漿膜腔積液采集后質量控制在細胞學檢查中的必要性

宋鎖柱

（盤錦市傳染病醫院檢驗科，遼寧 盤錦 124000）

漿膜腔積液采集后質量控制在細胞學檢查中的必要性

宋鎖柱

（盤錦市傳染病醫院檢驗科，遼寧 盤錦 124000）

目的 本文旨在分析充池后靜置時間、混勻程度、樣本采集后放置時間對漿膜腔積液細胞學檢測結果的影響。方法 隨機抽取本院在2016年8月采集的32例漿膜腔積液作為研究對象分別進行①、②、③實驗：①混勻樣本充池放置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min后進行細胞計數。②分析混合不均勻樣本，分析混合均勻樣本；③樣本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后進行細胞計數。結果 ①充池后，隨靜置時間推移，白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）數均逐漸增加，0～1min同1～2min比較、2～3min同3～4min比較，白細胞數、紅細胞數差異無統計學意義；0～1min同2～3min、3～4min相比較差異有統計學意義（P＜0.05）；1～2min同2～3min、3～4min分別比較差異有統計學意義（P＜0.05）。②不同混勻程度組間的白細胞、紅細胞計數差異均有統計學意義（P＜0.05）。③白細胞數、紅細胞數隨積液放置時間推移均有所減少。1 h和3 h比較，白細胞數、紅細胞數差異均無統計學意義；1 h和5 h、10 h比較，白細胞數方面差異無統計學意義，而紅細胞數差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 充池后靜置時間、混勻程度、樣本采集后放置時間會對某些檢驗結果產生影響。

漿膜腔積液；質量控制；時間；白細胞；紅細胞

漿膜腔積液標本采集與處理[1]是樣本質量控制環節中的重要部分，采集不當、轉運檢驗不及時、以及檢驗中樣本處理不恰當等都會導致檢驗結果的不準確。現對32例隨機樣本按實驗需求進行下列實驗，僅探尋樣品采集后：樣本充池后靜置時間、混勻程度、樣本采集后放置時間會對某些檢驗結果產生影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 現隨機抽取本院在2016年8月期間采集到的漿膜腔積液32例，包括男18例，女14例，年齡24～65歲，平均（53.3±4.6）歲。其中胸水20例，腹水12例。納入標準：經EDTA-K2（100mg/mL）抗凝（6mL積液加入EDTA-K 20.1mL）后流動性好無凝固現象、無大小凝塊、標識清晰、非膿性及乳糜積液。排除標準：凡不符合納入標準者。

1.2 實驗器材 改良牛鮑血細胞計數板和蓋玻片（上海求精生化儀器試劑有限公司）、OLYMPUS光學顯微鏡（日本OLYMPUS公司）、一次性微量吸管和EDTA-K2真空采集管（煙臺永明醫療科技有限公司）。

1.3 實驗方法 手工顯微鏡鏡檢按《全國臨床檢驗操作規程》第4版[2]操作，對采集的樣本混勻后均分為3份，分別進行試驗①、②、③。①充池后靜置0～1min、1～2min、2～3min、3～4min分別進行細胞計數；②分析混合不均勻樣本，分析混合均勻樣本；③樣本被放置1 h、3 h、5 h、10 h后混勻進行細胞計數。三個實驗均是計數白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）。

1.4 統計學方法 本研究數據均用SPSS 13.0統計軟件處理，計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數資料以率（%）表示,采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。細胞計量單位（109/L）

2 結果

2.1 充池后靜置不同時間的比較 隨靜置時間推移，白細胞、紅細胞計數均逐漸增加。在白細胞、紅細胞各自差異方面：0～1min同1～2min差異無統計學意義；2～3min同3～4min比較差異無統計學意義；1～2min同2～3min、3～4min分別比較差異有統計學意義；0～1min同2～3min、3～4min比較差異有統計學意義，見表1。

