幽門螺桿菌感染對慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥因子的影響

王慧敏 戈改真 賀麗瓊

內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院，內蒙古包頭 014010

幽門螺桿菌感染對慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥因子的影響

王慧敏 戈改真 賀麗瓊

內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院，內蒙古包頭 014010

目的 觀察Hp感染對COPD大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥水平的影響。 方法 選取健康雄性大鼠40只，隨機分為對照組和COPD組，每組各20只。COPD組使用香煙造模并檢測是否成功。隨后分別隨機選取每組50%的大鼠制造Hp感染模型，并檢測感染是否成功。最后行支氣管肺泡灌洗液，檢測IL-6﹑IL-8﹑TNF-α﹑中性粒細胞百分數（%）。使用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，P＜0.05為差異有統計學意義。結果 感染Hp的COPD組大鼠支氣管肺泡灌洗液中的IL-6﹑IL-8﹑TNF–α及中性粒細胞百分數（%）均較Hp陰性的大鼠明顯升高，差異具有統計學意義（P＜0.05）。而對照組大鼠Hp感染與否對支氣管肺泡灌洗液中上述炎癥細胞及炎癥因子的影響較小，差異沒有統計學意義（P＞0.05）。 結論 Hp和COPD 有著密切聯系，Hp的感染可以加重COPD的炎癥反應，Hp感染在COPD發病機制中發揮著重要的協同作用，有可能會誘發COPD的急性加重，是COPD 的危險因素之一。

幽門螺桿菌；慢性阻塞性肺疾病；炎癥因子

幽門螺桿菌（Hp）不僅在消化系統疾病中有著十分重要的作用，而且近年來國外發現Hp與許多呼吸系統疾病有所關聯[1-10]，尤其是與慢性阻塞性肺疾病（COPD）關系密切[11-15]。國外已有相關文獻報道，Ali Tabaru等[16]的研究表明，Hp感染的存在會影響COPD患者肺功能。Mitra Samareh Fekri[17]等的研究表明Hp感染的存在可能會使病人易患COPD或導致COPD惡化。但是國內尚缺乏相關研究。本研究旨在發現幽門螺桿菌感染對COPD大鼠支氣管肺泡炎癥水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

大鼠TNF-α ELISA﹑IL-6 ELISA﹑IL-7 ELISA試劑盒（武漢優爾生科技股份有限公司）；將軍牌香煙（每支的焦油含量為15mg﹑煙氣煙堿含量為1.2mg，山東中煙工業公司）；脂多糖（LPS，美國Sigma公司）；80cm×60cm×50cm大小的有機玻璃熏箱（自制）；Hp菌種（佳木斯大學附屬第一醫院微生物室提供）；5%NaHCO3（華北制藥河北華民藥業有限責任公司）；小型動物肺功能儀（北京拜安吉科技有限公司生產，FinePointe RC系統）；顯微鏡（EASTCOLIGHT 9007-1）

表2 幽門螺桿菌對COPD大鼠氣道炎癥因子的影響

表3 幽門螺桿菌對正常大鼠氣道炎癥因子的影響

1.2 COPD大鼠模型的建立

選取健康雄性C57BL/6大鼠40只，4～6周，體質量（56.0±1.6）g，隨機分為COPD組﹑對照組，每組20只大鼠。COPD組分別于第1﹑14天氣管內注入LPS 200μg，第2～40天（第14天除外）將大鼠置熏箱內被動吸煙，每日熏煙2次，每次10支香煙，時間持續1h，兩次熏煙間隔時間4h[18-20]。最后使用小型動物肺功能儀檢測是否造模成功。

1.3 幽門螺桿菌的感染模型

按照文獻[21]接種HP。具體步驟如下：禁食12h后，隨機抽取COPD組大鼠10只﹑對照組大鼠10只。均首先灌飼0.5mL NaHCO3，12h后分別接種制備好的HP標準菌液0.5mL（1×109CUF/mL），連續4次，每次間隔48h。于末次接種后第4﹑8 及12周時，禁食12h分別處死大鼠并檢驗是否感染成功。

1.4 大鼠支氣管肺泡灌洗液

IL-6﹑IL-8﹑TNF-α﹑中性粒細胞百分數（%）的檢測分別使用ELISA試劑盒，具體操作見試劑盒說明。中性粒細胞百分數使用顯微鏡計數。

1.5 統計學方法

采用統計學軟件SPSS13.0版對數據進行統計分析，計量資料采用（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料采用百分數（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 正常大鼠與COPD大鼠氣道炎癥因子的水平

