國產與進口血細胞處理機制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量對比

時卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質量法規處，河北 石家莊 050071)

國產與進口血細胞處理機制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量對比

時卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質量法規處，河北 石家莊 050071)

目的通過對比國產智能紅細胞洗滌機及配套耗材與美國ACP215血細胞處理機洗滌制備的效果，評價國產智能紅細胞洗滌機的性能及應用可行性。方法抽取40袋全血,先甘油化,冰凍解凍后隨機分為2組，實驗組應用國產智能紅細胞洗滌機制備冰凍解凍去甘油紅細胞，對照組應用美國ACP215血細胞處理機洗滌制備，對制備的產品按照GB18469-2012版《全血及成分血質量要求》相關標準進行檢測分析。結果2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量均符合國家標準要求，差異無統計學意義(P>0.05)。實驗組甘油殘留量、白細胞殘留量高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，但均能達到國家標準要求。結論國產智能紅細胞洗滌機制備的冰凍解凍去甘油紅細胞產品指標符合國家相關標準；其耗材價格相對較低，維護相對方便，可以為血站節約成本，值得大力推廣和應用。

紅細胞；去甘油化；對比研究

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.11.025

在我國，Rh(D)陰性獻血者稀少，造成相應的血液品種庫存嚴重不足，在臨床稀有血型患者輸血救治特別是大量失血患者搶救輸血時，如何保障Rh(D)陰性血患者醫療急救用血是一個十分迫切的問題[1]。深低溫冰凍保存可大幅度延長紅細胞的體外存活時間和存活率[2]，故國內許多血站均采取甘油化Rh陰性紅細胞后，-80 ℃低溫保存。美國FDA在上世紀80年代初批準冰凍保存紅細胞的有效期為10年[3]。冰凍可延長紅細胞的保存期，且具有可靠的質量，在經過洗滌后，紅細胞的生理形態及生化特性均無明顯改變，適合應用于稀有血型患者的輸血治療[4]。近些年，國內大多血站采用手工法和ACP215血細胞處理機對冰凍的紅細胞進行解凍洗滌，但是傳統的手工開放式洗滌法操作步驟相對復雜，制備時間較長，受人為因素影響較大[5]。我中心最早購置的美國ACP215血細胞處理機近幾年也因為維修保養的不便以及進口耗材的昂貴、消費者多有怨言而利用度下降[6]。血細胞處理機的國產化正處于逐漸摸索投入使用階段，其洗滌效果如何，是否符合質量要求標準，實際制備效果和產品質量有待探討。我中心現試用一種新型國產智能紅細胞洗滌機，本研究將其制備的冰凍解凍去甘油紅細胞與美國ACP215血細胞處理機制備的產品質量進行比較，以評價其可行性，報告如下。

1 材 料 與 方 法

1.1 主要材料 去白懸浮紅細胞(2 U/袋，由本中心提供)，智能紅細胞洗滌機(型號：ZHXD)配套耗材(成都佳穎)，ACP215 血細胞處理機配套耗材(美國血液技術公司)，無菌熔接片(日本泰爾茂公司)，復方甘油溶液(石家莊四藥有限公司)，9% NaCl溶液(北京博得桑特輸血技術公司)，0.9%NaCl溶液(四川南格爾生物醫學股份有限公司)，甘油測定試劑(自制)。所有材料、試劑均在有效期內使用。

1.2 主要設備 智能紅細胞洗滌機(型號：ZHXD)，ACP215血細胞處理機，無菌接駁機(泰爾茂)，血細胞計數儀(COULTER)，765型分光光度計(上海精密科學儀器公司)，-80 ℃低溫冰箱(日本三洋SANYO)，恒溫水浴箱(上海發瑞儀器科技)，全自動細菌培養儀(生物梅里埃)。

1.3 紅細胞甘油化 隨機抽取6 d內2～6 ℃保存的全血(400 mL/袋)，制備成懸浮紅細胞，放置于PVC血液保存袋內，用無菌接駁機接駁,其紅細胞轉移到空袋中。將血袋接駁于甘油化管路,再與甘油袋相連接。將濃度57%左右的甘油緩慢加入到去白懸浮紅細胞中,邊加邊振蕩,以使紅細胞充分、均勻甘油化。室溫靜置30 min，離心去除多余的液體,將其置于-80 ℃低溫冰箱保存。

