SNAI2在人腦惡性膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及其與細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移的關(guān)系

馮基高，莫業(yè)和，徐鵬翔，胡德獻(xiàn)，歐陽一彬，張彩彩

(1.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，海南 ?？?570311；2.海南醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，海南 ?？?571199)

·論著·

SNAI2在人腦惡性膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及其與細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移的關(guān)系

馮基高1，莫業(yè)和1，徐鵬翔1，胡德獻(xiàn)1，歐陽一彬1，張彩彩2*

(1.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，海南 ?？?570311；2.海南醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，海南 ?？?571199)

目的觀察鋅指轉(zhuǎn)錄因子2(zinc-finger transcription factor-2,SNAI2)在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移能力的影響。方法收集37例惡性膠質(zhì)瘤患者的臨床資料及腫瘤組織標(biāo)本。采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)組織中SNAI2的表達(dá)水平，分析其表達(dá)與患者臨床病理資料間的關(guān)系。在體外實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建穩(wěn)定干擾SNAI2(small interfering RNA SNAI2，shSNAI2)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，通過噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力，Western blot檢測(cè)E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及緊密連接蛋白(Zo-1)的表達(dá)，檢測(cè)細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的水平。結(jié)果高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中SNAI2的表達(dá)顯著高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤、良性腦膜瘤及正常腦組織，且低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤SNAI2的表達(dá)顯著高于良性腦膜瘤及正常腦組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示SNAI2的表達(dá)與患者性別、年齡及體質(zhì)量不相關(guān)，與患者腫瘤大小及膠質(zhì)瘤細(xì)胞分級(jí)呈正相關(guān)(P<0.05)。MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果示各組細(xì)胞隨時(shí)間增加增殖能力增強(qiáng)，且shSNAI2細(xì)胞系相比對(duì)照細(xì)胞系增殖能力顯著減弱(P<0.05)。劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果示相比對(duì)照細(xì)胞系轉(zhuǎn)移能力明顯減弱(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示shSNAI2細(xì)胞系E-cadherin及Zo-1表達(dá)增高，Vimentin表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論SNAI2在人腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，且與患者腫瘤的大小和分級(jí)密切相關(guān)，其能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及EMT過程的發(fā)生，是潛在的促癌基因。

神經(jīng)膠質(zhì)瘤；鋅指轉(zhuǎn)錄因子2;細(xì)胞增殖

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.11.006

腦膠質(zhì)瘤起源于腦的膠質(zhì)細(xì)胞，是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤，約占腦腫瘤的35.26%～60.96%[1]，按惡性程度分類可將膠質(zhì)瘤分為低級(jí)別膠質(zhì)瘤和高級(jí)別膠質(zhì)瘤，其中高級(jí)別膠質(zhì)瘤又占膠質(zhì)瘤的絕大多數(shù)，其惡性程度高，浸潤性強(qiáng)，且易復(fù)發(fā)，患者5年生存率在5%以下[2]。因此，明確腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制是臨床和基礎(chǔ)研究面臨的重要問題。近年來許多研究顯示，鋅指轉(zhuǎn)錄因子2(zinc-finger transcription factor-2, SNAI2)在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌及胃癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，且在其中參與調(diào)控多種信號(hào)通路，影響腫瘤細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移[3-6]。本研究擬探討SNAI2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與患者臨床資料的關(guān)系，明確其對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的影響，旨在為揭示腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的確切機(jī)制提供線索，并為臨床診治提供新的依據(jù)。

1 資 料 與 方 法

1.1 一般資料 選擇2014年3月—2016年9月海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的惡性膠質(zhì)瘤患者37例，收集患者的臨床資料及手術(shù)切除標(biāo)本，其中男性21例，女性16例；年齡13～64歲，平均(34.1±15.6)歲；體質(zhì)量36～74 kg，平均(53.4±17.3) kg；瘤體≥6 cm 17例，<6 cm 20例；膠質(zhì)瘤Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)12例，Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)25例。患者均為初發(fā)腦膠質(zhì)瘤，手術(shù)切除膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本，取材后液氮保存。同時(shí)取同期良性腦膜瘤25例及因腦外傷行手術(shù)治療的正常腦組織21例，同樣取材后液氮保存。

