對藥物產生耐藥性,所以往往之前用得有效的藥物,第2次或第3次使用時就效果減半甚至完全沒有藥效。因此處理弧菌得經常各種藥物交替使用。
綜合上述幾點,我們一般處理弧菌都最好用化學類、中藥、和生物制劑搭配使用,比如三黃散(或大黃)配聚維酮碘;過硫配過碳酸鈉;蛭弧菌配乳酸菌。這3個搭配方案算是現在市場上用起來比較好用的。若是嚴重感染的甚至可以先連續用2~3次大黃+碘,配合晚上干撒過硫+過碳(顆粒粉劑都可,最好是各一半),這樣搭配處理2~3d后再用蛭弧菌配乳酸菌或芽孢或光合菌殺菌的同時補充水體有益菌相。若是懷疑體內感染弧菌的(紅腸、紅肝明顯),可以拌喂中藥+聚維酮碘1~2d,之后拌喂蛭弧菌+芽孢或乳酸菌2~3d。注意內服無論哪個搭配方案都不能太長時間,超過3d就可能會影響腸胃正常消化吸收功能。
弧菌有強毒株和弱毒株之分,多數弧菌在一定數量以內其實是不會對宿主有太大危害的。但若是環境變了,哪怕是弱毒株也可能慢慢復壯或是突變為強毒株。而這才是弧菌真正的危險之處。所以哪怕是完全正常的養殖情況下,若是檢測發現弧菌超標也得適當的用藥控制一下,以免任其繁殖蔓延突然什么時候變異成為強毒株就為時晚矣。同時即使用藥后明顯減少弧菌數量或發病癥狀得到緩解,也不能忽視環境的調理。處理弧菌問題,其實最根本的還是對環境的恢復正常。
很多弧菌都是好氧的,即使兼性厭氧的弧菌絕大多數也能在有氧條件下感染對蝦。這也就是為何我們經常看到往往是水好水靚的池塘更易爆發弧菌病的原因。
多數弧菌的代謝產物在水溫超過38℃時毒性會大大降低。但在一定水溫范圍內(20~37℃),弧菌的毒性是隨著水溫升高而升高的,而且高溫能提高弧菌的易感性,大大縮短發病時間。
環境的污染會促進弧菌的變異和抗藥性的產生(如霍亂弧菌、哈維氏弧菌)。同時水體的富營養化程度越大越能促使細菌、病毒并發感染的幾率升高。
弧菌能在池底淤泥、泥沙、池壁上附著潛伏很長時間,甚至一些能頂過清塘消毒這些相對惡劣的環境。所以有發過弧菌的池塘或養殖區域,清塘消毒必須嚴格操作,用藥得加大劑量,同時用藥處理的時間也得留夠。
弧菌檢測培養時間不能超過48h,否則顏色會變化,甚至是相反,如霍亂弧菌時間長了就會漸漸變成藍綠色,而副溶血弧菌的綠色也會慢慢變淺到看不清是綠色。
很多弧菌是廣鹽性的,并非人們以前認為的必須要有一定鹽度才繁殖。而事實證明,近幾年很多淡水區域已經越來越頻繁的開始爆發嚴重的弧菌疾病(如今年的鹽城、贛榆、湖南)。作為養殖者這一點不得不防。
相對甲殼類而言弧菌也并非一無是處,弧菌在幾丁質物質循環里扮演非常重要且幾乎是不可替代的角色。幾乎所有的弧菌都能產生幾丁質酶,能幫助自然界處理成千上萬的甲殼、皮毛等廢物。對于機體而言也正是因為弧菌的這些代謝產物能促進一些營養物質的分解和消化。所以和大腸桿菌一樣,弧菌也不能完全殺滅干凈。