表1 充池后靜置不同時間細胞計數的比較

表1 充池后靜置不同時間細胞計數的比較

注：和2～3min、3～4min比較，a P＜0.05；和2～3min，3～4min比較，b P＜0.05

紅細胞78.2±2.3a 88.4±3.0b 106.6±3.3 107.0±3.7時間（min）0～1 1～2 2～3 3～4白細胞1.12±0.04a 1.50±0.09b 1.89±0.11 1.90±0.13

2.2 積液不同混勻程度細胞計數結果的比較 不均勻組同均勻組白細胞數差異、紅細胞數差異有統計學意義，見表2。

表2 積液不同混勻程度細胞計數結果的比較

表2 積液不同混勻程度細胞計數結果的比較

注：和均勻組相比較，a P＜0.05

組別不均勻組均勻組例數32 32白細胞0.76±0.08a 1.05±0.12紅細胞50.4±2.7a 77.5±3.3

2.3 不同放置時間后檢查結果比較 隨放置時間推移，白細胞數、紅細胞數均有所減少。1 h和3 h比較，白細胞數、紅細胞數差異均無統計學意義；1 h和5 h、10 h分別比較，白細胞數差異無統計學意義，而紅細胞數差異有統計學意義，見表3。

表3 積液放置不同時間后細胞計數結果得比較

表3 積液放置不同時間后細胞計數結果得比較

注：和5 h、10 h比較，b P＜0.05

紅細胞88.5±4.5b 86.4±4.1 77.2±4.1 73.7±3.8時間（h）1 3 5 1 0例數32 32 32 32白細胞1.19±0.22 1.16±0.21 1.14±0.18 1.13±0.11

3 討論

引發漿膜腔積液的相關疾病包括結核、胸膜炎、腹膜炎、肺炎、脾破裂、肝硬化、肝癌以及某些腫瘤等疾病，可能出現的臨床癥狀包括營養不良、浮腫、腮腺腫脹、膽汁性肝硬化等[3]。積液按性質一般分為漏出液和滲出液，二者產生的機制和原因不同[4]，前者為非炎癥性，后者為炎癥性。漿膜腔積液檢查有常規的理學檢查，包括積液量、顏色、透明度、凝塊形成、比重及酸堿度等，還有細胞學和化學檢查，包括檢查細胞的數量和種類，檢測蛋白質、葡萄糖、脂類和腫瘤標志物等，此外還發展了特異性化學、免疫學等指標，提高了漿膜腔積液性質診斷的符合率。通過這些檢驗可以鑒別漏出液和滲出液，還可以鑒別良性和惡性積液為臨床找出積液原因提供重要依據[5-7]。近些年又有學者[8]提出用血細胞分析儀對漿膜腔積液進行形態學檢查，但并未顯示良好價值。但也有資料[9-10]顯示儀器法漿膜腔積液細胞計數與手工法具有良好相關性,且具有簡便、經濟、準確性高等優點。但不論是儀器或手工鏡檢法，若積液采集后未能及時送檢并處理，那么放置較長時間的樣本理化性質將發生改變，如糖和蛋白質分解、酶活性降低等，細胞的數量和形態也會發生變化，如細胞數量增多、減少、溶解和腫脹變性等[11]。這些都將加大理學、形態學、生化學的檢驗誤差，甚至有可能會出現臨床無法接受的結果。

