金針菇菇腳對肉雞小腸絨毛形態及黏膜免疫指標的影響

高雅松 , 王 健 , 衛佳麗, 陳 默, 宋 慧,2

(1.吉林農業大學生命科學學院 ， 吉林 長春 130118 ; 2.吉林農業大學 教育部食藥用菌工程研究中心 ， 吉林 長春 130118)

金針菇菇腳對肉雞小腸絨毛形態及黏膜免疫指標的影響

高雅松1, 王 健1, 衛佳麗1, 陳 默1, 宋 慧1,2

(1.吉林農業大學生命科學學院 ， 吉林 長春 130118 ; 2.吉林農業大學 教育部食藥用菌工程研究中心 ， 吉林 長春 130118)

為探討金針菇菇腳(Flammulinavelutipesstembase，FVS)對肉雞小腸絨毛形態和黏膜免疫指標的影響，將4 500只1日齡愛拔益加(AA+)肉雞隨機分為5個處理組，每個處理組7個重復，飼喂至43 d。分別于22、43 d測定肉雞小腸絨毛高度(villous height，V)、隱窩深度(crypt depth，C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量。結果顯示，FVS可提高肉雞小腸V/C和小腸黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量。

金針菇 ; 肉雞 ; 小腸 ; 免疫

金針菇菇腳(Flammulinavelutipesstembase，FVS)含蛋白質和糖類等成分，有抗氧化和免疫調節活性[1]。FVS常作為廢棄料被丟棄[2-3]。飼料中添加抗生素導致耐藥性問題，增加消費者對抗生素殘留在禽業生產中的關注度。開發綠色飼料，增強肉雞免疫力成為研究關鍵[4]。

將FVS添加到規模飼養的肉雞飼料中，通過測定肉雞小腸絨毛高度(villous height, V)和隱窩深度(crypt depth, C)、IL-2、IL-4和S-IgA含量，探討FVS對肉雞小腸絨毛形態和黏膜免疫指標的影響，為其深入研究及綜合開發提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 FVS(食用菌生產企業饋贈)，自然風干，粉碎；OCT包埋劑(德國徠卡公司)；雞IL-2、IL-4和S-IgA試劑盒(BPE60056、BPE60055、BPE60021；上海朗頓生物技術有限公司)；其余化學試劑均為分析純。

1.2 試驗動物及分組 4 500只1日齡(AA+)肉雞(吉林省東豐縣鵬翔牧業有限責任公司)隨機分為5個處理組：對照組(飼喂吉林省東豐縣鵬翔牧業有限責任公司常規日糧)、低劑量組(飼喂含2%FVS的常規日糧)、中劑量組(飼喂含4%FVS的常規日糧)、高劑量組(飼喂含6%FVS的常規日糧)和階段飼喂組(于試驗1～7、15～21、29～35 d飼喂含6%FVS的常規日糧)，除對照組外各劑量組日糧去除預混料中的抗蟲劑、多酶制劑及植物營養添加劑等成分，不添加任何抗生素。每個處理組7個重復，試驗期43 d。所有日糧均按等氮等能原則配置，營養標準滿足NRC(1994)，以《GB/T 19664—2005》為飼養標準，常規免疫，自由采食和飲水。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理 于22 d和43 d，每個組重復3只AA+肉雞，頸動脈放血處死，取十二指腸、空腸、回腸各2 cm腸段。

1.3.2 小腸絨毛形態的測定 4%多聚甲醛固定，30%蔗糖脫水。Leica CM1950冷凍切片機制作組織切片，H.E.染色，中性樹膠封片。Leica DM2000生物顯微鏡觀察小腸絨毛形態。各腸段取不相鄰3張切片進行拍照，每張切片選取3處走向完整絨毛，Image-Pro Plus 6.0測量V和C。

1.3.3 小腸黏膜IL-2、IL-4和S-IgA含量的測定 生理鹽水沖去腸道內容物，刮取腸黏膜，生理鹽水10倍稀釋，4 ℃勻漿，3 500 r/min(4 ℃)離心15 min，取上清。ELISA法測定十二指腸、空腸和回腸黏膜上清細胞因子IL-2、IL-4和S-Ig A含量，按試劑盒說明書進行測定。

1.3.4 數據處理與分析 SPSS22.0軟件進行統計學處理， Ducan進行多重比較，試驗結果以平均值±標準誤(x±Sx)表示。

2 結果與分析

2.1 FVS對肉雞小腸絨毛形態的影響

2.1.1 如表1，22日齡和43日齡，低劑量組和中劑量組十二指腸V/C顯著高于對照組(Plt;0.05),高劑量組和階段飼喂組十二指腸V/C與對照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。

2.1.2 FVS對肉雞空腸絨毛形態的影響 如表2，22日齡，階段飼喂組空腸V/C顯著高于對照組(Plt;0.05)，各劑量組空腸V/C與對照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。43日齡，各組間空腸V/C無顯著差異(Pgt;0.05)。

表1 FVS對肉雞十二指腸絨毛形態的影響 (n=21)

