寒熱交替刺激對正常及免疫低下大鼠肺及皮毛組織結構的影響

梁 銳，程天虹，張瑞卿，楊 蓉，趙延龍，郭曉峰，李俊蓮

（山西中醫藥大學，山西太原030024）

皮膚是人體抗御外邪的第一道屏障，若皮毛受到邪氣侵襲，正虛抗邪無力，則邪氣入里，內舍于肺。而“肺主皮毛”，肺傷，同樣也會引起皮毛發生變化。肺與皮毛在生理上同源同功，互助互用，在病理上相互影響，共同為病。本研究從中醫整體觀念出發，基于《黃帝內經》中“肺主皮毛”，“皮毛者，肺之合也”的基本理論以及“天人合一”的基本思想，使用人工氣候箱及氫化可的松制備寒熱刺激與免疫低下大鼠模型，采用玉屏風散對其干預，通過觀察寒熱環境及免疫低下大鼠肺與皮毛組織結構變化，探討寒熱刺激對大鼠肺與皮毛組織的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SPF級健康雄性Wistar大鼠108只（由中國人民解放軍醫學科學院實驗動物中心提供），體質量180~220 g，合格證號為SCXK-（軍）2012-0004。實驗動物環境設施符合I級標準。室溫20℃~25℃，相對濕度為60%~80%，自然采光。自由進食飲水，以清潔級飼料喂養，適應性飼養1 w后開始實驗。

1.1.2 藥物與試劑 氫化可的松注射液，規格：20mL：100 mg，批號：H12020887，天津金耀藥業有限公司。脫毛劑，規格：100 mL：3.57 fl.oz；批號：50RF6102，廣東省廣州市瑪貝拉化妝品有限公司。玉屏風顆粒，規格：5 g×21 袋，批號：Z10930036，國藥集團廣東環球制藥有限公司。

1.1.3 實驗儀器 烘干箱：DZF-6050型，上海善志儀器設備有限公司；生物顯微鏡：ZL2800T型，上海奮業光電儀器設備有限公司；人工氣候箱：LRH-800-GSI型，韶關市泰宏醫療器械有限公司（珠江牌培養箱）；電子天平：FA2204型，上海皓莊儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 SPF級健康雄性Wistar大鼠108只，按照隨機數字表法分為正常常溫組（A組）、正常寒熱交替組（B組）、正常寒熱交替加中藥干預組（C組）、免疫低下常溫組（D組）、免疫低下寒熱交替組（E組）、免疫低下寒熱交替加中藥干預組（F組）6組，每組18只。于造模前測體質量，觀察精神狀態、活動情況、飲食飲水量、毛色、皮膚、關節及二便等情況。

1.2.2 造模 ①免疫低下大鼠模型的制備［1］。適應性飼養結束后，免疫低下常溫組（D組）、免疫低下寒熱交替組（E組）、免疫低下寒熱交替加中藥干預組（F組）各組大鼠均皮下注射免疫抑制劑氫化可的松注射液20 mg/（kg·d），連續5 d。②寒熱刺激大鼠模型的制備［2-4］。低免模型造模成功后，正常寒熱交替組（B組）、正常寒熱交替加中藥干預組（C組）、免疫低下寒熱交替組（E組）、免疫低下寒熱交替加中藥干預組（F組）各組大鼠每天定時置于人工氣候箱喂養，并設定RH（空氣中實際含量占同等溫度下飽和含水量的百分比值）、T（溫度）。寒刺激設定 RH（50±4）%，T（0±2）℃，每天40 min；寒刺激結束后接著進行熱刺激，熱刺激設定 RH（50±4）%，T（33±2）℃，每天 20 min。造模組大鼠每天定時接受1次寒熱交替刺激，其余時間為常溫環境喂養。

1.2.3 藥物干預 每天定時將寒熱交替加中藥干預組的大鼠置于人工氣候箱接受寒熱交替刺激后，按中藥給藥劑量等效換算方法計算，將玉屏風顆粒成人每日所需藥量換算成大鼠所需藥量為25 g/kg［5］，連續灌胃 28 d，其余時間為常溫環境喂養。實驗期間動物均自由進食飲水。

1.2.4 檢測指標 實驗第7天、第14天、第28天，隨機抽取每組大鼠各6只，于檢測前禁食禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）進行麻醉，取適量脫毛劑給大鼠背部皮膚局部進行脫毛，打開胸腔，取兩葉右肺及1 cm×1 cm的背部皮膚。將右肺及皮膚用生理鹽水沖洗干凈后，分別置于提前配置好的4%甲醛溶液中固定備用。取大鼠肺及皮膚組織經中性甲醛緩沖液固定，多級酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片厚度約3~4 μm，作HE染色。

