高脂血、溶血標本對PCR測定低水平HBV-DNA檢測結果的影響分析

●龔丹

高脂血、溶血標本對PCR測定低水平HBV-DNA檢測結果的影響分析

●龔丹

目的：研究高脂血、溶血標本對PCR測定低水平HBV-DNA檢測結果的影響。方法：對收治的80例三酰甘油(TG)正常(TG≤11.46mmol/L）且實時熒光定量PCR測定為(4.0-9.0)×103IU/mL的乙型肝炎患者采集血清標本，進行即刻檢測，另外采集80份乙肝五項全陰且檢測不出HBVDNA的高TG標本和80份乙肝五項全陰且檢測不出HBV-DNA的全血標本分別制備成高脂血、溶血血清標本，對以上標本進行比較配對檢驗。結果：高脂血和非高脂血、溶血血清和非溶血血清的HBV-DNA水平間存在較大差異，且差異有統計學意義(P＜0.05）。結論：高脂血、溶血標本低水平HBV-DNA的PCR測定較正常樣本結果降低。

高脂血；溶血標本；PCR測定；低水平HBV-DNA

HBV是引發乙型肝炎感染的主要致病菌，由于乙型肝炎具有較強的傳染性，且易感人群較廣，因此，乙型肝炎的早期發現與診斷在臨床防治過程中十分重要。HBV-DNA能夠反映HBV復制感染情況，對于病情診斷及臨床治療有較重要的依據作用。目前，臨床上測定HBV-DNA水平的主要方法為熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)技術，其靈敏度高、特異性高、操作簡便且不易感染，可以進行實時檢測，但在臨床實踐中，PCR測定中易受到各種干擾，其中來自血清標本本身的因素較為嚴重[1]。本文就高脂血、溶血標本對PCR測定水平HBV-DNA檢測結果的影響，故采集3種類型的血清標本進行配對比較，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對我院肝病門診2015年3月至2016年3月間收治的80例三酰甘油(TG)正常(TG≤11.46mmol/L）且實時熒光定量PCR測定為(4.5-9.0)×103IU/mL的乙型肝炎患者采集血清標本，進行即刻檢測，另外采集80份乙肝五項檢測結果全陰且未檢測出HBV-DNA的高TG標本和80份乙肝五項檢測結果全陰且未檢測出HBV-DNA的全血標本分別制備成高脂血、溶血血清標本，對以上標本進行比較配對檢驗。

1.2 儀器與試劑

熒光定量PCR檢測儀(杭州博日Line-Gene 9620型熒光定量PCR 擴增儀)，血液分析儀(日本Sysmex公司，產品型號：XT-2000i)，全自動生化儀(BECK MAN 的AU2700型)及乙肝病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒(深圳凱杰基因股份有限公司)。

1.3 檢測方法

80例乙肝患者空腹抽取3ml靜脈血，離心后將血清混勻，采用血液分析儀測定血紅蛋白，全自動生化儀測定總膽紅素與TG值。

采集80份乙肝五項檢測結果全陰且未檢測出HBV-DNA的高TG標本，離心10后，取血清混勻并用生理鹽水稀釋成TG濃度分別為35、25、15、5mmol／L的溶液。將80例乙肝患者血清標本分為4組，分別與各濃度TG溶液以1∶1比例混勻，制成模擬標本。

另有80份乙肝五項檢測結果全陰且未檢測出HBV-DNA的全血標本，離心后丟棄血清，并用生理鹽水清洗3遍，進行溶血處理，將溶血后的標本混勻并用生理鹽水稀釋成Hb濃度為30、60、120、240g／L的溶液。將80例乙肝患者的血清標本分為4組，分別與各濃度Hb溶液以1∶1比例混勻，制成模擬標本。

以上所有模擬標本檢測均采用乙肝病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司)，全部操作均按照說明書進行。

1.4 觀察指標

分析不同TG水平標本對低水平HBV-DNA的PCR檢測結果的影響；分析不同溶血狀態標本對低水平HBV-DNA的PCR檢測結果的影響。

1.5 統計學處理

2 結果

(1)乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結果，血脂水平與低水平HBV-DNA的PCR水平呈反相關性，詳情見表1。

表1 乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結果

表1 乙肝患者高脂血血清與非高脂血血清的HBV-DNA定量檢測結果

(2)乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結果，溶血程度與低水平HBV-DNA的PCR水平呈反相關性，兩組數據差異存在統計學意義(P＜0.05），詳情見表2。

編號 TG值(mmol/L) 高血脂(×103copy/ml) 非高血脂(×103copy/ml)1 35 3.35±0.78 6.12±1.52 2 25 3.74±0.95 6.84±1.73 3 15 4.16±1.02 7.48±1.88 4 5 4.38±0.98 7.23±1.82

表2 乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結果

表2 乙肝患者溶血血清與非溶血血清的HBV-DNA定量檢測結果

1 30 3.69±0.89 5.52±1.37 2 60 3.67±0.85 5.29±1.32 3 120 3.58±0.93 5.45±1.36 4 240 3.41±0.85 5.31±1.27

3 討論

HBV-DNA水平檢測可以反映乙肝患者的感染情況，為早期診斷與臨床治療提供依據，因此，低水平HBV-DNA檢測的重要性不言而喻，目前臨床檢測HBV-DNA水平主要采用熒光定量PCR檢測，其敏感度高，操作簡便，但抗干擾性不高，易受影響[2]，因此，本文主要研究高脂血與溶血標本對低水平HBV-DNA測定的影響。

研究數據顯示，血脂越高，HBV-DNA檢測值越低，溶血程度越高，HBV-DNA檢測值越低，總之，高血脂與溶血標本對低水平HBV-DNA的PCR檢測存在影響，實驗室檢驗中應注意采取相關措施，提高監測準確性。

（作者單位：中江縣人民醫院）

[1] 張翠莉,劉萍,魏文波.脂血和溶血對HBV-DNA實時熒光定量PCR檢測的影響[J].武警醫學,2012,23(02):150-152.

[2] 林森,易榮.實時熒光定量PCR對乙肝DNA檢測的影響因素[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(01):127-128.