注：同列數據后所標字母相異表示差異顯著(Plt;0.05)，所標字母相同表示差異不顯著(Pgt;0.05)，下表同

表2 FVS對肉雞空腸絨毛形態的影響 (n=21)

2.1.3 FVS對肉雞回腸絨毛形態的影響 如表3，22日齡，低劑量組和階段飼喂組回腸V/C顯著高于對照組(Plt;0.05)，中劑量組和高劑量組回腸V/C與對照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。43日齡，中劑量組和階段飼喂組回腸V/C顯著高于對照組(Plt;0.05)，低劑量組和高劑量組回腸V/C與對照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。

2.2 FVS對肉雞小腸黏膜免疫指標的影響

2.2.1 FVS對肉雞小腸IL-2含量的影響 如表4，22日齡，各劑量組和階段飼喂組肉雞小腸IL-2含量與對照組相比無顯著差異(Pgt;0.05)。 43日齡，階段飼喂組回腸IL-2含量顯著高于對照組(Plt;0.05)。

表3 FVS對肉雞回腸絨毛形態的影響 (n=21)

表4 FVS對肉雞小腸IL-2的影響 (n=21)

2.2.2 FVS對肉雞小腸IL-4的影響 如表5，22日齡，高劑量組十二指腸、空腸和回腸IL-4含量顯著高于對照組(Plt;0.05)。43日齡，低劑量組、高劑量組和階段飼喂組十二指腸IL-4含量與對照組無顯著差異(Pgt;0.05)，各劑量組空腸和回腸IL-4含量與對照組無顯著差異(Pgt;0.05)。

表5 FVS對肉雞小腸IL-4的影響 (n=21)

2.2.3 FVS對肉雞小腸S-IgA的影響 如表6，22日齡，中劑量組與階段飼喂組十二指腸S-IgA含量顯著高于對照組(Plt;0.05)，低劑量組空腸S-IgA含量顯著高于對照組(Plt;0.05)，中劑量組和階段飼喂組回腸S-IgA含量顯著高于對照組(Plt;0.05)。43日齡，各劑量組十二指腸S-IgA含量無顯著差異(Pgt;0.05)，低劑量組和階段飼喂組空腸和回腸S-IgA含量與對照組無顯著差異(Pgt;0.05)。

3 討論

3.1 FVS對肉雞小腸絨毛形態的影響 雞腸黏膜生長、發育及健康狀況直接影響其生長發育和免疫功能[5]。前期研究結果表明，FVS可促進肉雞生長后期十二指腸和空腸發育。絨毛高度的增加使腸道表面積增加可促進吸收和消化[6]。邢亞麗等研究表明，樹舌發酵浸膏多糖可顯著改善肉雞小腸黏膜結構，維持腸黏膜屏障結構，促進肉雞健康生長[7]。V/C綜合反映小腸的功能狀態，比值增大，絨毛吸收能力變強。本試驗結果提示，FVS可提高肉雞小腸吸收能力。

表6 FVS對肉雞小腸S-IgA的影響 (n=21)

3.2 FVS對肉雞小腸黏膜免疫指標的影響 分泌型IgA(S-IgA)是黏膜表面主要的免疫球蛋白，黏膜免疫系統可抵抗病原菌入侵[8]。IL-4主要由Th2細胞分泌，促進IgA的分泌。Th2細胞在小腸黏膜中表達量較高。研究結果提示，FVS可提高肉雞黏膜免疫功能。張彤瑤等研究表明，FVS可提高肉雞血清IL-2和Ig-A含量，增強肉雞T、B淋巴細胞免疫功能[9]。腸黏膜免疫功能與腸道菌群共同維持腸道健康。曾巧莉等研究結果顯示，日糧中添加FVS可改善肉雞腸道菌群結構[10]。根據以上結果可以推測FVS提高肉雞免疫功能同時促進腸道有益菌生長。

4 結論

日糧中添加FVS可促進小腸吸收和消化功能，增強肉雞黏膜免疫功能。

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EffectsofFlammulinavelutipesstembaseonMorphologyandImmuneIndexesofBroilerssmallintestinalmucosa

GAO Ya-song1, WANG Jian1, WEI Jia-li1, CHEN Mo1, SONG Hui1,2

(1. School of Life Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China; 2. Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

The experiment was conducted to study the effects of different contents ofFlammulinavelutipesstembase (FVS) as dietary supplements on morphology and immune indexes of broilers small intestinal mucosa. A total of 4500 one-day-old Arbor Acre+ (AA+) broilers were randomly divided into five groups with seven replications per group. The experimental period was 43 days. The detection indexes at 22 and 43 days were the villus height (VH, V), crypt depth (CD, C), IL-2, IL-4 and S-IgA of small intestinal. We concluded that diets of FVS could improve V/C, IL-2 IL-4 and S-IgA content of broilers.

Flammulinavelutipes; broilers ; intestinal ; immune

SONG Hui

S831.5

A

0529-6005(2017)10-0051-04

2016-12-26

吉林省經濟菌物創新平臺(2014-2016)

高雅松(1988-)，女(回族)，碩士，研究方向為生物化學與分子生物學，E-mail:gaoyasong2016@126.com

宋慧，E-mail:songhuinongda@163.com