一個全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥家系的臨床表型及SCN1A基因突變篩查

綦 瑩，王春雨，于淑杰，王 葳，李冠群

（哈爾濱市兒童醫院神經內科，黑龍江 哈爾濱 150010）

一個全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥家系的臨床表型及SCN1A基因突變篩查

綦 瑩，王春雨，于淑杰，王 葳，李冠群

（哈爾濱市兒童醫院神經內科，黑龍江 哈爾濱 150010）

目的總結全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥家系（GEFS+）遺傳規律及臨床表型，并分析有無鈉通道α1亞單位基因（SCN1A）突變。方法 收集先證者及家系成員臨床資料（起病年齡、發作形式、預后情況等），繪制家系譜，總結該家系患者的臨床特征。收集家系成員的外周血，對先證者及家系成員和對照組SCN1A基因全部外顯子進行測序、比對。結果 該家系臨床表型包括熱性驚厥（FS）、熱性驚厥附加癥（FS+）、無熱全面強直陣攣發作（AGTCS）、FS+伴失神發作，該樣本分析到SCN1A基因有1個雜合突變：c.2591C＞T（編碼區第2591號核苷酸由胞嘧啶變異為胸腺嘧啶），導致氨基酸改變p.T864M（第864號氨基酸由蘇氨酸變異為甲硫氨酸），為錯義突變。結論 全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥具有表型異質性和遺傳異質性，可由SCN1A基因的錯譯突變導致。

全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥；SCN1A基因；家系；突變

全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥（generalized epilepsy with febrile seizures plus，GEFS+）是一種兒童期發病的特發性癲癇綜合征，通常以一個家系為研究整體，它的遺傳方式通常為常染色體顯性遺傳，最常見的發作形式為熱性驚厥（Febrile seizures，FS）和熱性驚厥附加癥（Febrile seizures plus，FS+）[1-2]。目前發現相關基因主要有SCN1B、SCN1A、SCN2A、GABRG2和GABRD，其中電壓依賴性鈉通道α1亞基基因（SCN1A）突變與癲癇聯系最密切[3-4]，本研究選擇一我國北方地區GEFS+家系進行臨床表型分析，繪制家系譜，以總結其遺傳規律，對SCN1A基因進行突變篩查，以探討SCN1A基因在這一GEFS+家系中的突變情況，分析變異遺傳方式，以及基因型與表型的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

一個GEFS+家系，來自中國黑龍江省漢族人。先征者于2015年1月～2017年1月在哈爾濱市兒童醫院神經科門診就診，就診年齡6歲，跟蹤隨訪2年。該家系中四代成員共有34人，有驚厥病史共11人，其中男5例，女6例，平均發病年齡1～5歲。另外隨機選取30例健康對象。

1.2 家系成員表型分析

根據ILAE2010年癲癇發作與癲癇綜合征分類標準[5]，對所有先證者及家系其他受累成員的起病年齡、發作形式、發作頻率及預后情況、腦電圖特點及頭顱影像學資料等進行分析，繪制家系圖，見圖1。

圖1

1.3 方法

抽取該家系8名家系成員（7名患者及1名健康成員）及30名正常對照的外周靜脈血4 mL，使用QIAGEN公司DNA提取試劑盒進行基因組DNA提取。設計SCN1A基因的全部外顯子的擴增引物（由上海生工公司合成）。對所有患者及30例正常對照組進行PCR擴增。PCR產物純化后送上海生工公司進行測序分析。將測序結果與GenBank中SCN1A全基因組序列進行比對，對測序結果進行分析。

2 結 果

該家系共4代34人，有患者11例，其中男性5人，女性6人。此GEFS+家系每代都有驚厥發作患者，并且男女患者兼有，呈典型的常染色體顯性遺傳方式。家系圖譜如圖1所示。先證者，男，8歲，于13個月時發熱后首次出現抽搐發作，13個月-3歲共出現熱性驚厥6次，3歲后出現無熱抽搐，發作類型均為AGTCS，每年發作4-5次，VEEG檢查發作間期額、顳部散在尖波、尖漫波，頭顱MRI均未見異常，于6歲開始口服丙戊酸鈉至今2年，無抽搐發作。家系成員Ⅰ2代及Ⅱ9（有年幼抽搐發作史，具體發作形式及發病年齡不詳）已去世，Ⅱ2、Ⅱ5、Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ9、Ⅲ15、Ⅳ4等7人均有5歲前高熱后強直陣攣FS發作史，其中Ⅱ2在5歲后出現無熱抽搐病史（AGTCS發作），1～2次/年，智力、語言及運動發育均正常，未予治療，于8歲后未再出現抽搐，其余6人5歲后抽搐自然停止。Ⅳ1表現為熱性驚厥附加癥（FS+）伴失神發作，腦電圖表現為雙側對稱的3Hz棘-慢波，因發作不頻繁，目前未予藥物治療。

首先對先證者的SCN1A進行測序。該樣本分析到SCN1A基因有1個雜合突變：c.2591C＞T（編碼區第2591號核苷酸由胞嘧啶變異為胸腺嘧啶），導致氨基酸改變p.T864M（第864號氨基酸由蘇氨酸變異為甲硫氨酸），為錯義突變。我們隨后對家系中Ⅱ2、Ⅱ5、Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ9、Ⅳ4進行測序他們都有這個突變，而我們對家系內的Ⅳ3（健康，無驚厥發作）進行測序沒有發現這個突變位點。測序結果如圖2、圖3所示。最后7名患者和30例正常對照的PCR產物的測序結果與基因組序列相對比，均未發現堿基改變。該位點為致病性變異。