1.2 細(xì)胞來源 研究所用的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系均來自美國模式菌種收集中心(The Global Bioresource Center，ATCC)，包括U87、U251、U118、U138、U373、T98G、SHG44細(xì)胞系。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 Bio-Rad超凈工作臺(tái)、NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)，Eppendorf PCR儀，ABI 7500 Real-time PCR儀，Bio-Rad電泳儀，轉(zhuǎn)膜儀，凝膠成像儀，酶標(biāo)儀等。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑 RPMI-1640培養(yǎng)基(Hyclone)，DMEM培養(yǎng)基(Hyclone)，F(xiàn)etal Bovine Serum(Hyclone)，RNAiso Plus(TAKARA公司，Code No.: 9108)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Maxima?First Strand cDNA Synthesis Kit,Fermentas)，定量PCR試劑盒(iQ SYBR Green Supermix,BioRad)，細(xì)胞增殖能力檢測(cè)試劑盒(MTS,Promega)，Lipofectamine(Thermo Fisher Scientific公司2000CAT.NO.11668-027)，BCA Assay Reagent(美國Pierce Chemical公司)，PVDF膜(Millpore公司，Cat NO.IPVH00010)，甲醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，10014118)等?？贵w包括SNAI2 antibody(abcam,ab27568)，E-cadherin antibody(abcam,ab15148)，Zo-1 antibody(abcam,ab59720)，Vimentinantibody(abcam,ab92547)，β-actin antibody(santa cruz,sc-4778)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè)組織及細(xì)胞中SNAI2的表達(dá)水平 組織RNA的收集：從液氮中取出組織，剪碎后取20～30 mg置于1.5 mL離心管中，加入1 mL RNAiso Plus，嚴(yán)格按說明書步驟進(jìn)行操作，30 μL無核酶水稀釋。細(xì)胞RNA的收集：收集培養(yǎng)于6 cm培養(yǎng)皿中的對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，胰酶消化后1 mL含血清培養(yǎng)基終止消化，并轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，室溫500 g，5 min離心，棄上清，滅菌PBS沖洗2次，棄PBS，每管加入1mL RNAiso Plus，嚴(yán)格按說明書步驟進(jìn)行操作，30 μL無核酶水稀釋，分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度后取5 μg RNA行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，RT-PCR檢測(cè)SNAI2 mRNA表達(dá)水平。反應(yīng)條件：預(yù)變性94 ℃ 4 min，擴(kuò)增條件94 ℃ 30 s，60 ℃ 1 min，40 個(gè)循環(huán)。SNAI2上游引物：CTCCATCTGACACCTCC-TCC；下游引物：TTTCTAGACTGGGCATCGCA；目的片段大小為201 bp。內(nèi)參基因Actin上游引物序列為TGGCACCCAGCACAATGAA；下游引物序列為CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA；目的片段大小為186 bp。