Hp感染前兩組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結果，見表1。COPD組大鼠氣道炎癥水平明顯升高。

表1 正常大鼠與COPD大鼠氣道炎癥因子的水平

2.2 幽門螺桿菌對COPD大鼠氣道炎癥因子的影響

感染Hp的COPD組大鼠與未感染Hp的COPD組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結果，見表2。結果顯示感染Hp的COPD大鼠氣道炎癥水平進一步升高。

2.3 幽門螺桿菌對正常大鼠氣道炎癥因子的影響

感染Hp的對照組組大鼠與未感染Hp的對照組組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結果，見表3。結果顯示感染Hp的對照組大鼠氣道炎癥水平未見明顯升高。

結果表明，Hp感染可以使COPD大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子及炎癥水平顯著增高。而Hp感染對于對照組大鼠的影響相對較小。

3 討論

COPD的主要的病理生理基礎是慢性氣道炎癥反應，其管腔內主要是中性粒細胞﹑嗜酸性粒細胞﹑巨噬細胞等的聚集，IL-8（白細胞介素8）及IL-6（白細胞介素6）是炎癥的主要趨化因子，對炎癥反應有著重要的調節作用[22]。它們的升高可能通過趨化﹑激活中性粒細胞，促使中性粒細胞遷移至炎癥部位，并釋放過氧化物和多種酶，造成氣道損[21]。TNF-α（腫瘤壞死因子α）為一種重要的中性粒細胞趨化因子，由巨噬細胞﹑淋巴細胞﹑肺泡上皮細胞等釋放，能激活中性粒細胞﹑巨噬細胞﹑淋巴細胞等促進炎癥顆粒釋放﹑炎癥細胞的合成及釋放。TNF-α通過刺激壞死因子-KB（NF-KB）DNA的結合活性，誘導患者氣道平滑肌細胞IL-6釋放。本研究結果提示，Hp感染的COPD組大鼠上述炎癥細胞及炎癥因子水平均明顯升高，提示Hp和COPD有著密切聯系，Hp的感染可以加重COPD的氣道炎癥反應，Hp感染在COPD發病機制中發揮著重要的協同作用，Hp感染有可能會誘發COPD大鼠的氣道炎癥加重，從而發生臨床可見的COPD的急性加重，是COPD 的危險因素之一[23]，這對于臨床具有重大的指導意義。對于臨床醫生而言，如果COPD患者檢測Hp呈陽性結果的話，建議行根除Hp治療，這樣有可能降低患者的氣道炎癥，從而減少未來的急性加重風險，這是COPD患者治療目標當中的重要方面，這可以提高患者的生活質量，降低死亡率。從而降低社會和家庭經濟負擔。

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Effect of Helicobacter pylori infection on airway inflammatory factors in rats with chronic obstructive pulmonary disease

WANG Huimin GE Gaizhen HE Liqiong
The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College of Inner Mongolia University of Science & Techology,Baotou 014010,China

Objective To observe the effect of Hp infection on the level of inflammation in bronchoalveolar lavage fluid of COPD rats. Methods A total of 40 healthy male rats were randomly divided into control group and COPD group,with 20 rats in each group.The rats in Group COPD was modeled with cigarette smoke and tested if they were successful,and then 50% rats in each group were randomly selected to make Hp infection model.Finally,bronchoalveolar lavage fluid was used to detect IL-6,IL-8,TNF-alpha,neutrophil percentage(%).SPSS13.0 statistical software was used for data analysis,and P＜0.05 was statistically significant. Results The levels of IL-6，IL-8，TNF-alphaand neutrophil percentage(%) in bronchoalveolar lavage fluid of group COPD infected with Hp were significantly higher than those of Hp negative rats,and the difference was statistically significant.The rats in control group Hp infection has little effect on bronchoalveolar lavage fluid in the inflammatory cells and inflammatory factors,there was no significant difference between. Conclusion Hp and COPD are closely related,and Hp infection can aggravate the inflammatory response of COPD,and it plays an important synergistic role in the pathogenesis of COPD,which may induce acute exacerbation of COPD,and is one of the risk factors of COPD.

Helicobacter pylori; Chronic obstructive pulmonary disease; Inflammatory factors

R563.9

A < class="emphasis_bold"> [文章編號]]

] 2095-0616（2017）21-31-03

2017-08-07）