本研究的實驗結果顯示，計數池充池后隨靜置時間推移積液內白細胞和紅細胞數量逐漸變化，0～1min同1～2min差異無統計學意義，原因在于此段時間部分細胞還處于懸浮狀態尚未沉于計數池底，細胞重疊未停留在同一平面，所以在初期，視野內細胞數量較少[12]。隨靜置時間的推移，細胞增長快速，2～3min與3～4min差異無統計學意義，因此段時間細胞已全部下沉至計數池底,細胞停留在同一平面計數結果基本穩定，但0～1min、1～2min與2～3min、3～4min分別比較差異有統計學意義（P＜0.05），因此充池后應靜置2～3min后再計數；在本研究中，不均勻組與均勻組的白細胞、紅細胞差異有統計學意義（P＜0.05），原因在于漿膜腔積液由醫生采集后，若實驗室較遠或護理人員工作忙碌，樣本不能夠立即被運送檢驗，積液中的細胞會發生沉淀導致樣本上層細胞減少。因此，檢驗前應充分混勻樣本，否則細胞數會有所減少；本實驗還顯示，隨樣本采集后放置時間延長，積液內白細胞、紅細胞數量均減少，白細胞1 h和3 h、5 h、10 h分別比較，差異無統計學意義，而紅細胞數1 h與3 h比較差異無統計學意義,但與5 h、10 h比較差異有統計學意義（P＜0.05），原因在于，漿膜腔積液離體后，隨放置時間的延長，樣本中的糖分被持續增加的細菌等微生物分解，積液滲透壓被降低，細胞生存能力下降，導致細胞腫脹、破壞溶解致使細胞數量減少[13]。本實驗中雖然白細胞計數隨時間延長減低不明顯，個時間段差異均無統計學意義，但放置3 h的紅細胞與5 h、10 h計數比較已有統計學意義。因此根據本實驗結果，建議積液采集后應在短時間內檢驗完畢，最好不要超過3 h。

綜上所述，在漿膜腔積液檢查的諸多質控環節中本文所論述的充池后靜置時間、混勻程度采集后放置時間對檢驗的準確度會產生一定的影響，在臨床工作中醫、護、技人員加強注意按標準和規范操作是得到及時準確的檢驗結果的前提。

[1] 劉成玉,羅春麗,龔道元,等.臨床檢驗基礎[M].5版.北京:人民衛生出版社,2014:220.

[2] 尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].4版.北京:人民衛生出社,2015:301-316.

[3] 田利榮,徐前.常規細胞形態學檢查漿膜腔積液惡性腫瘤的體會[J].中國衛生檢驗雜志,2012,7(25):1718.

[4] 黃勝起.漿膜腔積液微粒體理化特性及其性質鑒別[D].廣州:暨南大學,2007.

[5] 許文榮,林東紅,李山,等.臨床基礎檢驗技術[M].北京:人民衛生出社,2015:220-221.

[6] 黃中海.白蛋白比值在鑒別滲出液與漏出液中的價值[J].淮海醫藥,2003,21(2):130-131.

[7] 劉建湘,肖清華.胸腔積液結核性胸膜炎患病率和相關成分分析[J].山西醫藥雜志,2014(5):490-491.

[8] 羅麗貞,劉春林,吳清念,等.Sysmex XE-5000血液分析儀體液模式篩查腫瘤細胞價值的評價[J].檢驗醫學,2014,29(2):169-170.

[9] De Jonge R,Brouwer R,de Graaf MT,et al.Evaluation of the new body f luid mode on the Sysmex XE-5000 for counting leukocytes and erythrocytes in cerebrospinal f luid and other body f luids[J]. Cl in Chem Lab Med,2010,48(5):665-675.

[10]Paris A,Nhan T,Cornet E,et al.Per formance evaluation of the body f luid mode on the plat form Sysmex XE-5000 series automated hematology analyzer[J].Int J Lab Hematol,2010,32(5):539-547.

[11]虞紅珍,吳強.漿膜腔積液細胞學檢查中制片技術應用的現狀與進展[J].臨床與實驗病理學雜志,2007,4(31):285-289.

[12]司曉楓,王一雯,龐潔.分析前質量控制與臨床標本采集、保存、運送關系的原則及注意要點[J].甘肅醫藥,2015,1(22):51-55.

[13]周道銀,薛成軍,王學,等.常規細胞形態學檢查對良、惡性漿膜腔積鑒別診斷價值[J].臨床檢驗雜志,2007,4(31):285-289.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.070