1.5.2 慢病毒穩(wěn)定干擾U251細(xì)胞系SNAI2的表達(dá) 第1天在6孔板中接種1×106的293T細(xì)胞，第2天細(xì)胞融合度達(dá)80%左右，取1.5 mL無菌離心管，加入1.5 μg包裝質(zhì)粒及0.5 μg目的質(zhì)粒于500 μL無血清DMEM培養(yǎng)基中，脂質(zhì)體與質(zhì)粒3∶1混合后20 mins，緩慢滴入無血清培養(yǎng)的293T細(xì)胞中，7 h后更換含血清的培養(yǎng)基，與之后的24 h及48 h各收集1次病毒懸液，并加以過濾處理。收集的病毒懸液以2∶1的比例與含血清培養(yǎng)基混合，感染待干擾的細(xì)胞系，加入陽離子復(fù)合物polybrene 3 μL，感染3 d后，使用嘌呤霉素進(jìn)行篩選(1 μg/mL)，直至細(xì)胞生長狀態(tài)良好。干擾序列包括隨機(jī)插入對(duì)照序列GV248：GCTGTTTTTTGAGATT-TCAG；sh SNAI2#1：TTCACAGCTGTCCCAGA-GGG；sh SNAI2#2：GCTGTTTTTTGAGATTT-CAG；sh SNAI2#3：GTTGTCAGACTAAATTA-TTC；sh SNAI2#4：GGATCTTTCTTGCAAAA-GAG。

1.5.3 MTS檢測(cè)細(xì)胞增殖活力 96孔板中每孔接種1 000個(gè)待檢測(cè)的細(xì)胞，并設(shè)置5個(gè)平行孔，以細(xì)胞貼壁后為0 h時(shí)間點(diǎn)，分別檢測(cè)細(xì)胞0 h、24 h、48 h及72 h的細(xì)胞增殖能力，具體操作為：MTS液與培基以1∶5的比例混合均勻，混勻后于生化培養(yǎng)箱中避光孵育60 min，多孔板酶標(biāo)儀在490 nm檢測(cè)吸光度，根據(jù)吸光度的大小判斷細(xì)胞的增殖能力。

1.5.4 劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 取對(duì)數(shù)生長的細(xì)胞，6×105每孔接種至6孔板，37 ℃，5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞至長滿，棄去培養(yǎng)基，加入PBS 2 mL，100 μL移液槍頭垂直水平面進(jìn)行劃痕，每孔3～5條，PBS清洗2次后加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜，于24 h進(jìn)行拍照。

1.5.5 Western blot檢測(cè)細(xì)胞蛋白表達(dá)水平 收集待檢測(cè)的對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，10 cm培養(yǎng)皿細(xì)胞融合度達(dá)80%左右，胰酶消化后1 mL含血清培養(yǎng)基終止消化，移至1.5 mL離心管中，室溫500 g，5 min離心處理，PBS洗2次后，300 μL IP裂解液及蛋白酶抑制劑加入細(xì)胞沉淀中，混勻后冰上裂解1.5 h，BCA 法行對(duì)蛋白定量分析，保證每孔上樣量為100 μg總蛋白，配制10%丙烯酰胺膠，80 V穩(wěn)壓跑膠30 min，120 V穩(wěn)壓跑膠1 h，濕轉(zhuǎn)至 PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，一抗 4℃孵育過夜，二抗37 ℃孵育1.5 h，發(fā)光液曝光顯影。一抗?jié)舛缺葹?∶1 000，二抗?jié)舛缺葹?∶3 000，以β-actin作為內(nèi)參。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較分別采用F檢驗(yàn)、SNK-q檢驗(yàn)和重復(fù)測(cè)量的方差分析；相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SNAI2的表達(dá)水平 低級(jí)別膠質(zhì)瘤、良性腦膜瘤、正常組織的相對(duì)表達(dá)量低于高級(jí)別膠質(zhì)瘤，良性腦膜瘤、正常組織低于低級(jí)別膠質(zhì)瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性腦膜瘤與正常組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別例數(shù)相對(duì)表達(dá)量高級(jí)別膠質(zhì)瘤250．232±0．045低級(jí)別膠質(zhì)瘤120．175±0．037?良性腦膜瘤 250．121±0．033?#正常組織 210．104±0．041?#F50．319P0．000

*P<0.05與高級(jí)別膠質(zhì)瘤比較 #P<0.05與低級(jí)別膠質(zhì)瘤比較(SNK-q檢驗(yàn))