1.4 紅細胞去甘油化 將冰凍保存1年后的紅細胞從-80 ℃低溫冰箱中迅速取出,放入37 ℃恒溫水浴箱(不斷晃動至紅細胞完全融化)，解凍后隨機分為2組，每組20袋。對照組用美國ACP215血細胞處理機及配套耗材(REF 235)洗滌，按照去甘油化程序相關操作規程[7]進行處理(運行程序已預先設定)。實驗組用國產智能紅細胞洗滌機，將已解凍的冰凍紅細胞血袋與配套的去甘油化管路無菌接駁，放置在搖擺機上，啟動機器，自檢完成后選擇去甘油化程序，安裝耗材，連接洗液袋并打開所有管路夾子，開始自動洗滌。根據不同制備階段加入相應的羥乙基淀粉和氯化鈉溶液，為了保證紅細胞滲透能力的穩定性，應在去甘油的洗滌過程中分別加入9%NaCl高滲溶液和0.9%NaCl等滲溶液，否則易促使紅細胞發生形態、功能的改變，增加紅細胞的破壞率。最后加入100 mL的紅細胞保存液保存紅細胞。2組分別記錄洗滌制備時間，國產智能紅細胞洗滌機用時50 min左右，ACP215血細胞處理機用時60 min左右。

1.5 質量檢測 參照普通洗滌紅細胞的要求稱質量、留樣，對樣品進行無菌接種，在全自動細菌培養儀內培養觀察7 d，應用COULTER AcT.5diff全自動血球計數儀檢測紅細胞的血紅蛋白含量，用Trinder法進行體外溶血試驗檢測游離血紅蛋白值，用Neubaue計數板檢測殘余白細胞數，用過碘酸鈉滴定法測定甘油殘余量[8-10]。

1.6 統計學方法 應用SPSS 16.0統計軟件處理數據，計量資料比較采用獨立樣本的t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

實驗組白細胞殘留量、甘油殘留量均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

組別白細胞殘留量(×107個)甘油殘留量(g/L)血紅蛋白含量(g)游離血紅蛋白含量(g/L)實驗組0．95±0．183．98±1．2341．60±3．230．43±0．65對照組0．71±0．172．93±0．9642．75±4．410．41±0．66t4．2763．0360．9400．960P0．0000．0040．3530．343

3 討 論

眾所周知，Rh(D)陰性血型是稀有血型，在Rh血型者中所占比率不到1%。而我國Rh (D)陰性血型者大約為0.59%，給臨床急診用血帶來一定的困難，存在耽誤患者搶救時機的風險。目前國內許多血站采取甘油化Rh陰性紅細胞，于-80 ℃低溫保存，保存期可達10年，且具備較好的保存質量，在臨床輸注前經過洗滌去甘油化后再應用于患者，是自身輸血及稀有血型輸血不可缺少的手段[11]。冷凍保存紅細胞，既爭取了搶救時間，又極大方便了臨床用血，冰凍解凍去甘油紅細胞是不可或缺的血液制品。目前這種紅細胞制品在國內相當一部分血站仍沿用手工方法制備，工藝較繁瑣，容易受離心機轉速、溫度等因素影響，且開放式制備存在被污染的安全隱患，對操作人員的技術要求也較高,整個添加過程受人為因素影響較大，操作稍有不慎將會直接影響到本類制品的質量，即對患者的用血安全造成威脅[12]。機器替代手工是近幾年發展的方向，機器制備是有效保證血液質量的前提，探討機器標準化制備冰凍紅細胞,可減少人為誤差,提高效率和產品質量。我國從1998年開始逐漸開展了機器洗滌紅細胞技術，應用紅細胞洗滌機制備出冰凍解凍去甘油紅細胞，制備時間短，縮短了臨床患者等待搶救的時間，減少了人工制備的勞動力及血液被污染的機會。但該技術的研發一直存在困難，很多公司生產的儀器并不能達到《全血及成分血質量要求》[13]相關標準，在儀器質量評估方面也存在很大空白[14]。

本研究實驗組應用儀器是我中心新引進的一種國產智能紅細胞洗滌機(型號:ZHXD)，與美國較成熟的ACP215血細胞處理機進行對比研究，結果顯示，2種機型制備的冰凍解凍去甘油紅細胞的各項質量指標均符合國家標準，實驗組白細胞殘留量、甘油殘留量雖高于對照組，但其他各項指標差異無統計學意義。表明國產智能紅細胞洗滌機(型號：ZHXD)與美國ACP215血細胞處理機比較，其制備的冰凍解凍去甘油紅細胞除有小部分的不足(白細胞、甘油殘留量高)，其余指標均無明顯差異。目前有些大中城市的血液中心和中心血站應用的是美國進口的ACP215血細胞處理機，但該儀器價格昂貴，給患者帶來一定的經濟負擔，故在國內廣泛推廣應用存在一定困難。

