馮了性跌打風濕藥酒指紋圖譜的研究

●陳改敏

馮了性跌打風濕藥酒指紋圖譜的研究

●陳改敏

目的：本文對馮了性風濕跌打要就指紋圖譜進行檢測的方法進行論述。方法：對于馮了性跌打風濕藥酒的指紋圖譜，采用HPLC方法進行監(jiān)理，廚房中的直白哦成分，用量較大的包括麻黃、桂枝、陳皮、丁公藤等，采用對比參照的方法進行研究，使用的指紋圖譜分析的軟件為重要色譜指紋圖譜相似度的評價系統(tǒng)。結果：以驗算鹽酸偽麻黃堿、桂皮醛、柚皮苷等為參照，對馮了性跌打風濕藥酒進行HPLC指紋圖譜的分析，確定了獨照指紋圖譜的相似度，藥酒的色譜圖、共有峰等。結論：采用HPLC法進行馮了性跌打風濕藥酒的指紋圖譜的評價，具有很好的重復性、穩(wěn)定性以及精密度，值得加以推廣使用。

馮了性風濕跌打藥酒；HPLC法、指紋圖譜

1 儀器與材料

馮了性跌打風濕藥酒指紋圖譜進行測定的儀器，選用了高效液相色譜儀、電子天平等。對照東菪內酯、桂皮醛等，采用藥品生物制品鑒定所進行鑒定的方法，對國藥集團生產的馮了性跌打風濕藥酒進行了檢測，要藥酒的規(guī)格為500ML每瓶（從S1-S10)，水位超純水，甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法和結果

(1)色譜條件采用的流動相為甲醇的醋酸磷酸，其中醋酸含量為0.1%，磷酸的含量為-0.1%，色譜柱為C18柱，流動相B采用梯度洗脫程序，按照體積進行時間的設定，12%的流動相洗脫的時間為30分鐘，25%以內的體積洗脫的時間最長為50分鐘，38%的流動相洗脫的時間最長為50-75分鐘，60%的流動相洗脫的時間最長為95分鐘，90%的流動洗脫的時間為100分鐘。對波長進行檢測，300 nm的檢測時間為0-10分鐘，210 nm的檢測時間為10-20分鐘，800 nm的檢測時間20-100分鐘，進行色譜測試的柱溫度為30攝氏度，流速為1ML/m in[2]。

馮了性風濕跌打風濕藥酒指紋圖譜

1-15 分別為鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、東莨菪苷、綠原酸、東莨菪內酯、柚皮苷、新橙皮苷、桂皮醛等，其余峰號未能歸屬

(2)取馮了性風濕跌打藥酒。10 m L作為續(xù)濾液進行供試品溶液的制備，加甲醇稀釋至刻度過 0．45 μm 微孔濾膜，置 20 m L量瓶中，按照精密量進行搖勻。

精密稱取質量濃度、體積分數(shù) 80%甲醇水溶液溶解，包含了鹽酸偽麻黃堿( 40 μg /m L ）東莨菪內酯( 40 μg /m L) 、鹽酸麻黃堿( 40 μg /m L)、綠原酸 ( 40 μg /m L) 、桂皮醛( 10 μg /m L)、新橙皮苷 ( 80μg /m L)、鹽酸偽麻黃堿、柚皮苷( 80 μg /m L) 、東莨菪苷( 212μg /m L) 對照品[3]。

(3)精密度試驗。將結果導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，按“2．1”項下的色譜條件，取馮了性風濕跌打藥酒 ，平行進樣 6 次，按“2．2”項下方法進行色譜峰匹配并制備供試品溶液，結果 15 個共有峰的相對峰面積 R SD 均 ＜ 5%，相對保留時間SD 均＜1%。

(4)穩(wěn)定性試驗。按“2．1”項下色譜條件，取馮了性風濕跌打藥酒，分別于 0、2、4、8、12、24 h 進樣測定，相對峰面積 R SD 均 ＜ 5%，供試品溶液在24 h 內進行制備供試品溶液，結果 15 個共有峰的相對保留時間 R SD 均＜ 1%[4]。