2.2 SNAI2的表達(dá)水平與患者臨床資料間的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，SNAI2的表達(dá)與患者性別、年齡及體質(zhì)量均不相關(guān)(rs=0.154、0.276、0.183，P>0.05)，與患者瘤體大小及膠質(zhì)瘤分級(jí)呈正相關(guān)(rs=0.644、0.681，P<0.05)。

2.3 各膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SNAI2的表達(dá)水平 Western blot檢測(cè)U87、U251、U118、U138、U373、T98G、SHG44細(xì)胞系中SNAI2蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示U251表達(dá)較其他細(xì)胞系高，故選取U251構(gòu)建干擾SNAI2細(xì)胞系(shSNAI2)，見圖1，表2。

圖1SNAI2在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中蛋白水平的表達(dá)情況
Figure1TheproteinexpressionlevelofSNAI2inthegliomacellline

組別相對(duì)表達(dá)量U87 0．335±0．012U251 0．627±0．018?U118 0．554±0．021?#U138 0．075±0．007?#△U373 0．152±0．011?#△☆T98G 0．101±0．005?#△☆▲SHG440．180±0．011?#△☆▲★F576．327P0．000

*P<0.05與U87比較 #P<0.05與U251比較 △P<0.05與U118比較 ☆P<0.05與U138比較 ▲P<0.05與U373比較 ★P<0.05與T98G比較(SNK-q檢驗(yàn))

2.4 驗(yàn)證U251中構(gòu)建的穩(wěn)定干擾SNAI2的細(xì)胞系 從蛋白及mRNA2個(gè)水平進(jìn)行驗(yàn)證，Western blot結(jié)果顯示shSNAI2#1及shSNAI2#3干擾效率較高，且相對(duì)于對(duì)照組下降顯著，RT-PCR的結(jié)果與Western blot結(jié)果一致，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2，表3。

圖2驗(yàn)證穩(wěn)定干擾U251細(xì)胞系SNAI2蛋白表達(dá)的情況
Figure2TheverificationoftheproteinexpressionlevelofSNAI2inthestableinterferenceU251

組別相對(duì)表達(dá)量GV248 0．801±0．049shSNAI21#0．127±0．016?shSNAI22#0．289±0．033?#shSNAI23#0．104±0．031?#△shSNAI24#0．385±0．045?#△☆F158．139P0．000

*P<0.05與GV248比較 #P<0.05與shSNAI2 1#比較 △P<0.05與shSNAI2 2#比較 ☆P<0.05與shSNAI2 3#比較(SNK-q檢驗(yàn))

2.5 檢測(cè)U251 shSNAI2細(xì)胞系增殖能力的變化 MTS結(jié)果顯示不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖能力差異顯著，呈逐漸上升的趨勢(shì)(P<0.05)；不同組別細(xì)胞增殖能力差異顯著，GV248顯著高于shSNAI2 1#及shSNAI2 3#細(xì)胞(P<0.05)，且時(shí)點(diǎn)間、組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

組別0h24h48h96hGV248 1．00±0．402．29±0．996．83±1．0414．71±2．50shSNAI21# 1．00±0．371．36±0．522．52±1．026．18±1．79shSNAI23# 1．00±0．251．08±0．373．14±0．407．43±1．92組間 F=27．468 P=0．000時(shí)點(diǎn)間 F=36．225 P=0．000組間·時(shí)點(diǎn)間F=66．571 P=0．000

2.6 檢測(cè)U251 shSNAI2細(xì)胞系遷移能力的變化 劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示U251 shSNAI2細(xì)胞系與對(duì)照組細(xì)胞U251 GV248相比，劃痕修復(fù)能力在24 h出現(xiàn)明顯差異，U251 shSNAI2細(xì)胞系修復(fù)能力顯著低于對(duì)照細(xì)胞，見圖3。