本研究結果顯示，在甘油殘留量方面國產機器略遜于進口機器，但無菌試驗等各項指標均達到了國家標準的要求，其安全性和有效性是可靠的。有文獻報道美國ACP215血細胞處理機的工序耗時為50～60 min[7]。而國產機器去甘油化進程要快于進口機器，符合冰凍解凍去甘油紅細胞用于臨床急救用血的要求；另一優勢就是節省了資金成本，由于ACP215進口機器必須使用美方配套的一次性耗材，而這些耗材比國產的價格高好幾倍，無形中增加了生產成本，致使許多血站不得不又重新拾起手工開放式洗滌法。國產智能紅細胞洗滌機在洗滌標準達標的前提下，提高了洗滌速度，符合臨床急救用血的迫切需求；另外，其配套耗材價格較低，為血站節約了成本，也能減輕患者的經濟負擔。本研究中國產機器的良好表現，有利于刺激國內更多生產廠家加入到國產紅細胞洗滌機的自主研發行列。

FDA已經批準使用ACP215血細胞處理機制備去甘油紅細胞，可于AS-3中保存2周。國內馮博等[15]嘗試用MAP來延長產品的保存時間，觀察其質量的變化情況。本研究結果顯示國產智能紅細胞洗滌機在洗滌后仍殘留部分白細胞和其他細胞碎片，說明國產機器分離技術還不夠成熟完善；甘油殘存量相對較高，說明在去甘油化的過程中還存在需要繼續完善的地方。但整體上已經符合國家標準，給我國從人工洗滌紅細胞到機器洗滌帶來重大變革。

綜上所述，國產智能紅細胞洗滌機具有我國的自主知識產權，在成本核算和機器的后期維護保養方面更具優勢，開發和使用國產智能紅細胞洗滌機及配套耗材勢在必行，是實現血站自動化、標準化、規范化的必經之路，由人工制備轉化為機器制備模式，應該有廣闊的應用前景和市場價值，值得大力推廣。

[1] 梁世艷，張支鳳，李華領，等.Rh(D)陰性冰凍紅細胞庫的建立及臨床應用[J].衛生職業教育,2012,30(22):134-135.

[2] 馬慶，張嘉敏，李勤，等.深低溫長期保存方法延緩紅細胞衰老的研究[J].臨床輸血與檢驗,2013，15(2):112-115.

[3] 張玉華，徐雷，周虹，等.現代戰爭條件下美軍野戰輸血保障情況分析與思考[J].軍事醫學，2014，38(6)：474-477.

[4] 熊少歡，侯滿意，李婉儀，等.RH(D)陰性冰凍紅細胞質量及臨床分析[J].現代醫院，2015,15(11)：66-67.

[5] 盧少芬，陳志忠，李潔敏，等.BBS 926全自動醫用低速離心機制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量評價[J].中國當代醫藥，2014,21(30)：87-91.

[6] 梁艷.手工密閉式制備冰凍解凍去甘油紅細胞的可行性研究[J].貴州醫藥,2016,40(6):592-593.

[7] 揚麗,張靜，陳健.ACP215處理機制備冰凍解凍去甘油紅細胞與手工制備的對比研究[J].臨床輸血與檢驗，2012，14(2)：156-157.

[8] 冀慧，陳保民.兩種方法測定解凍紅細胞甘油殘留量結果比較[J].中國輸血雜志，2014,27(8)：835-838.

[9] 夏紅英,任芙蓉,陳小林,等.滲透壓法檢測冰凍解凍去甘油紅細胞甘油殘留量的可行性[J].北京醫學,2015,37(6):588-591.

[10] 時卉麗,趙倩,楊鳳霞,等.國產智能紅細胞洗滌機及配套耗材制備冰凍解凍去甘油紅細胞的質量觀察[J].臨床合理用藥雜志,2016,9(22):168-169.

[11] 王林，唐玉清，閆曉鵬，等.冰凍亞型紅細胞制備及使用的全程質量控制[J].中國醫藥科學，2014,4(17)：136-138.

[12] 肖樂宇，任明臣，馬振芳，等.機器法和手工法制備的冰凍解凍去甘油紅細胞的質量比較[J].現代預防醫學，2014,41(11)：3201-3203.

[13] 中華人民共和國衛生部，中國國家標準化管理委員會.中華人民共和國國家標準GB18469-2012全血及成分血質量要求[S].北京:中國標準出版社,2012：8-9.

[14] 時卉麗，牛宏偉，楊鳳霞，等.一種國產紅細胞洗滌機的性能評價[J].中國醫藥導刊，2017，19(1)：79-80.

[15] 馮博，段瀾，龔曉燕，等.MAP液保存的冰凍解凍去甘油紅細胞可保存天數的研究[J].中國輸血雜志，2014,27(11)：1170-1172.

·論著·

2017-07-24；

2017-08-24

河北省醫學科學研究重點課題(20130134)

時卉麗(1978-)，女，河北元氏人，河北省血液中心副主任醫師，醫學學士，從事血液質量安全、血站質量管理研究。

R331.122

B

1007-3205(2017)11-1344-04

(本文編輯：劉斯靜)