(5)重復性試驗。按“2．2”項下方法，取馮了性風濕跌打藥酒 ，分別進行色譜條件下的進樣，平行制備供試品溶液6 份，按“2．1”項下的結果 15 個共有峰的相對峰面積R SD 均＜5%，相對保留時間 R SD均＜1%，重復性良好[5]。

以馮了性風濕跌打藥酒對東莨菪內酯進行的加樣回收率的實驗為例，按照色譜條件進行含量的測定，操作進行了重復的六次，按照供試品進行了操作和制備，并進行了回收率的計算。得到的結果如下：

加樣回收率實驗結果

（6）指紋圖譜的建立與評價。按上述色譜條件進行測定以及自動匹配，供試品的 HPLC指紋圖譜導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，選取“時間窗寬度”為 0．5 m in，對照指紋圖譜( R) 的相似度分別為 0．988、0．945、0．988、0．944、0．992、0．941、0．973、0． 987、0． 945、0． 983，生成馮了性風濕跌打藥酒對照指紋圖譜，得到 S1 ～ S10 供試品的HPLC 指紋圖譜，設定 S10 為參照圖譜并計算相似度，將 S1 ～ S10 10 批馮了性風濕跌打藥酒 樣 品 進行了HPLC 指紋圖譜的對照，確定了 15 個共有峰。其中8 個色譜峰，分別為東莨菪苷、柚皮苷、東莨菪內酯、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、新橙皮苷、綠原酸、桂皮醛，根據(jù)色譜圖中各色譜峰的相對保留時間，對應峰2、3、4、5、7、11、12、14，峰面積較大且穩(wěn)定，出峰時間適中，經過采用紫外光譜比較以及對照品對照的方式，指認出因圖譜中綠原酸分離度好，保留時間長，因此將其作為色譜參照峰[6]。

3 討論

比較了 Ecosil、Kromasil、Merck 3 種不同品牌型號的色譜柱，確定 210、300 nm 作為檢測波長。在用 DAD 檢測器對供試品溶液進行檢測時，優(yōu)選了 Kromasil C18柱( 4．6 mm×250 mm，5 μm) 為試驗色譜柱。結果顯示在 300 nm 條件下酒中藥材用量較大的麻黃的指標成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿出峰最豐富，故從色譜峰峰形、分離度等方面比較先后選擇了甲醇-0．1%甲酸、甲醇-0．2%醋酸等成分，明顯優(yōu)于360 nm 條件下的出峰情況。流動相的選擇采用甲醇-水-冰醋酸(32∶ 68∶ 0.16)、腈-0.1%磷酸水溶液，結果前者所得色譜基線不平，且藥酒內各種元素的含量其相鄰雜質不能得到較好的分離，且洗出較多雜質，而進行梯度洗脫，相鄰的雜質峰分離度極佳，重現(xiàn)性強。作為流動相系統(tǒng)，藥在 210 nm 處出峰，譜峰分離較理想，0．1%磷酸 =1 ∶1，乙腈-0．1%磷酸、甲醇-0．1%，選擇甲醇和醋酸各0.1%，，色譜峰形好，洗脫能力強，基線平穩(wěn)色譜圖信息量大且分離效果好。

（作者單位：南陽醫(yī)學高等專科學校）

南陽市2015年科技攻關項目，KJGG05

[1] 楊媛媛,陳志永,廖立平等.馮了性風濕跌打藥酒中東莨菪素、東茛菪苷和綠原酸的測定[J].中成藥,2014,36(3)：551-553.

[2] 關紅暉,霍嘉茵,林淑明等.馮了性風濕跌打藥酒HPLC指紋圖譜研究[J].廣東藥學院學報,2017,33(1)：65-67.

[3] 翟敏,吳海龍,張喜華等.三維熒光結合二階校正方法測定風濕藥酒中東莨菪素含量[C].//第十二屆全國電分析化學學術會議論文集 .2014：96-97.

[4] 殷博武 .細說藥酒[J].中國藥店 ,2013,(8)：56-57.

[5] 王常順.無敵藥酒與無敵丹膠囊質量控制方法研究[D].河北醫(yī)科大學,2016.

[6] 馮倩倩,潘鑫,何友花等.旴江醫(yī)家龔廷賢酒療特色初探[J].江西中醫(yī)藥 ,2016,47(3)：11-12.