2.7 檢測(cè)U251 shSNAI2細(xì)胞系上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關(guān)分子表達(dá)水平的變化 與EMT相關(guān)的分子包括E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及緊密連接蛋白(Zo-1)，其表達(dá)水平可用來評(píng)估腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示干擾SNAI2的表達(dá)能夠抑制U251的遷移能力，故檢測(cè)U251 shSNAI2細(xì)胞系EMT相關(guān)分子表達(dá)變化。結(jié)果顯示下調(diào)shSNAI2，E-cadherin、Zo-1的表達(dá)顯著升高，Vimentin表達(dá)降低。見圖4，表5。

圖3U251shSNAI2細(xì)胞系遷移能力變化的情況
Figure3ThechangesofthemigrationofshU251cellline

圖4U251shSNAI2細(xì)胞系EMT相關(guān)分子表達(dá)情況
Figure4ThesituationoftheproteinEMTrelatedexpressionlevelofshU251cellline

組別E?cadherinVimentinZo?1GV248 0．263±0．0430．701±0．0820．219±0．026shSNAI21#0．914±0．087?0．285±0．051?0．584±0．043?shSNAI23#0．628±0．060?0．247±0．400?0．462±0．037?F74．81656．49738．965P0．0000．0000．000

*P<0.05與GV248比較(SNK-q檢驗(yàn))

3 討 論

SNAI2位于染色體8q11.21上，是鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAI家族的成員之一，其在正常機(jī)體內(nèi)廣泛表達(dá)，尤其在外周血白細(xì)胞、肝和腦組織中高表達(dá)。近年來許多研究顯示其表達(dá)異常與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展存在緊密聯(lián)系：Atmaca等[7]在其臨床研究中發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織高表達(dá)SNAI2的非小細(xì)胞肺癌患者生存期明顯短于低表達(dá)SNAI2的患者；Merino等[8]在其研究中指出SNAI2可通過調(diào)節(jié)促凋亡因子Bim的表達(dá)調(diào)控細(xì)胞的存活，在乳腺癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用；Findlay等[9]的體外研究顯示SNAI2在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中促進(jìn)其EMT過程的發(fā)生，且參與結(jié)直腸癌細(xì)胞的化療藥物抵抗；Xie等[10]的研究發(fā)現(xiàn)SNAI2可通過抑制E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生；Ganesan等[11]的研究顯示SNAI2可通過調(diào)節(jié)磷脂酶D的表達(dá)促進(jìn)惡性細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移；Little等[12]在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)干擾SNAI2后可導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，并使細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力減弱；Hu等[13]的研究發(fā)現(xiàn)SNAI2在非小細(xì)胞肺癌的化療抵抗的發(fā)生中發(fā)揮促進(jìn)作用。以此為依據(jù)，本研究探討SNAI2在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的影響。

本研究采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)臨床樣本中SNAI2 mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示人腦膠質(zhì)瘤組織中SNAI2的表達(dá)顯著高于良性腦膜瘤組織及正常組織，提示SNAI2可能在腦膠質(zhì)瘤中發(fā)揮著一定的促癌作用；在體外實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步通過構(gòu)建穩(wěn)定干擾SNAI2的U251細(xì)胞系，并對(duì)其增殖、轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行檢測(cè)，MTS結(jié)果顯示在U251細(xì)胞中干擾SNAI2的表達(dá)后，細(xì)胞增殖能力顯著降低，表明SNAI2在人腦膠質(zhì)瘤中發(fā)揮促進(jìn)增殖的作用；劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干擾SNAI2的表達(dá)后，細(xì)胞遷移能力顯著減弱，表明SNAI2對(duì)腦膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移發(fā)揮著促進(jìn)作用。EMT是由上皮細(xì)胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程，在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮著重要的作用[14]，其中E-cadherin、Zo-1和Vimentin是關(guān)鍵的代表性分子。E-cadherin是一種上皮細(xì)胞表達(dá)的重要的黏附分子，細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的過程中往往伴隨著E-cadherin的表達(dá)下調(diào)[15]；Zo-1參與細(xì)胞緊密連接的構(gòu)成，細(xì)胞惡變的過程中其表達(dá)降低，導(dǎo)致細(xì)胞間連接松散，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[16]；Vimentin是構(gòu)成細(xì)胞骨架的重要成分，在細(xì)胞移行、黏附中起關(guān)鍵作用，其在惡性腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)且與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[17]。本研究在干擾SNAI2的表達(dá)后，U251細(xì)胞E-cadherin及Zo-1表達(dá)上調(diào)，Vimentin表達(dá)下調(diào)，表明SNAI2在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中參與促進(jìn)EMT過程的發(fā)生。