圖2 家系中先證者測序結果

圖3 家系中正常人測序結果

3 討 論

GEFS+是近年來研究較多的一種癲病綜合征，SCN1A基因為GEFS+家系的重要致病基因[6-7]，研究報道外顯率為60%～70%[8]。而本研究中，家系全部受累者均存在同一SCN1A基因突變位點，未受累者中未發現SCN1A突變情況，外顯率高于文獻報道，但本研究中有一些家系成員的標本未采集全，可能對結果有所影響。GEFS+常有癲癇或FS家族史，一個家族中可有多種發作形式，多數僅表現為FS，但部分病人6歲后出現無熱性強直-陣攣的發作，稱為FS+。較少見的發作類型包括FS+伴失神發作、FS伴肌陣攣發作、FS+伴失張力發作、FS伴顳葉癲癇（TLE）等，GEFS+多數呈良性經過，智力運動發育正常，一般預后良好。本發研究家系現家族四代人均有發病，男女兼有，家系成員發作類型有FS、FS+、FS+伴失神發作，同一個基因的同一個突變導致不同的臨床表型，符合文獻報道的存在表型異質性[9-10]。

研究表明GEFS+是“離子通道病”[11]，其中GEFS+的大多數突變是在SCN1A上發現的，突變類型有剪切、錯義、缺失等，一般認為錯義突變對蛋白質的功能影響相對差異比較小，可導致鈉通道興奮性增加或降低，從而導致較輕的臨床表型。我們的研究也證實了這一點，家系中全部患者均呈良好過程，除先證者藥物控制發作外，其余患者隨年齡增長，抽搐均自行停止，并未發現文獻報道的其它嚴重發作類型。通過本家系SCN1A基因篩查，發現一個SCN1A基因的雜合突變，c.2591C＞T（編碼區第2591號核苷酸由胞嘧啶變異為胸腺嘧啶），導致氨基酸改變 p.T864M（第864號氨基酸由蘇氨酸變異為甲硫氨酸），為錯義突變。該變異不屬于多態性位點，在人群中發生頻率極低。HGMD專業版數據庫已報道與GEFS+2相關。經家系驗證分析，該位點為致病性變異，是該家系的致病原因。

本研究報道了我國黑龍江地區一GEFS+家系，與國內外研究相符合，存在表型異質性及異常異質性，發現了致病性基因突變，此突變非新的突變位點，但目前國內關于致GEFS+的SCN1A基因此位點突變尚未見報道，可能與我國地域差異有關。黑龍江地區GEFS+家系研究未見相關報道，本研究，樣本例數少，需進一步收集更多的家系，提高基因篩查技術水平，為基因診斷和遺傳咨詢奠定基礎。

[1] Wallace RH,Wang DW,Singh R,et al.Febrile seizures and Gener alized epilepsy associated with a mutation in the Na(+)-channel beta-1 subunit gene SCN1B[J].Nature Genet,2008,19:366-370.

[2] Scheffer IE,Berkovic SF.Generalized epilepsy with febrile seizures plus.A genetic disorder with heterogeneous clinical phenotypes.Brain,2007,120:479-490.

[3] Pineda-Trujillo N,Carrizosa J,Comro W,et a1.A novel SCN1A mutation associated with severe GEFS + in a large South American pedigree.Seizure,2005,14:123-128.

[4] Nagao Y,Mazaki-Miyazaki E,Okamura N,et al.A family of generalized epilepsy with febrile seizures plus type 2-a new missense mutation of SCN1A found in the pedigree of several patients with complex febrile seizures.Epilepsia Res,2005,63:151-156.

[5] Berg AT,Berkovic SF,Brodie MJ,et al.Revised terminology and concepts for organization of seizures and epilepsies:report of the ILAE Commission on Classification and Terminology,2005-2009[J].Epilepsia,2010,51(4):676-685.

[6] Harkin LA,Bowser DN,Dibbens LM,et al.Truncation of the GABA(A)-receptor gamma subunit in a family with generalized epilepsy with febrile seizures plus[J].Am J Hum Genet,2002,70(2):530-536.

[7] Wallace RH,Wang DW,Sinsh R,et al.Febrile seizures and generalized epilepsy associated with a mutation in the Na+-channel beta1 subunit gene SCN1B[J].Nat Genet,2008,19(4):366-370.

[8] Scheffer IE,Zhang YH,Gecz J,et al.Genetics of the epilepsies:genetic twists in the channels and other tales[J].Epilepsia,2010 51(Suppl 1):33-36.

[9] Wang J.Clinical analysis of febrile convulsion:a report of 174 cases[J].China J Pract Intern Med,2006,26(S1):131-132.

[10] 許小菁,張月華,孫慧慧,等.全面性癲癇間伴熱性驚厥附加癥39個家系的臨床表型和SCN1A基因突變分析.中華兒科雜志,2012,50(8):580-586.

[11] 于美娟,陳 俐,高玫梅,等.具有SCN1A基因錯義突變(R1596C)的遺傳性GEFS+家系1例報道.現代醫院,2009,9:3-5.

R742.1

B

ISSN.2095-8242.2017.46.8952.02

哈爾濱市兒童醫院科研種子基金資助項目（HEY201403）

本文編輯：吳玲麗