對比觀察各組之間分別于第7天、第14天、第28天的病理組織學改變，本實驗選擇在光鏡下觀察，物鏡×4，目鏡×10 倍數。

2 結果

2.1 各組大鼠第7天、第14天、第28天肺部病理組織結構

結果見圖1~圖3。

圖1 HE染色檢測各組大鼠第7天肺組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖1提示第7天：A組肺組織未見明顯異常；B組可見局部肺泡萎陷，淋巴細胞及少量中性粒細胞浸潤，纖維組織增生；C組可見細支氣管周灶狀淋巴細胞浸潤；D組可見細支氣管、小血管、肺實質小灶淋巴細胞浸潤，肺泡內灶狀組織細胞浸潤；E組可見部分區域肺泡萎陷，淋巴細胞、漿細胞浸潤，纖維組織增生呈實質性變化；F組可見細支氣管及肺泡周圍灶狀淋巴細胞浸潤，局灶細支氣管周圍組織細胞沉積。

圖2 HE染色檢測各組大鼠第14天肺組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖2提示第14天：A組肺組織未見明顯異常；B組小血管充血，部分區域肺泡隔增厚，淋巴細胞浸潤，纖維組織增生；C組可見細支氣管及血管周圍多灶狀淋巴細胞浸潤；D組可見部分區域肺泡隔增厚，慢性炎細胞浸潤，纖維組織增生；E組可見部分區域肺泡隔增厚，慢性炎細胞浸潤，纖維組織增生；F組部分肺泡隔膜增厚，慢性炎細胞浸潤，纖維組織增生。

圖3 HE染色檢測各組大鼠第28天肺組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖3提示第28天：A組肺組織未見明顯異常；B組可見支氣管、細支氣管及小血管周圍多灶慢性炎細胞浸潤，部分肺泡上皮及細支氣管上皮增生，局灶乳頭狀增生，局灶區域肺泡隔增厚，纖維組織增生，慢性炎細胞及組織細胞浸潤，部分區域肺泡擴張融合；C組可見小血管周慢性炎細胞及少量中性粒細胞浸潤；D組可見細支氣管、小血管周多灶淋巴細胞浸潤，肺泡隔增厚，淋巴細胞浸潤，部分肺泡腔內大量組織細胞沉積；E組可見細支氣管、小血管周多灶慢性炎細胞、中性粒細胞浸潤，部分肺實質大片狀慢性炎細胞浸潤及纖維組織增生，肺泡萎陷，組織細胞沉積；F組近胸膜處小片狀慢性炎細胞及少量中性粒細胞浸潤，纖維組織增生。

2.2 各組大鼠第7天、第14天、第28天皮膚病理組織結構

結果見圖4~圖6。

圖 4提示第 7天 A、B、C、D、E、F 組皮膚組織均未見明顯異常。

圖5提示第14天A、B、C、D組皮膚組織均未見明顯異常；E組可見局灶周圍少量慢性炎細胞浸潤；F組可見小血管周小灶狀淋巴細胞浸潤。

圖4 各組大鼠第7天皮膚組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖5 各組大鼠第14天皮膚組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖6 各組大鼠第28天皮膚組織結構病理改變（光學顯微鏡，×400）

圖6提示第28天A、B、C、F組皮膚組織均未見明顯異常；D組可見真皮少量慢性炎細胞（淋巴）浸潤；E組真皮少量慢性炎細胞浸潤。

3 討論

中醫學認為“肺主皮毛”，肺通過宣發作用，輸精于皮毛，其中也包括衛氣的宣發。肺損傷，會使衛氣“溫分肉、充皮膚、肥腠理、司開合”的功能受到影響。衛氣防御外邪的功能受到限制，邪氣乘虛而入導致人體發病［6-7］。本實驗研究結果顯示，同期寒熱交替刺激環境下大鼠肺組織存在慢性炎細胞浸潤、淋巴細胞浸潤，纖維組織增生，肺泡萎縮等不同程度的損傷；玉屏風散干預后得以改善。而皮膚組織的病變程度則不明顯，僅表現為低免模型組皮膚組織出現少量淋巴細胞浸潤。表明肺為嬌臟，不耐寒熱，在皮膚與肺的寒熱交替刺激下，肺組織比皮膚更容易受到損傷，這可能與大鼠皮毛組織較人體更致密有關系，其內在機制還需進一步探究。