綜上所述，可以確認(rèn)SNAI2在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的促癌作用。在下一步研究中，將進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證SNAI2對(duì)腦膠質(zhì)瘤的促進(jìn)作用，并探討其可能的相互作用分子，闡明SNAI2在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制，確定其可能的靶標(biāo)分子，以便為腦膠質(zhì)瘤的臨床診治及基礎(chǔ)研究提供新的依據(jù)。

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ExpressionofSNAI2inhumanmalignantgliomaanditsrelationshipwithcellproliferationandmetastasis

FENG Ji-gao1，MO Ye-he1，XU Peng-xiang1, HU De-xian1，OU YANG Yi-Bin1，ZHANG Cai-cai2*

(1.DepartmentofNeurosurgery，theSecondAffiliatedHospitalofHainanMedicalCollege,Haikou570311，China； 2.DepartmentofPhysiologyTeachingandResearchSection，HainanMedicalCollege,Haikou571199,China)

ObjectiveTo investigate the mRNA expression level of zinc-finger transcription factor-2(SNAI2) gene in clinical tissues, and to identify the effect of SNAI2 on the proliferation and invasion of glioma cancer cells U251.MethodsA total of 37 cases of patients with malignant glioma was selected in our hospital. Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) was used to detect the mRNA level of SNAI2 in tissues and to analyze the relationship between the expression and the clinical pathological data.In vitro, we set up a stable SNAI2 interference(shSNAI2) of glioma cells. The ability of cell proliferation was detected by MTT colorimetric assay(MTS). The ability of cell invasion and metastasis was detected by scratch assay, Western blot was used to detect the expression of E-cadherin, vimentin and Zo-1, related with epithelial mesenchymal transition(EMT).ResultsThe expression of SNAI2 in high-grade gliomas was significantly higher than that in low grade gliomas, benign meningiomas and normal brain tissue, and the expression of SNAI2 in low grade gliomas was significantly higher than that in benign meningiomas and normal brain tissue, and the difference was statistically significant(P<0.05). Spearman correlation analysis was used to compare the relationship between the expression of SNAI2 and the clinical pathological data of patients, and the results show that the expression of SNAI2 and the patient's gender, age and body weight were not statistically related. There was a positive correlation between tumor size and tumor size and tumor grade(P<0.05). The results of MTS experiment showed that the proliferation ability of cells in each group increased with time, and the proliferation ability of shSNAI2 cell line was significantly lower than that of control cell line(P<0.05). The results of scratch repair showed that the ability of cell migration of shSNAI2 cell line was significantly less than that of control cell line. The results of Western blot showed that the expression of E-cadherin and Zo-1 in shSNAI2 cell line was increased, and the expression of Vimentin was decreased(P<0.05), and the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionSNAI2 is highly expressed in human brain gliomas, and is closely related to the size and grade of tumor. It can promote the proliferation and metastasis of glioma cells and the occurrence of EMT.

glioma； zinc finger transcription factor 2； cell proliferation

2016-12-26；

2017-03-05

馮基高(1982-)，男，海南萬寧人，海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事神經(jīng)外科疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail:34436100@qq.com

R730.264

A

1007-3205(2017)11-1265-06

(本文編輯：劉斯靜)